牦牛肉组织蛋白酶L酶学特性的研究

以牦牛背最长肌为原料,从中提取组织蛋白酶L并对其酶学性质进行研究。结果表明,该酶水解专一性荧光底物Z-Phe-Arg-AMC的最适反应pH和温度分别为5.5和40℃,在pH5.0～6.0、40～50℃条件下酶活稳定性最高。最适酶促反应时间和底物浓度分别为30min和25μmol/L。金属离子Ca2+、Cu2+、Mn2+、K+、Fe3+、Fe2+、Zn2+均能抑制酶活。EDTA和EGTA对酶有一定的抑制作用,L-Cys和β-ME对酶起激活作用。     

内生黑曲霉产脂肪酶条件研究及其粗酶酶学特性

针对新疆酿酒葡萄中获得的1株产脂肪酶的内生黑曲霉菌株C2J6,研究了该菌株的产酶条件及酶学特性。结果表明,该菌适宜的产酶条件为1%的乳糖为碳源,1%的蛋白胨为氮源,培养基初始pH值为8.0,培养温度35℃,培养时间约72h,此时所产脂肪酶的活力可达18.75U/mL。该菌所产脂肪酶粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,为中温中性酶;在50℃保温1h酶活力保留54.55%,具有良好的热稳定性;在pH值3.0~7.0范围内较稳定,有一定的耐酸性。金属离子Mn2+对酶活力有促进作用,Zn2+、Fe2+、Cu2+对酶活力有抑制作用,K+、Ca2+、Na+、Mg2+对酶活力影响不大。该酶在以葵花油和谷物调和油为底物时,酶活分别为228%和180%,明显高于橄榄油和油烟机废油。     

小麦芽脂肪酶酶学性质以及制麦过程的酶活变化

以对硝基苯酚丁酸酯为底物,确定了小麦芽脂肪酶的酶学性质:最适温度为37℃;最适pH为8.0;4～35℃脂肪酶的热稳定性较好,35℃下保温60 min后其活力仍可保持在88.37%,45℃保温60 min后其活力保持在46.81%,55℃保温60 min酶失活;pH5.5～6.0范围内对脂肪酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可分别保持在95.11%和91.11%;Fe3+对脂肪酶有较强的抑制作用;Cu2+、Mn2+、Al3+对脂肪酶的抑制作用较小;Ca2+、EDTA对脂肪酶有较强的激活作用。小麦制麦过程中发芽第4天酶活达到最大值,为8.52 u/g,随后酶活下降;干燥会破坏部分脂肪酶的酶活,损失率为27.06%。小麦芽籽粒、胚芽、胚根中的脂肪酶酶活依次降低,分别为8.01 u/g、7.55 u/g、6.83 u/g;协定法麦汁糖化过程中,无胚芽麦芽脂肪酶的酶活比有胚芽的低,且酶的失活速度也比较大,在55 min(70℃)时,脂肪酶完全失活。     

皱胃酶酶学性质的研究

研究了皱胃酶的酶学性质。皱胃酶的最适作用温度和最适pH值分别为42℃和6.0。在45℃以下和pH4.5～7.0范围内,酶活保持稳定。Ca2+、Na+、Fe3+对皱胃酶的凝乳有明显的促进作用,Mg2+、Cu2+、Ba2+对凝乳有抑制作用。并研究了底物浓度对酶反应的影响。     

褶皱假丝酵母产脂肪酶条件及酶学性质研究

对一株来源于海洋有产脂肪酶能力的褶皱假丝酵母产酶条件进行研究,探讨了碳源、氮源、pH、培养温度对该菌产脂肪酶的影响。结果显示:在摇瓶培养条件下,其最适产酶条件为:蔗糖5 g/L,橄榄油5 g/L,MgSO4·7H2O1 g/L,K2HPO41 g/L,(NH4)2SO410 g/L,起始pH为7.0,接种量10%,在30℃、200 r/min下培养36 h,产酶能力达到4 351.6 U/mL。该菌所产脂肪酶的最适反应pH为7.0,最适反应温度为37℃,Ca2+、Mg2+对酶活有一定的促进作用。     

麦芽中脂肪酶活性检测及酶学性质的研究

以乙酸对硝基苯酚酯(p-NPA)为底物,采用对硝基苯酚法测定了麦芽中脂肪酶的活性,并对其酶学性质进行了研究.实验结果表明,麦芽中脂肪酶的最适反应pH为8.5,与5mmol/L的p-NPA的最适反应体积比为1∶7,金属离子Mg2+对麦芽脂肪酶活性有显著的抑制作用,Fe3+、K+则有一定激活作用;该酶热稳定性较强,40℃水浴保温120min,其酶活性几乎保持不变,70℃保温120min后接近失活.麦芽脂肪酶对p-NPA的酶动力学常数Km为0.13mmol/L,Vm值为0.016mg/min.     

藏灵菇源克鲁维酵母K1菌株胆盐水解酶的特性研究

探讨藏灵菇马克斯克鲁维酵母K1菌株胆盐水解酶作用底物的反应条件与不同化学试剂对酶活性的影响及其发酵动力学类型。采用单因素多水平试验方法,在pH值4～8、温度31℃～43℃、底物浓度4mmol/L～8mmol/L及不同化学试剂(SDS、EDTA、尿素、Cu2+、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Al3+、Mn2+)的条件下,胆盐水解酶与底物反应30min,检测酶活力;平板活菌计数法分析细胞生长与产酶的关系;双倒数作图法求得酶促反应动力学常数Km。结果表明,胆盐水解酶最适反应条件为:pH值为6.0、底物浓度7mmol/L、温度37℃,Fe3+、Ca2+、Mn2+及尿素对酶活性有较大提高作用,Mg2+、Al3+及SDS对酶的激活作用次之,Cu2+及EDTA对酶活性影响不大。K1菌株在18h～21h进入稳定期,于21h对数生长期的末期时酶活性达到最高,表明其胆盐水解酶发酵动力学类型为生长偶联合成型。其酶促反应动力学常数Km为2.10mmol/L,说明该酶与最适底物的亲和力较大。     

中国对虾蛋白酶性质的研究

采用酶学分析方法研究了中国对虾蛋白酶的性质。结果表明,该酶最适温度为60℃,最适pH为9.0,是一种碱性蛋白酶。此酶在50℃以下及pH 7.0~10.0稳定性较好。以酪蛋白为底物,蛋白酶的最适底物浓度为2%。60℃时,该酶的半衰期为22 min,70℃时则为7 min。低浓度的EDTA对酶活有抑制作用,Mn2+、Ca2+、Mg2+对蛋白酶有一定的激活作用,而Cu2+、Zn2+、Fe2+、Pb2+对酶活有不同程度的抑制作用,可推断该酶是一种金属蛋白酶。     

茄子过氧化物酶的特性研究

本研究采用分光光度法,以愈创木酚为底物,对茄子组织中过氧化物酶的活性、最适底物浓度、最适pH、最适温度以及过氧化物酶的热稳定性,Na+、K+、Ca2+等金属离子对过氧化物酶反应的影响作了一定的研究。结果表明:过氧化物酶的最适底物浓度为0.4mol/L,最适pH范围为5~6,最适反应温度为30℃,80℃处理4min以上可使酶基本失活,试验中用到的多种金属离子对过氧化物酶的活性都能起到比较明显的抑制作用。     

重组黏质沙雷菌脂肪酶的可溶性表达及其性质研究

目的 提高重组黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶(GST-lipase)可溶性表达量,研究其相关理化性质.方法 PCR扩增lipase基因,与表达载体pGEX-4T-1连接后转入E.coli BL21(DE3),优化培养提高可溶性表达量,表达产物用GST亲和层析柱纯化.研究温度、pH等对酶活性的影响,重组酶的底物特异性以及对(±)-MPGM的手性拆分.结果 优化后可溶性酶的活性可达8 612.3 U/L,纯化9.8倍后比活性为3.3 U/mg.重组脂肪酶的最适反应温度为30℃,最适pH为9.0.温度低于30℃、pH 6.0～6.8的条件下比较稳定.C2+,Fe2+等金属离子和一些非离子表面活性剂能提高酶的活性.硝基苯月桂酸酯(C12)是其最适底物.以(±)-MPGM为底物,4 h后转化率达到47.3%,ee值为89.7%.结论 优化后可溶性脂肪酶的活性大大提高,研究了重组脂肪酶的相关性质,为地尔硫(草)的工业化生产奠定了基础.     

蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus SWWL6产耐有机溶剂脂肪酶发酵条件优化及酶学性质

以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus SWWL6为产耐有机溶剂脂肪酶的出发菌株,对发酵产酶条件进行优化并研究其酶学性质。通过四因素三水平L9(34)正交试验,确定产酶的最优发酵条件为：pH6.5、温度35℃、每250mL容量瓶中装液量55mL、接种量4%,此条件下酶活力达45.62U/mL。该酶最适pH值范围为7.0～8.0,碱性条件下稳定。最适温度为40℃,超过40℃,酶活力急剧下降。K+、Na+、Mg2+、Ba2+对该酶活性有激活作用,Al3+、Cu2+、Zn2+、Ca2+对该酶活性有一定的抑制作用,Fe2+对该酶活性的作用效果不明显。SDS、EDTA均对该酶活性有抑制作用,其中尤以SDS的抑制作用最强。该酶对所试有机溶剂甲醇、环乙烷、异丙醇、乙醇、甲苯、丙酮、异戊醇均有一定的耐受性。     

气单胞菌属JH菌株脂肪酶酶学特性的研究

从JH菌体中提取脂肪酶,并在不同的反应条件下对其酶学性质进行研究。该脂肪酶最佳反应温度和缓冲液pH制分别为40℃和7．0。该酶具有较强的热稳定性和pH稳定性：经过30℃、40℃处理60rain仍然保持90％以上的酶活;用pH3．5～9缓冲液处珲该酶,仍然保持80％以上的酶活。Ca2＋、Mg2＋对该脂肪酶具有明显的激活作用,尤其是Mg2＋作用最为显著,与对照组相比提高了38．8％,Zn2＋、Fe2＋对该脂肪酶有显著的抑制作用,Cu2＋对脂肪酶的影响不显著。用双倒数法作图得到Vmax=2．13×10^-2mol／L,Km=0．639（mmol／mL）min-1。表面活性剂吐温-80对脂肪酶有促进作用。该菌株产生的脂肪酶町以往温和的反应条件下作用。     

韦伯灵芝漆酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级盐析、透析、聚乙二醇浓缩和高效液相色谱柱层析从韦伯灵芝TZC-1 发酵液中分离纯化得到电泳纯漆酶,其纯化倍数为37.1 倍,酶活性回收率为21.3%。活性-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)结果表明该漆酶由一种同工酶组成,纯化漆酶经SDS-PAGE 检测显示为单一条带,其分子质量约为40kD。该漆酶催化底物ABTS 的最适反应温度为50～60℃,最适反应pH 值为4.6,在60℃以下和pH3.0～5.0 范围内保持稳定,以ABTS为底物的表观Km 值为13.8μmol/L。Fe2+ 完全抑制酶活,Al3+ 和Mn2+ 对该漆酶也有明显抑制作用,Hg+、Cu2+ 和Mg2+ 对该酶有明显激活作用,而Zn2+、Ba2+ 及K+ 对该酶活性影响不大。     

广东客家娘酒发酵过程中产β-葡萄糖苷酶酵母菌的筛选及酶学性质研究

采用七叶苷分离培养基初筛、4-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-NPGal）显色法复筛的方法从广东客家娘酒发酵过程中的酒糟中筛选产β-葡萄糖苷酶能力较强的酵母菌,通过26S rDNA D1/D2区基因序列分析对其进行鉴定,并对其酶学性质进行分析。结果表明,获得1株产β-葡萄糖苷酶能力较强的假丝酵母Candida apicola kj_312。该菌株所产的β-葡萄糖苷酶具有较宽的底物特异性,最适底物为对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷;最适反应温度为60 ℃,在25～65 ℃范围内,相对酶活力＞50%;最适pH值为4.5,在pH值为4.0～7.0酸性范围内,相对酶活力＞80%;1 mmol/L的Ca2+、Mn2+、Zn2+和Fe2+及100 mmol/L的Ca2+、Zn2+和Fe2+能显著提高酶活力。     

耐热子囊菌产木聚糖酶及酶学性质的研究

对 1株耐热子囊菌 (Thermoascusaurantiacus)固态发酵产木聚糖酶的工艺条件及酶学性质进行了研究。确立了适宜的产酶基质为 :麸皮 3 0 %、玉米芯 3 5 %、玉米皮 3 5 %、(NH4 ) 2 SO4 2 %、尿素 0 5 %、KH2 PO4 0 5 %、MgSO4 ·7H2 O 0 2 %、初始含水量 65～ 70 %。 45℃培养 5d ,木聚糖酶活力最高可达 1 0 3 2 1IU/g(干曲 )。该木聚糖酶最适反应温度为 70℃ ,最适pH4 8;在 pH3 0～ 7 0 ,温度低于 65℃时稳定性能较好。可被Fe2 +、Mg2 +、Zn2 +激活 ,而被Co2 +、Fe3+、Mn2 +抑制。     

淫羊藿苷糖苷酶的纯化及其酶学性质的研究

对由菌株Absidiasp.E9r在发酵培养中产生的淫羊藿苷糖苷酶进行了分离纯化并对其酶性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为65ku,酶反应的最适温度和pH值分别为50℃和4.0,在20～60℃,pH3.0～6.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究,Vmax=3.012mmol/(L.h),km=58.59mmol/L。     

鸭卵清溶菌酶的分离纯化及性质

通过硫酸铵的分级沉淀、CM-Sepharose阳离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,从鸭卵清中获得电泳纯的溶菌酶,该酶的比活力达到33687.26U/mg,纯化倍数为109.44,回收率为28.00%。测得该酶分子质量约为14.82kD,对溶壁微球菌的最适反应温度为50℃,最适pH值为7,且在50℃以下及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为0.0864mg/mL。Fe2+、Mg2+、Mn2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用,而Zn2+、Cu2+、Co2+对该酶有一定的激活作用。     

毕赤酵母液态木聚糖酶的酶学特性研究

研究了毕赤酵母液态木聚糖酶的部分酶学特性,包括其最适温度、最适pH、温度稳定性和热失活动力学、pH稳定性和pH失活动力学,以及金属离子、有机溶剂对毕赤酵母液态木聚糖酶酶活特性的影响。结果表明,毕赤酵母液态木聚糖酶的最适温度为55℃、最适pH为pH5.6;温度为25℃时,pH5.6-6.4该液态木聚糖酶失活速率缓慢。毕赤酵母液态木聚糖酶在50℃以下在150 min内比较稳定的,70℃在30 min内几乎全部失活。Cu2+,Zn2+,Fe3+表现为不同程度的抑制作用。Mn2+,Mg2+对木聚糖有激活作用。乙醇和甘油对毕赤酵母液态木聚糖酶有轻微的抑制作用,蔗糖和Vc对毕赤酵母液态木聚糖酶有不同程度的激活作用。     

碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的优化

通过固体平板法从含油脂土样中筛选出一株产碱性脂肪酶活力较高的菌株 ,鉴定为解淀粉芽孢杆菌。此菌最佳产酶条件为 :1%淀粉为碳源 ,2 %黄豆粉和 2 %玉米粉为氮源 ,培养基起始 pH 7.0 ,3 0℃培养 72h。对发酵液性质进行初步研究发现 ,此酶最适反应温度为3 7℃ ,最佳反应 pH为 8.5。 0 .0 1mol/LCa2 + 和K+ 对酶有激活作用 ,而Cu2 + 和Fe3 + 则对该酶有抑制作用。