东海中华管鞭虾多酚氧化酶(PPO)的纯化及特性研究

本文采用匀浆浸提法提取中华管鞭虾(Solenocera crassicornis,S. crassicornis)多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO),经硫酸铵质量分级、离子交换、凝胶过滤纯化后,以左旋多巴胺(L-DOPA)为底物研究其底物专一性和动力学特性,并选取不同抑制剂和金属离子探讨对该PPO的抑制影响。结果显示,匀浆浸提法提取PPO的最佳条件为料液比1:2(W/V)、p H 7.5、浸提3 h、温度50℃,从100 g中华管鞭虾中获取的PPO的产量和纯化倍数分别是1.2%和25.9,中华管鞭虾PPO对L-DOPA和儿茶酚具有很显著地催化氧化作用(p≤0.05),Km值为分别是3.8 mM和8.12 mM,说明该酶为儿茶酚家族酶。PPO活性对苯硫脲、抗坏血酸、柠檬酸较为敏感,能显著被Cu~(2+)、Zn~(2+)、乙二胺四乙酸(EDTA)抑制。结果表明,中华管鞭虾PPO可能是活性部位含Cu~(2+)的金属酶,为控制中华管鞭虾黑变提供基础的信息。     

响应面法优化金银花多酚氧化酶提取工艺

以金银花为原料,采用匀浆浸提法提取多酚氧化酶,利用单因素试验和响应面优化法对料液比、提取pH值、聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone,PVP）添加量和浸提时间等工艺条件进行分析与优化。结果表明：匀浆浸提工艺参数对金银花多酚氧化酶提取有显著影响,影响显著顺序为缓冲液pH值＞料液比＞浸提时间＞PVP添加量。金银花多酚氧化酶匀浆浸提优化工艺参数：料液比1∶6.29（m/V）、缓冲液pH 8.03、PVP添加量1 g/100 mL、浸提时间1.71 h,在此条件下获得酶比活力为667.564 U/mg,所得多酚氧化酶提取回归模型显著（R2=0.9425）,拟合性好,可用于预测多酚氧化酶的提取效果。     

中华管鞭虾多酚氧化酶的分离制备

对中华管鞭虾中多酚氧化酶(PPO)的提取分离及其影响因素进行研究,讨论了新鲜管鞭虾的保藏温度、提取方法、浸提时间、缓冲液pH值、料液比和超声波提取等单因素影响,在此基础上采用正交法对各因素进一步优化。结果表明:在室温状态下,使用溶液浸提法,最佳时间为8h,最佳料液比为1:2,缓冲液最适pH值为8,超声时间为20min。     

响应面法优化无核白葡萄多酚氧化酶的提取工艺

为了优化无核白葡萄多酚氧化酶的提取工艺。采用丙酮提取法、超声波辅助浸提法和缓冲溶液浸提法分别提取无核白葡萄多酚氧化酶,在单因素实验料液比、提取时间和缓冲液pH的基础上,利用响应面法优化无核白葡萄多酚氧化酶提取条件。结果表明,多酚氧化酶提取的最佳工艺为料液比1:1.8 (g/mL),浸提时间2.9 h,缓冲液pH5.8,无核白葡萄多酚氧化酶比活力为(378.12±1.3) U/mg,与模型预测值非常接近,拟合性好。采用响应面法分析,能较为准确的预测实验结果,以期为无核白葡萄多酚氧化酶纯化、性质、结构研究提供基础。     

龙井茶树多酚氧化酶蛋白提取方法的优化

目的优化缓冲液匀浆提取茶树多酚氧化酶的方法。方法以龙井43号茶树鲜叶为材料,采用缓冲液匀浆浸提法提取茶树多酚氧化酶,分别进行不同单因素浸提优化试验,测定比较提取的粗酶活性,确定适合的浸提条件。结果以鲜叶标准为一芽二叶,料液比1:2,加入内含5%PVP(w:v)、经预冷的p H5.6柠檬酸-磷酸盐缓冲液(0.15 mol/L),海砂适量,冰浴研磨,4℃条件下隔夜浸提12 h,于4℃、9000 r/min离心35 min,取上清液,为龙井43号鲜叶中多酚氧化酶缓冲液成浆浸提的最优条件。结论采用优化的浸提条件,可以制备得到高活性多酚氧化酶粗酶液,为茶树多酚氧化酶同工酶分离与酶性质研究提供了基础。     

提取方法对茶多酚氧化酶活性的影向

本文采用不同缓冲液匀浆法及其浸提法、丙酮粉法提取茶多酚氧化酶,比较提酶方法对酶活性和酶剂活性的影响.结果表明缓冲液匀浆法提取酶活性的效果优于丙酮粉法;匀浆浸提法提取酶活性的效果高于缓冲液匀浆法;并以柠檬酸盐缓冲液匀浆浸提法提取效果最好.而酶制剂的单位酶活性则是丙酮粉法较高,分别为缓冲液匀浆法及匀浆浸提法的12～35倍.     

响应面优化可溶态和膜结合态马铃薯多酚氧化酶提取工艺

以大西洋马铃薯为原料,分别用柠檬酸-磷酸盐缓冲液浸提和超声波辅助Tris-HCl缓冲液浸提法提取马铃薯中可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,以酶比活力为评价指标,在单因素实验基础上,通过响应面对sPPO和mPPO的提取工艺进行优化。结果显示:sPPO最优提取工艺为料液比1:3.2、浸提时间12 h、缓冲液pH7.1,在该条件下测定sPPO比活力平均值为(130.5±2.4) U/mg,三个因素对sPPO提取的影响大小依次为:浸提时间>料液比>缓冲液pH。mPPO最优提取工艺为料液比1:5.2、浸提时间7 h、缓冲液pH6.7,在该条件下测定mPPO比活力平均值为(686.4±7.9) U/mg,三个因素对mPPO提取的影响大小依次为:超声时间>料液比>缓冲液pH。所得响应面模型可以很好地预测和分析sPPO和mPPO提取工艺条件。     

提取方法对茶多酚氧化酶活性的影响

本文采用不同缓冲液匀浆法及其浸提法、丙酮粉法提取茶多酚氧化酶,比较提酶方法对酶活性和酶剂活性的影响。结果表明:缓冲液匀浆法提取酶活性的效果优于丙酮粉法;匀浆浸提法提取酶活性的效果高于缓冲液匀浆法;并以柠檬酸盐缓冲液匀浆浸提法提取效果最好。而酶制剂的单位酶活性则是丙酮粉法较高,分别为缓冲液匀浆法及匀浆漫提法的12～35倍。     

茶树花多酚提取工艺的研究

用常规水浴浸提法和超声波辅助浸提法来提取茶树花中的多酚，研究了浸提温度、时间、料液比等因素对多酚得率的影响，比较得出超声波辅助浸提用时短，温度低的优点；通过正交试验设计，研究了各因素对多酚浸提影响的主次顺序，确定了最佳提取参数。实验结果采用统计软件（SPSS）进行分析，影响超声波辅助浸提各因素的主次顺序为料液比、温度、浸提时间,超声波辅助浸提最佳工艺为：温度50℃、提取时间10min、料液比1：30，在此工艺条件下多酚浸提得率75．13ms／g干花。为茶树花资源深度研究开发提供依据。     

海带多酚制备及其对南美白对虾保鲜效果的研究

采用超声渡、微渡复合浸提的方法预处理海带,制备具有抗菌活性的海带多酚.选取五因素(料液比、乙醇浓度、浸提温度、浸提次数、浸提时间)四水平的正交实验,以海带多酚提取率为评价标准,对海带多酚的提取工艺进行优化,并初步分析了海带多酚对南美白对虾的保鲜效果.结果表明:料液比1:7(匀浆:乙醇),乙醇浓度85%,浸提温度70℃,浸提次数2次,浸提时间4h为最佳提取工艺条件,其提取率可达0.4050%.0.2g/L的海带多酚可有效地延缓南美白对虾pH的升高,抑制其细菌总数和TVB-N值的增加,保持较好的感官质量.与对照组相比,应用海带多酚可延长南美白对虾货架期48h,使其保鲜期达到144h以上(-1.2±0.2℃).     

南美白对虾冷风干燥过程中的品质变化研究

冷风干燥是一种重要的水产品干燥方法。该文主要研究南美白对虾在冷风干燥过程中水分含量、复水率、质地、微观结构、色泽及感官评分的变化。结果表明:随着干燥时间的延长,南美白对虾水分含量逐渐降低,复水率显著增加;硬度、咀嚼度不断增大;肌纤维聚集,纤维束间空隙逐渐变大,但干燥16 h的样品仍保持较为完整的纤维结构;冷风干燥16 h时,虾的a~*值达到最大,色泽最红,咀嚼性好,风味浓郁,感官评分最高。     

低温等离子体对南美白对虾肌肉蛋白质性质和结构的影响

目的 研究低温等离子体（cold atmospheric plasma, CAP）对南美白对虾肌肉蛋白质性质和结构的影响。方法 采取不同等离子体条件（电压：20、40、60 kV;时间：1、2、3 min）对南美白对虾肌肉蛋白进行处理,通过分析肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、表面疏水性、总巯基含量、Ca2+-ATPase活性、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)指标,探讨了CAP对南美白对虾肌肉蛋白的影响。结果 与对照组相比,随着处理时间和电压的增加,虾体的肌浆蛋白、肌原纤维蛋白含量、总巯基含量、Ca2+-ATPase活性均显著下降（P<0.05）,而表面疏水性显著升高（P<0.05）。处理条件为60 kV、3 min时,样品各指标变化最明显。SDS-PAGE电泳显示肌原纤维蛋白的肌球蛋白重链条带增强,副肌球蛋白条带逐渐消失,在分子量为25 kDa附近出现新的蛋白条带。结论 CAP处理能导致南美白对虾肌肉氧化,蛋白质变性。     

影响南美白对虾育苗成活率的关键因子

文章分析使用吉兰泰地下咸水添加氯化钾后对南美白对虾育苗的影响,分析验证在吉兰泰地区添加氯化钾最佳量,为内陆盐湖地区养殖南美白对虾提供参考。     

Polyphenoloxidase activity from strawberry fruit (Fragaria ananassa,Duch., cv Selva): characterisation and partial purification

In this work, polyphenoloxidase (PPO) from Selva strawberry fruit (Fragaria × ananassa, Duch) was extracted, characterised and partially purified. The activity of PPO was analysed in crude extracts obtained from either fresh fruits or acetone powder. The presence of NaCl and Triton X‐100 in the extraction buffer caused a marked increase in enzyme extractability. The enzyme showed an apparent K_m value of 11.2 mM with pyrocatechol as substrate. The maximum enzyme activity was observed at 50 °C and pH 5.3–6.0 without SDS and pH 7.2 in the presence of SDS. The presence of SDS increased PPO activity at pH 7.2 but diminished it at pH 6.0. The enzyme showed high thermal stability and maintained activities equal to or greater than 50% of its maximum activity in the 2.6–9.3 pH range. One polyphenoloxidase isoenzyme was detected in crude extracts of all ripening stages, showing an isoelectric point of 7.3. The specific activity of PPO decreased continuously through fruit ripening. Maximum specific activities were found at the ‘small green’ and ‘large green’ ripening stages. A total enzyme extract was partially purified by means of (NH₄)₂SO₄ precipitation and cationic exchange chromatography in an FPLC system. The purification grade achieved was near 25. The partially purified enzyme showed an isoelectric point equal to 7.3 and a molecular mass of 135 ± 4 kDa for the native protein. © 2000 Society of Chemical Industry     

不同溶剂提取燕麦油脂的抗氧化活性研究

燕麦中油脂含量通常7.5%～9%,经前期的研究表明燕麦油脂具有较高的营养价值,为了解燕麦油脂的抗氧化性能,分别以乙醚、丙酮、丙酮/无水乙醇、正己烷对燕麦进行萃取,结果表明:丙酮、丙酮/无水乙醇两种溶剂浸提燕麦油脂的提取率较高,分别为7.5%和8%,通过对POV值的测定,抗氧化能力也较强,尤以溶剂丙酮-无水乙醇效果最佳.     

Influence of berry ripeness on concentration,qualitative composition and extractability of grape seed tannins

Background and Aims: The evolution of seed tannins in three grape varieties grown in the same vineyard was followed from preveraison to harvest, to determine their pattern of accumulation. Also, to elucidate whether the use of 70% acetone as extracting solvent overestimate what will occur during fermentation, seed tannins were extracted throughout the ripening period with a method that involved a 3 days extraction with aqueous 12.5% ethanol and the results compared with the acetone extraction method. Methods and Results: For both methods, the extracted tannins were analysed following acid‐catalysis in the presence of excess of phloroglucinol. Seed tannins reached a maximum around veraison and decreased towards maturity, the mean degree of polymerization (mDP) varying only slightly during the studied period. When tannins were extracted with 12.5% ethanol, their concentration was much higher during the first part of the maturation than using acetone but was significantly lower at harvest. Conclusions: The decrease in extractable seed tannins during ripening was observed with both solvents. The differences observed in the concentration of tannins with both solvents could be due to the histochemical changes occurring in seeds during maturation. Significance of the Study: The differences observed in tannin concentration with the two different methods may indicate that when pulp maturity is reached before seeds are ripe, the fermenting solution will extract more tannins than the acetone method. These results point to the importance of extraction methodology when monitoring seed maturity for the prediction of seed tannins in wine.     

Effect of ripening on protein content and enzymatic activity of Crimson Seedless table grape

The evolution of °Brix, protein content, polyphenoloxidase activity and peroxidase activity during the ripening of Crimson Seedless table grape was studied in three consecutive years (2006, 2007 and 2008). The total protein content was determined according to Bradford’s dye binding method, and polyphenoloxidase (PPO) and peroxidase (POD) were extracted using Triton X-114 and characterised using spectrophotometric methods. The year had a statistically significant effect on all the studied parameters and there was an interannual correlation in the evolution of protein, PPO, POD and °Brix. All the studied parameters were statistically correlated, except POD activity with protein content. Weather conditions during the ripening period had a greater effect on protein content than PPO and POD activity.     

桑叶黄酮的提取纯化及对油脂抗氧化活性的研究

采用不同的方法（有机溶剂、稀盐和酶法）提取桑叶中的黄酮类化合物,比较不同提取方法的提取率、提取物中黄酮类化合物的含量及纯度,从而探讨最佳的提取方法,用AB-8型大孔吸附树脂为层析柱填充料,对桑叶黄酮的提取物进行了纯化.以猪油为底物,采用碘-硫代硫酸钠滴定法测定了所得黄酮类化合物对猪油的抗氧化活性.结果表明：桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮,采用有机溶剂（60%丙酮）和稀盐（3%硫酸铵）的二步提取法在提取效果、成本、安全性等方面均优于有机溶剂的一步提取,而纤维素酶乙醇提取法效果最佳.AB-8型大孔吸附树脂对桑叶黄酮类化合物进行纯化效果明显.桑叶黄酮对猪油具有明显的抗氧化作用,且有剂量效应关系,尤其是经过纯化工艺后的黄酮类化合物,其抗氧化效果显著,是一种良好的天然抗氧化剂.     

酸性电解水对南美白对虾中多酚氧化酶活性的影响

酸性电解水（acidic electrolyzed water,AEW）作为一种新型的杀菌保鲜技术已经被应用于海产品的保 鲜方面,实践表明AEW对南美白对虾的黑变有抑制效果。为了探究其作用机理,将南美白对虾中多酚氧化酶 （polyphenoloxidase,PPO）进行提取纯化,并研究AEW对PPO的抑制效果及抑制类型。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰 胺凝胶电泳结果显示,PPO的提纯效果较为理想;动力学研究发现,AEW对PPO活力具有显著抑制效果,且其作用 大小与AEW添加量呈明显的剂量-效应关系。AEW对PPO抑制类型为混合型抑制,抑制常数Ki为0.64 mmol/L。实验 结果为进一步探明AEW抑制南美白对虾黑变的作用机理提供了理论基础。     

4-HR与抗坏血酸对中华管鞭虾多酚氧化酶的抑制动力学模拟分析

研究无硫复合抑制剂主要作用成分4-己基间苯二酚（4-hexylresorcinol,4-HR）、抗坏血酸对中华管鞭虾多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）活性的抑制作用,并从抑制剂化学结构及动力学模型出发分析推断其抑制机理。结果表明,4-HR、抗坏血酸均能抑制PPO活力,且对酶促反应有延滞作用,两者半抑制浓度分别为0.072、2.02?mmol/L,对中华管鞭虾PPO的抑制作用都表现为竞争性抑制;化学动力学模拟分析显示4-HR、抗坏血酸均可与PPO双铜活性中心结合,其中4-HR可生成一种高稳定的多酚氧化酶络合物,持续有效地消耗PPO。4-HR、抗坏血酸均能有效抑制中华管鞭虾PPO酶促反应,其中4-HR抑制效果更显著。本实验为无硫复合抑制剂在海水虾捕捞与加工过程中的应用推广提供理论依据。