中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的工艺研究

试验研究了采用中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化性肽的最佳工艺。将螺旋藻破壁离心后,用中性蛋白酶水解,以·OH清除率、DPPH·清除率和总还原力为评价指标,在单因素试验基础上,进行了正交试验,确定了最佳酶解工艺条件。试验结果表明,中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:酶解温度为60℃、[E]/[S]为3%、p H为7.3,时间为4 h。此条件下螺旋藻中性蛋白酶的水解物的·OH的清除率是92.790%、DPPH·的清除率为18.941%,代表总还原力大小的吸光度为1.507。     

蓝园鲹制备抗氧化肽酶解工艺的研究

运用响应面(RSM)分析法对酶解蓝园鲹蛋白制备抗氧化肽的工艺进行优化.在单因素的基础上,以还原力和羟基自由基清除率为指标,研究了酶解时间、温度、水料比对 Alcalase2.4 酶解蓝园够蛋白酶解液抗氧化性的影响.结果表明,最大还原力的最优条件为温度 50℃,酶解时间 200 min.水料比为 2.6,此时还原力达到0.640.最大羟基自由基清除率的最优条件为温度 50℃.酶解时间220 min,水料比为 2.2,羟基自由基清除率达到 53.58%.     

中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白研究

采用中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白制备大豆多肽,采用茚三酮分析法测定酶解液中氨基氮含量以判断其酶解效率。影响大豆分离蛋白酶解主要因素有中性与碱性蛋白酶用量比、酶解pH值、酶解温度、酶解时间,通过单因素和优化酶解条件正交试验分析,筛选出酶解最适实验条件:中性蛋白酶与碱性蛋白酶用量比为1∶3、温度55℃、pH 8.5、酶解时间6 h;在此条件下酶解,氨基氮含量为15.86 mg/g。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

水酶法同时制备辣木籽油和水解蛋白的工艺研究

采用水酶法从辣木籽中同时制备辣木籽油及水解蛋白。以辣木籽油及水解蛋白的得率为指标,综合考察酶的种类、酶解时间、酶解温度、料液比、酶用量及pH对得率的影响。在单因素试验基础上,确定了酶品种为中性蛋白酶,料液比为1︰9(g/mL)后,然后以酶用量、酶解时间、酶解温度、pH为自变量,设计了四因素三水平的正交试验。结果表明,最佳工艺条件为:中性蛋白酶,料液比为1︰9(g/mL),酶用量为2.0%,酶解时间为4 h,酶解温度为45℃,pH为6。在此最佳条件下进行试验验证,平均综合评价分数为73.27,RSD=0.54%。工艺稳定可行。     

酶解水牛奶酪蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

以水解度、还原能力和DPPH自由基清除率为检测指标,比较筛选碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解水牛奶酪蛋白制备抗氧化活性肽,筛选出中性蛋白酶是最适用酶。应用单因素和响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明:中性蛋白酶酶解酪蛋白的最佳工艺参数:pH为6.9,温度为46℃,酶与底物浓度比为4.6%,酶解时间4.0h,此时10mg/mL酶解物的还原能力为0.457。实测结果与预测值符合性良好。     

无花果蛋白酶酶解牡蛎肉的工艺优化及其抗氧化活性研究

研究无花果蛋白酶酶解牡蛎肉的工艺优化及其抗氧化活性,以氨基酸态氮含量和DPPH·清除率为指标进行单因素和正交实验,研究酶解时间、酶解温度、酶量、p H对氨基酸态氮含量和抗氧化活性的影响。正交实验确定牡蛎酶解的最佳工艺条件为:酶量5.5%,酶解温度50℃,p H6.0,酶解时间3.5 h。此工艺条件下,牡蛎酶解液氨基酸态氮的含量为0.181 g/100 m L,DPPH·清除率达71.80%,还原力为0.813,·OH清除率为16.19%,牡蛎酶解液具有较强的抗氧化活性。     

骨肉酶解工艺条件研究

为了进行猪骨肉的综合利用,本实验以猪骨为原料,研究木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的水解效果以及最适蛋白酶的酶解温度、pH、酶用量、料液比和酶解时间对骨肉蛋白水解度和总氮回收率的影响。结果表明：胰蛋白酶为最佳骨肉水解酶,胰蛋白酶水解猪骨的最佳工艺参数为：酶解时间为5h、酶解温度60℃、pH8、酶用量5000U／g原料、料液比为1：5。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

猪皮明胶酶解工艺优化及其清除羟自由基能力评价

利用6种不同的蛋白酶水解猪皮明胶并检测所用酶的酶活,根据水解产物对·OH自由基的清除率,筛选最佳的水解蛋白酶为胰蛋白酶.通过单因素试验和L9(34)正交试验对胰蛋白酶解猪皮明胶的条件进行优化,单因素考察了酶料比、水解时间、水解温度、pH值对羟自由基清除率的影响.得到最佳酶解工艺条件为水解温度34℃,酶解时间3.0h,pH值7.0,酶料比6.0％.在此条件下,木瓜蛋白酶水解产物对·OH自由基的清除率为98.80％.     

海产小杂鱼抗氧化肽制备工艺

以海产小杂鱼为原料,分别测定风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶切小杂鱼所得酶解液的羟自由基清除率,结果表明中性蛋白酶的酶解液羟自由基清除率最高,并且氨基态氮含量较高。以中性蛋白酶为试验用酶,通过正交试验L9(34)得到制备小杂鱼抗氧化肽最佳酶解条件为反应pH7.0、料液比1:2、加酶量500U/g、反应温度42℃,所得的酶解液对羟自由基清除率高达95%以上。Sephadex G75凝胶分离结果显示海产小杂鱼抗氧化肽混合物主要由分子质量低于3000D的肽类组成。     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

响应面优化冰岛刺参内脏团抗氧化肽制备工艺及其组成分析

以冰岛刺参内脏团蛋白为原料,利用复合蛋白酶酶解制备抗氧化肽。在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺条件,并分析其抗氧化活性、分子量分布和氨基酸组成。结果表明,最佳工艺条件为底物质量分数4.4%,加酶量4887 U/g,pH7.0,酶解温度56 ℃,酶解时间4.2 h,在该条件下,2 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率可达89.18%±0.11%,0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由基清除率和Fe2+螯合率分别为68.11%±0.12%、72.59%±0.08%,1.5 mg/mL酶解产物的羟基自由基清除率和还原力分别为71.86%±0.09%、0.7473±0.0105;分子量分布和氨基酸分析表明,冰岛刺参内脏团抗氧化肽中分子量低于1000 Da的肽占94.26%,富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸,具有较高的抗氧化活性和营养价值。该研究为冰岛刺参深加工产业的发展提供了技术参考。     

响应面法优化马面鱼骨多肽液酶解工艺分析及其性能研究

为了开发利用加工鱼丸的下脚料马面鱼骨,采用现代生物酶解技术及响应面设计方法,优化马面鱼骨胶原多肽的制取工艺,并分析其理化特性及抗氧化功能性。结果表明:在pH5.6左右的自然状态酶解2h,添加风味蛋白酶添加量为6.92‰,底物浓度42.27%,于55.47℃水解,其水解度为26.33%,多肽含量为1.28mg/mL;胶原多肽酶解液的抗氧化效果在浓度为60mg/mL时和同浓度谷胱甘肽的抗氧化活性相当,在25mg/mL浓度下的马面鱼骨胶原多肽液的对羟自由基和DPPH的清除率分别高达95.98%和97.36%,具有良好的抗氧化性。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

茶渣多肽制备及其对羟自由基的清除能力

分别以酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及复合蛋白酶水解茶渣粗蛋白制备茶渣多肽,并对多肽的羟自由基清除能力进行考察。通过单因素试验证明:复合蛋白酶的效果最好,其最佳水解工艺条件为粗蛋白液质量分数0.5%、加酶量600U/g、温度55℃、pH8.0、水解5h,在此条件下,多肽对羟自由基的清除能力达27.3%;碱性蛋白酶的效果也较好,其最佳工艺为蛋白液质量分数0.5%、加酶量400DU/g、pH8.5、温度50℃、时间1.0h,在此条件下,多肽对羟自由基的清除能力达25.3%,与前者的清除能力没有显著差异,但用时少4h;利用碱性蛋白酶作为酶源制得茶渣多肽粗品中含有蛋白质、多肽、游离氨基酸分别为28.4%、11.0%、1.5%,其对羟自由基的半清除率IC50为8.432mg/mL,相同条件下VC的IC50为0.897mg/mL。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。     

基于Plackett-Burman设计和响应面法优化羊肝抗氧化肽的制备工艺

以羊肝为原料,分别测定5种蛋白酶酶切羊肝所得的酶解液的羟基自由基清除率和肽得率。结果表明,风味蛋白酶羟自由基清除率（84.50%）和肽得率（22.49%）最好。在单因素试验基础上,以羟基自由基清除率为评价指标,采用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,羊肝抗氧化肽制备的最佳酶解条件为料液比1∶3（g∶mL）、加酶量2 400 U/g、酶解温度50 ℃、pH7.50、酶解时间2.8 h。在此优化条件下,测得实际羟自由基清除率为93.70%,与模型理论值相接近。羊肝酶解产物中总氨基酸含量为57.23 g/100 g,其中疏水性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸含量分别为46.47%和41.63%,表明以风味蛋白酶酶解羊肝产物具有较高的抗氧化活性和营养价值。