一株海洋拮抗菌的筛选与鉴定

通过平板分离、摇瓶发酵,从样品中分离到1株对枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、大肠杆菌等指示菌具有较强拮抗作用的菌株HY4,通过菌落形态、镜检、生理生化试验和对菌株16S rRNA基因序列遗传分析对菌株进行鉴定,发现该菌株跟芽孢杆菌属（Bacillus）的多数菌株序列有99%的相似性,将该菌株命名为芽孢杆菌HY4。当培养时间为48 h时,菌株的生物量达到最大值,OD600nm为2.49,此时菌株对枯草芽孢杆菌和藤黄八叠球菌的抑菌活性也达到最高,透明圈直径分别为1.38 cm和1.13 cm,当培养至60 h时,菌株对大肠杆菌的抑菌活性也达到最大,透明圈直径为1.13 cm,之后随着培养时间的延长,抑菌活性反而逐渐降低。     

荸荠表面拮抗细菌的分离鉴定及其表面抑菌活性

为探究荸荠表面泥土中拮抗微生物的作用,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为筛选测试菌株,对泥土中的拮抗细菌进行分离,采用菌体形态、生理生化特征及16S rDNA基因序列分析对筛选菌株进行鉴定,并考察其发酵滤液对荸荠表面微生物的影响。结果表明,从带泥荸荠表面泥土中分离出2株拮抗细菌WB22、WB39,经鉴定其分别为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)。2株细菌发酵滤液对荸荠表面的细菌、酵母菌和霉菌数均有一定的抑制作用。其中,B.amyloliquefaciens对细菌、酵母菌、霉菌的抑菌率分别为17.42%、9.05%和13.74%,且对球菌的抑制作用强于杆菌,对G+菌的抑制作用强于G-菌。而P.geniculata对细菌、酵母菌、霉菌的抑菌率分别为20.29%、4.64%和16.14%,对球菌和杆菌、G+菌和G-菌均具有较强的抑制作用。本研究为今后荸荠生物贮藏保鲜技术的开发提供一定的理论依据。     

芒果露水斑病病原菌分离鉴定及其拮抗菌筛选

目的:明确芒果\     

采后番木瓜果实炭疽病病原菌分离鉴定及其拮抗菌的筛选

从采后发病番木瓜果实上分离炭疽病的病原菌,同时采用平板对峙法和滤纸片法从番木瓜果园土壤中筛选得到炭疽菌的拮抗菌W-2。通过形态学和分子生物学分别鉴定了病原菌和拮抗菌相关种属,并测试了拮抗菌W-2的拮抗活性。结果表明:番木瓜炭疽病病原菌鉴定为番木瓜炭疽菌Glomerella magna,拮抗菌W-2为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。拮抗菌W-2能够引起Glomerella magna菌丝体膨大和孢子畸形,且W-2浓度为1×10⁸ CFU/mL时,对菌丝生长抑制作用最强,浓度为1×10⁸和1×10⁹ CFU/mL时,对孢子萌发的抑制作用最为显著(P<0.05)。活体生防实验表明,浓度为1×10⁸ CFU/mL的W-2菌悬液处理能够有效控制番木瓜果实炭疽病病斑的扩展,并显著降低果实的发病率(P<0.05)。     

微波辅助提取芒果核多酚及其抑菌活性的研究

研究芒果核多酚微波辅助提取的最佳工艺,考察芒果核多酚提取液体外抑菌活性。采用单因素及正交实验,以芒果核多酚得率为指标,考察乙醇浓度、料液比、微波提取功率和提取时间对微波提取芒果核多酚得率的影响。采用滤纸圆片法考察芒果核多酚抑菌活性。结果显示,芒果核多酚最佳微波提取工艺为:乙醇浓度60%,料液比1∶20(g/mL),微波功率340W,微波提取时间60s,在此条件下芒果核多酚得率为9.27%±0.54%。芒果核多酚提取物对受试菌均有一定的抑制作用,其中对表皮葡萄球菌的抑制作用较强。本文为进一步开发芒果核的利用价值提供了一定理论依据。      

烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性的测定

为有效防治烟草青枯病,从贵州省青枯病迟发烟地和不发烟地土壤中筛选出15株拮抗菌,对拮抗菌的拮抗能力进行了鉴定。筛选出拮抗力较强的3个菌株(LCA-9、PCM-4、SXM-2),并对3菌株的抗菌物质进行了粗提,检验其抑菌活性。结果表明:3种菌的发酵分泌液对烟草青枯病均有一定的抑制作用,其中SXM-2发酵液的抑菌活性较大、效果较好。     

一株放线菌菌株HDF-1的分离、鉴定及抑菌活性研究

从黑河湿地土壤样品中分离得到一株中度嗜碱放线菌HDF-1,适宜生长pH值为8～10,培养时可以向细胞外分泌蛋白酶、淀粉酶,不能分解含硫氨基酸产生硫化氢,不能产生胞外纤维素酶。菌株HDF-1能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖以及麦芽糖作为碳源;该菌株代谢产物中含有抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的活性物质,抑菌圈直径达到了15.2 mm,而对黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉（Penicillium chrysogenum）和大肠杆菌（Escherichia coli）的生长没有抑制作用。根据菌株HDF-1的形态特征、生理生化特征及其16S rRNA系统进化分析,将该菌株鉴定为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

抗铜绿假单胞菌南极微生物的筛选、鉴定及其抑菌谱研究

该研究采用稀释涂布平板法从南极团结湖沉积物中分离、纯化南极微生物,采用双层平板法和琼脂扩散法从中筛选铜绿假单胞菌的拮抗菌,通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析对筛选菌株进行菌种鉴定,并测定其抑菌谱。结果表明,共分离纯化出64株南极微生物,8株对铜绿假单胞菌具有抑制作用,其中菌株NO.TJ31的抑制效果最好,抑菌圈直径达（22.3±0.7） mm,经鉴定,其为弗氏甲基杆菌（Methylobacterium frigidaeris）,菌株NO.TJ31对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯氏菌都具有一定的抑制作用,具有较广的抑菌谱。     

一株拮抗酿酒葡萄灰霉病的枯草芽孢杆菌T3筛选、鉴定及抑菌分析

为筛选出对酿酒葡萄灰霉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从酿酒葡萄根际土壤进行微生物分离,以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为靶标菌株,采用牛津杯法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rDNA进行鉴定分析,对拮抗菌进行生长特性及抑菌分析。结果表明:筛选出一株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)具有显著抑制作用的T3菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),培养24~48 h T3菌株进入稳定期,最适的生长温度为37 ℃,最适pH为7.0。T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)MIC为3.6×10⁵ CFU/mL,MBC为3.6×10⁶ CFU/mL,3.6×10⁹ CFU/mL T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌直径为31.6±0.2 mm(P<0.05),抑菌效价为158.0±1.0 mm/mL(P<0.05)。扫描电镜观察T3菌株造成灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌丝畸形、扭曲、顶端膨大、原生质收缩、孢子稀松,抑制菌丝生长及孢子萌发。本实验为酿酒葡萄灰霉病的生物防治提供新的微生物资源,具有进一步研究价值。     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

芒果核提取物的抑菌活性组分分析

对芒果核乙醇提取物采用AB-8大孔树脂和SephadexLH-20柱进行初步纯化得到不同级分。抑菌实验表明,芒果核多酚在一定的浓度下对供试的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄葡萄球菌都有较强的抑菌活性,随着浓度的升高,抑菌效果也明显升高,但是对供试的两种真菌均无明显抑菌活性;不同级分芒果核多酚的抑菌活性不同,芒果核多酚经SephadexLH-20柱分离所得的组分III是芒果核多酚的主要抑菌活性组分,结合HPLC-ESI-MS的分析,表明芒果核多酚的抑菌活性组分主要为含有不同取代度的没食子酰基葡萄糖类物质。     

烟草疫霉拮抗菌筛选、鉴定及发酵条件研究

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,筛选出5 株对烟草疫霉有较强拮抗作用的菌株。其中一菌株抑菌活性最强且拮抗效果稳定,综合形态学、生理生化及分子生物学实验可以将其鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus ）,记为1205。该菌株现已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO.M2012382。经过对1205菌株的液体摇瓶发酵条件研究,结果表明,1205菌株摇瓶振荡的最适培养条件：培养基为NYBD,接种量为1%,初始pH值为6.0,培养温度为28℃,装液量为20mL/100mL,摇床转速为160r/min,培养时间为28h。     

桃褐腐病菌拮抗酵母的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

以北京平谷桃果实表皮上分离得到的45株酵母菌为出发菌株,采用平板对峙法,筛选对桃褐腐病菌（Monilinia fructicola）具有较高拮抗作用的生防酵母菌。结果表明,共筛选出具有较好抑制效果的酵母菌6株,其中菌株MLL-9-1拮抗活性最强,对桃褐腐病菌的抑菌率达77.91%;活体筛选试验结果表明,该菌株对桃褐腐病的抑制率达50.30%。生防相关性状检测结果显示,该菌株能够产生蛋白酶,透明圈直径达30.5 mm,说明该菌主要通过分泌蛋白酶达到抑制病原菌的效果。经形态学、生理生化试验及26S rDNA序列分析,鉴定该菌为葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）。     

桃果实褐腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗活性

以桃褐腐菌(Monilinia fructicola)为靶菌,采用稀释分离法和平板对峙法从桃园土壤中筛选出对病原菌有较强拮抗作用的菌株12a和14b。通过离体和活体实验对拮抗菌抑菌活性进行研究,经菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌株鉴定。结果表明:菌株12a和14b分别鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),其无菌发酵滤液和挥发性代谢产物对桃褐腐菌的生长有显著的抑制作用,其中12a挥发性代谢产物对其菌丝生长的抑菌效果更为显著(p<0.05)。两株拮抗菌的菌液浸泡和熏蒸桃果实,延缓了桃褐腐病发病时间,有效地控制了病斑的扩展。      

链霉菌Streptomyces sp. FJS31-2次级代谢产物UK-78623的分离鉴定及抑菌活性研究

该研究对卤化II型聚酮类抗生素zunyimycins产生菌链霉菌（Streptomyces sp.）FJS31-2的次级代谢产物进行挖掘。次级代谢产物经乙酸乙酯萃取浓缩后,依次采用硅胶柱层析法、薄层层析（TLC）法、高效液相色谱（HPLC）法等方法进行分离和纯化,通过质谱（MS）法和核磁共振（NMR）等分析单体化合物的结构,并采用滤纸片法对其抗菌活性进行测试。结果表明,初次从该菌发酵物中分离得到多环内酯类化合物UK-78623,其对小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）具有明显抑制作用,其抑菌圈直径为25.2 mm。     

白色类诺卡氏菌的分离鉴定及其抗菌活性初探

该研究对白色类诺卡氏菌（Nocardioides albus）进行分离鉴定,并通过温度、紫外、酸碱处理,以绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、暗黑微绿链霉菌（Streptomyces atrovirens）为指示菌,用琼脂打孔法进行抑菌实验;用药敏片法进行药敏实验,初步探讨分离菌株的药物敏感性以及抑菌性。结果表明,紫外作用30 min及温度对其抑菌性影响不大;强酸、强碱环境中白色类诺卡氏菌基本没有抑菌活性。白色类诺卡氏菌对抗生素较为敏感,药敏性较高。     

青梅抑菌作用及其抑菌成分的分离鉴定

研究青梅的抑菌作用,并利用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)测定青梅汁透析液(小分子)的化学成分,对其抑菌成分进行分析和讨论。结果表明:青梅汁对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌3种菌种均有抑制作用。且青梅汁经高温处理后,仍具有较强的抑菌作用。青梅汁对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为40%,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为70%,对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度为60%。青梅汁透析液经GC-MS共分离得出15种成分,其中酸及酸酐类物质含量最高,为63.70%;醛类次之,为18.10%;其他依次为酮类,2.13%,酯类,1.41%。实验结果提示在青梅汁主要功效成分中,顺丁烯二酸类和糠醛类物质可能与青梅汁的抑菌作用有关。