非离子表面活性剂双水相萃取氨基酸研究

该文对氨基酸萃取液在非离子表面活性剂双水相体系中的萃取分配相行为进行研究。采用脂肪醇聚氧乙烯醚AEO–7/盐双水相萃取L–苯丙氨酸,考察了加盐(NaCl、Na2SO4、Na3PO4)、AEO–7含量、萃取时间、加入萃取物L–苯丙氨酸的含量以及萃取温度对双水相及萃取分离L–苯丙氨酸的影响。结果表明,AEO–7/Na3PO4双水相萃取L–苯丙氨酸的适宜条件是当AEO–7的体积浓度为8%,Na3PO4·12H2O的质量浓度为85 g/L,温度为40℃,L–苯丙氨酸的质量浓度为0.532 8 g/L,时间为60 min时L–苯丙氨酸的萃取率可以达到98.7%,分配系数为15.3。     

非离子表面活性剂双水相萃取甘草酸的研究

以甘草中的甘草酸为萃取对象,研究其在非离子表面活性剂双水相体系中分配及萃取效果。分别用氯化钠、硫酸钠、磷酸钠与脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-7构建双水相体系,分析了各体系的分相效果及影响分相的各种因素,包括非离子表面活性剂的浓度、盐的种类和质量、pH值以及萃取时间,发现AEO-7/磷酸钠双水相体系较稳定、萃取率高、分相较快,比较适合用来对甘草酸的萃取。结果表明,AEO-7/磷酸钠双水相体系萃取甘草酸的适宜条件是当AEO-7的体积分数为10%、Na3PO4的质量浓度为47.50 g/L、pH值为2、萃取时间1 h,此时甘草酸的萃取率可以达到99.30%,其分配系数达到了317.90。     

聚乙二醇/硫酸钠双水相萃取赖氨酸

根据赖氨酸的理化特性,设计采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠双水相体系对其进行萃取分离。以萃取率和分配系数为指标,通过单因素和正交试验探讨了双水相的物质浓度、pH值、温度以及主要因素间的交互作用对赖氨酸萃取的影响。结果表明,赖氨酸主要分配于下相盐相中,双水相的物质浓度、pH值、Na2SO4的质量分数与pH值间的交互作用对赖氨酸的萃取影响极显著。实验确定最佳萃取工艺为:20%PEG 1000、14%Na2SO4、pH 5.5、30℃,在此条件下分别萃取1.0 mg/mL赖氨酸标准液和模拟发酵液,平均萃取率分别为96.5%和94.8%,分配系数分别为0.033和0.057。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮的研究

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮。通过单因素实验考察聚乙二醇平均分子量、(NH4)2SO4质量分数、聚乙二醇质量分数、pH和体系温度等对分配系数、萃取率的影响,并通过正交实验对萃取工艺条件进行进一步的优化,获得最佳工艺条为:双水相体系组成30%PEG600-25%(NH4)2SO4,体系温度45℃,体系pH为3。在此条件下,黄花蒿黄酮主要分布在上相,分配系数为21.86,萃取率达到96.33%。     

PEG/Na_2SO_4双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠(Na2SO4)双水相体系对木瓜蛋白酶进行分离提取。考察各成相试剂及pH对木瓜蛋白酶活性的影响,研究体系中不同相对分子量PEG、硫酸钠和PEG的质量分数、pH、酶添加量等因素对木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的影响,采用响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件,并进行了实验室规模的放大。结果表明:Na2SO4的质量分数对分配行为的影响极显著,其次是PEG的质量分数,pH对分配行为的影响不显著。当两相体系中PEG的相对分子量为6000,质量分数为16.0%、Na2SO4质量分数为18.0%、pH7.0、酶添加量为1.0mg/g时,木瓜蛋白酶在两相体系中的分配系数最高可达3.1,可获得木瓜蛋白酶活性回收率82.6%。实验证明:响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的条件是可行的,可用于实际预测。     

双水相体系萃取分离L-组氨酸的研究

采用PEG-(NH4)2SO4双水相体系萃取分离L-组氨酸。实验考察了pH、温度、聚乙二醇加入量、L-组氨酸初始浓度、硫酸钠及L-赖氨酸的存在对萃取分离的影响。结果表明:L-组氨酸在该双水相体系的分配系数K随体系pH和聚乙二醇加入量的增大而减小,随着L-组氨酸初始浓度和L-赖氨酸加入量的增大而增大,而温度和Na2SO4的影响不明显;L-组氨酸在该双水相体系的萃取率η随体系pH和聚乙二醇加入量的增大而增大,随着L-组氨酸和L-赖氨酸加入量的增大而减小,而温度和Na2SO4的影响同样不明显。     

双水相体系萃取藤茶蛇葡萄素工艺的优化

本文研究了聚乙二醇-硫酸铵双水相体系的组成对藤茶蛇葡萄素萃取率的影响。通过单因素实验研究了聚乙二醇相对分子质量、聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH和NaCl质量分数对萃取率的影响。其次通过Plackett-Burman设计筛选出对萃取率影响显著的三个因素,分别为聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH。利用响应面法对影响显著的因素进行进一步的优化。优化后的最佳萃取工艺为:聚乙二醇1000质量分数28%、硫酸铵质量分数11.2%、pH为6.0。在该条件下的理论萃取率为98.82%,经过工艺验证实际萃取率为98.53%,与预测值接近,比优化前萃取率（71%）提高了约17.53%,有利于蛇葡萄素的进一步分离纯化或应用。     

双水相萃取芡实多糖工艺研究

目的:探究聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取芡实中多糖成分的最佳条件。方法:以双水相系统的相比、分配系数、收率等为参数,探究了聚乙二醇(PEG)的相对分子质量、PEG的质量分数以及硫酸铵质量分数对芡实多糖在两相系统中的分配行为的影响。结果:萃取最佳条件为PEG分子量为6 000、硫酸铵质量分数为20.6%、PEG6000质量分数为15.7%。结论:聚乙二醇/硫酸铵双水相提取方法可减少加工过程中对多糖成分的破坏。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG（聚乙二醇）／（NH4）2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究，考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响，结果表明：双水相最佳提取条件为PEG 100027％，（NH4）2SO419％，Na-Cl0．002％，pH5．0，温度50℃，在此条件果胶酶分配系数可达到14．0。     

PEG/（NH4）2SO4双水相体系萃取果胶酶

采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统对果胶酶进行萃取分离,研究了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响,结果表明:双水相体系质量组成为PEG100027%,(NH4)2SO419%,NaCl0.002%,pH5.0时果胶酶的萃取效率较好,实验中分配系数最高可达为14.0。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究

通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%.     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

FRACTIONATION AND CHARACTERIZATION OF CYSTEINE PROTEINASE INHIBITOR FROM CHICKEN PLASMA

The fractionation of cysteine proteinase inhibitor (CPI) from chicken blood plasma was carried out using polyethylene glycol‐4000 or ammonium sulfate (AS) precipitation. The addition of PEG at the level of 400 g/L, on the basis of the original volume of plasma protein, was more effective to fractionate CPI than using AS. CPI in the PEG fraction had a molecular weight of about 46 kDa with intramolecular disulfide bond. CPI containing fraction was colorless and had no absorbance in the range of 700–360 nm. The fraction was stable in the temperature range of 40–90C for 10 min and still retained high inhibitory activity toward papain after incubation at 90C for 60 min. NaCl, at 0–3.0% concentration, did not affect the inhibitory activity of the CPI containing fraction. The fraction was stable at pH 8.0, and the minimal inhibitory activity against papain was found at pH 5–6. Therefore, PEG fractionation effectively isolated the CPI from chicken plasma.     

双水相亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶

采用双水相金属螯合亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶,考察了豆壳过氧化物酶在不同类型双水相系统中金属螯合亲和配基聚乙二醇(PEG)-亚氨基二乙酸(IDA)-Cu(Ⅱ)对亲和分配的影响,发现PEG/羟丙基淀粉(PES)系统适合于金属螯合亲和分配豆壳过氧化物酶。进一步考察亲和配基加入量、成相聚合物分子量、系统组成、pH等因素对PEG/PES系统亲和分配的影响,优化分离条件为:PEG20009%,PES20014%,PEG-IDA-Cu(Ⅱ)1%,豆壳过氧化物酶的分配系数达40,纯化因子为2.8,回收率达到93%。