梯度洗脱高效液相色谱法快速测定1,3-丙二醇发酵液中有机酸

提出了一种快速分析发酵液中9种有机酸的高效液相色谱方法。该方法利用RSpakKC-811色谱柱(300mm×8mmi.d.),采用超纯水-4mmol/L高氯酸为流动相进行梯度洗脱。流动相流速1.0mL/min,紫外检测波长210nm,柱温60℃时,能够快速、准确地分离测定发酵液中的丙酮酸、柠檬酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、乳酸、甲酸、乙酸等8种有机酸,分析时间只需15min。各种有机酸的线性相关系数R2≥0.9992,精密度的相对标准偏差为0.97%-2.72%,样品回收率为96.8%-102.5%,具有较高的精密度和准确度,可以用于1,3-丙二醇发酵液中有机酸的分析。     

超临界CO2萃取草莓籽油工艺研究及其对脂肪酸组成的影响

通过超临界CO2萃取草莓籽油的工艺参数及工艺条件对脂肪酸组成的影响研究表明:适宜的萃取工艺为草莓籽水分含量7.12%～14.85%,粒径60～80目、萃取压力45 MPa、温度65℃、CO2流速10 L/h,萃取率可达0.237 g/g原料.随着萃取压力的升高和萃取时间的延长,草莓籽油中的棕榈酸和棕榈烯酸呈显著性下降(P<0.05);而油酸,亚油酸,二十碳酸和二十碳烯酸呈显著性增加(P<0.05).     

复杂发酵产物中黄豆苷元和雌马酚的定量分析

为解决复杂发酵液背景下非目的代谢物干扰问题,建立一种适用于体外发酵条件下,黄豆苷元及其生物转化物雌马酚的高效液相色谱法分析方法。粪便菌群在脑心浸液肉汤培养基中转化黄豆苷元48 h,经乙酸乙酯提取,C18色谱柱(250mm×4.6 mm, 5μm)分离,流速为0.8 mL/min,柱温25℃,进样量20μL,以水-甲醇-乙腈(体积比5∶3∶2)为流动相,在230nm和260 nm双波长处检测。结果表明：方法快速、准确,在6.25～100μg/mL范围黄豆苷元和雌马酚的线性相关系数(R2)分别为0.9999和0.9996,平均回收率为92.12%～104.34%,相对标准偏差为0.15%～0.24%,检出限分别为0.07μg/mL和0.05μg/mL,定量限分别为0.23μg/mL和0.16μg/mL。本研究所建方法具有较高的精确度且方法简便,可应用于粪便菌群发酵液中黄豆苷元和雌马酚的定量检测。     

高效液相色谱法测定茶多酚中EGCG和和EGG的含量

目的:建立茶多酚中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)的高效液相色谱含量测定方法.方法:以Diamonsil C18(4.6mm ×200mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(68:32),流速为1.0mL·min-1,检测波长为279nm,柱温25℃,进样量为20μL.结果:EGCG的进样量在0.1～6μg范围内,ECG的进样量在0.05～1.2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率分别为EGCG:97.57%、ECG:96.60%,RSD分别为EGCG:1.93%、ECG:1.53%.结论:本方法简便,准确,重复性好,可作为荼多酚中EGCG和ECG的含量测定方法.     

HPLC法测定冬枣环磷酸腺苷含量

采用HPLC法对冬枣中环磷酸腺苷(cAMP)含量进行测定。色谱条件:色谱柱为Hypersil-ODS2(25cm×4.6mm,5μm)柱,流动相为V(甲醇):V(0.05mol/L磷酸二氢钾)=10:90,流速1.0mL/min,紫外检测器UV254nm×0.2AUFS。测定结果表明:标准曲线在1μg/mL～50μg/mL范围内线性良好,回收率为99.14%,相对标准误差为1.32%(n=6)。     

不同秋果型树莓中槲皮素和山奈酚含量的测定

通过高效液相色谱法测定,不同秋果型树莓中槲皮素和山奈酚的含量。高效液相色谱法的测定条件:色谱柱为安捷伦18反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-1%乙酸溶液为流动相,流速为1.000 mL/min,测定波长254 nm,进样量10μL。结果表明:槲皮素和山奈酚分别在0.11μg/mL～11μg/mL(R~2=0.999 8);0.11μg/mL～27.5μg/mL(R~2=0.999 7)呈良好的线性关系;加样回收率分别为为0.76%、0.91%。     

气相色谱外标法测定葡萄酒中高级醇

利用毛细管气相色谱测定葡萄酒中的高级醇,色谱条件为:载气流速1.4mL/min,柱温为程序升温:65℃(0min)-15℃/min-200℃(2min),分流此50:1,进样量3μL;以峰面积外标法定量.测得相对标准偏差为0.0120%～1.0707%,回收率在95.18%～102.25%之间,具有操作简便快捷,精密度好、准确度高的特点.     

平卧菊三七中绿原酸的微波辅助提取及制备色谱法纯化

以平卧菊三七叶为原料,通过正交试验优化了微波辅助提取绿原酸的工艺条件,得到绿原酸粗提物。然后通过反相液相制备色谱柱(C_(18)柱70 mm×920 mm)分离纯化平卧菊三七粗提物,从流动相比例、上样量以及流动相流速3个方面来探索最佳的制备色谱纯化绿原酸的工艺条件。在流动相为甲醇-水(40:60,V/V)、进样量为10mL、流速为10 mL/min、检测波长为327 nm的条件下,分离得到绿原酸的单体纯度为93.24%,回收率为75.22%。该方法具有分离效率高、处理量大、产品安全性好、生产周期短等特点,为高纯度绿原酸的工业化生产提供了有效的技术支持。     

HPLC-MS测定白酒中氨基甲酸酯类农药残留

建立了一种同时对白酒中10种氨基甲酸酯类农药残留的HPLC-MS测定方法。色谱条件:色谱柱Phenomenex-LunaCN100A(250mm×4.6mm×5μm),流动相乙腈-水(在40min内乙腈由20%变为80%),流速1.00mL/min,检测波长195nm,柱温25℃,进样量20μL。质谱条件:电喷雾离子源(ESI+源),扫描范围(m/z)为50～350,干燥气温度350℃,干燥气流速8.0mL/min,雾化气压力275.86kPa。样品制备:白酒样品用固相萃取处理后,氮吹浓缩,乙腈定容至2mL。结果表明,10种氨基甲酸酯类农药残留在0.05～3μg范围积线性关系良好,相关系数R2>0.99。平均回收率在72.6%和97.6%,RSD在2.6%～5.9%之间。结论:方法灵敏度高、操作简便、结果准确,可用于酒样中痕量农药残留的含量测定。     

钛胶反相高效液相色谱法测定饮料中的柠檬酸

建立了钛胶反相高效液相色谱法测定饮料中酸味剂柠檬酸含量的快速检测方法.色谱条件:分离柱为Titania Sachtopore-RP柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为水∶甲醇=60∶40 (v/v)、流动相中含磷酸盐3mmol/L,流速0.SmL/min,柱温60℃,检测波长210nm.线性范围为0.02mg/mL～8.0mg/mL,检出限2.4μg/mL (3σ),回收率为92.79％～99.30％,RSD (n=8) ＜0.72％.准确度和精密度均可满足饮料中柠檬酸的测定要求.     

超临界CO_2流体色谱分离α-紫罗兰酮和β-紫罗兰酮

采用超临界CO2流体色谱分离α-紫罗兰酮与β-紫罗兰酮2个异构体,考察了改性剂浓度、柱温、柱压对容量因子和分离度的影响,确定了较佳的分离条件:硅胶柱(250mm×4.6mmI.D.6μm);流动相:V(CO2):V(异丙醇)=99:1;流速:2mL/min;柱温:40℃;柱压程序:起始压力8MPa,以300kPa/min的速率升至12MPa;紫外检测波长:254nm;进样:2μL浓度为480mg/mL的α-紫罗兰酮与β-紫罗兰酮2个异构体的二氯甲烷溶液,此时,分离时间约10min,分离度达到3.3。     

齐整小核菌SCL2010产小核菌多糖培养基优化的研究

采用单因素和正交试验对小核菌多糖高产菌株齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）SCL2010的培养基成分进行了深入地筛选与优化。结果表明,最佳培养基配方为葡萄糖45.0 g/L,玉米浆1.5 g/L,NaNO3 2.0 g/L,K2HPO4·3H2O 2.0 g/L,柠檬酸0.7 g/L,MgSO4·7H2O 1.5 g/L,KCl 2.0 g/L。在此优化条件下,小核菌多糖的产量为31.81 g/L,碳源转化率为70.69%。采用发酵罐进行小试放大试验,小核菌多糖的产量达到31.86 g/L,碳源转化率为70.80%,发酵液表观黏度达到4 500 mPa·s,并将发酵时间缩短至60 h左右,具有显著效果。     

离子交换法从发酵液中提取L-精氨酸

介绍了从发酵液中提取L精氨酸的工艺方法。确定了絮凝法预处理发酵液的最佳条件:聚丙烯酰胺的用量为400mg/L,发酵液pH值为10.0,温度为30℃。固定床离子交换的最佳工艺条件:上柱发酵液pH值为2.0,上柱流速为2mL/min,氨水洗脱浓度为0.1mol/L,流速为2mL/min。脱色工艺的最佳条件:活性炭用量为10g/L,脱色温度为80℃,pH值为5.0。整个提取过程中,L精氨酸的总收率为91.2%。     

离子交换树脂萃取发酵法生产柠檬酸的研究

本文提出了一种利用离子交换树脂萃取发酵法生产柠檬酸的新方法。该方法将离子交换树脂填充柱与发酵反应器相连接,发酵一定时间后,发酵液流经离子交换柱,分离出产物柠檬酸,再返回发酵反应器循环使用。与传统的发酵方法相比,萃取发酵使发酵周期由9天缩短到6天,糖转化率由原来的88.4％提高到96.6％,柠檬酸生产速率由0.447g/I·h提高到0.753g/l·h。     

液相法测定米香型白酒发酵液中18种有机酸

为给白酒厂建立包括挥发性短链脂肪酸在内的有机酸品控手段,进行了18种有机酸液相定量方法的开发。通过流速和梯度优化,实现了各有机酸的有效分离,色谱条件为:Atlanis T3色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流速0.4 mL/min,梯度洗脱,柱温30 ℃,检测波长210 nm,上样量10 μL。该方法线性范围较宽,R2>0.989,定量限0.280~3.138 mg/L,加标回收率93.03%~107.21%,相对标准偏差<3.70%。米香型白酒发酵跟踪数据表明:各有机酸含量在发酵过程呈现不同的变化趋势。与初始发酵醪液相比,除柠檬酸、L-苹果酸和富马酸外,其它有机酸的含量在12 d发酵醪中均增加。L-乳酸、乙酸、异丁酸、异戊酸、琥珀酸是12 d发酵醪的5种主要有机酸,含量占比均大于10%。发酵过程总有机酸一直增加,且不同发酵进程的有机酸差异较大,暗示着改变发酵周期可以调控米香型白酒有机酸的组成。该方法为米香型白酒有机酸的品控提供了有效手段。     

高效液相色谱法测定北五味子有机酸含量

采用高效液相色谱法确定北五味子中主要有机酸,通过反相色谱法和离子排斥色谱法分离效果比较,选择阳离子交换色谱柱作为北五味子有机酸分析柱,确定北五味子中主要有机酸为苹果酸、柠檬酸、莽草酸,其中莽草酸在北五味子中首次发现。通过条件优化,确定离子排斥色谱分离有机酸的最佳条件为,色谱柱:阳离子交换色谱柱Shim-packSCR.102H（8.0mmi.d.×300mm）;流动相:0.1%磷酸水溶液;流速0.8mL/min,柱温45℃;进样量:10μL;检测波长:210nm。检测结果:北五味子鲜果中,柠檬酸含量为3.26%±0.06%,苹果酸为1.13%±0.04%,莽草酸为0.53%±0.01%。      

免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8种霉菌毒素

目的:建立免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定水产品中8种霉菌毒素残留。方法:样品经乙腈水溶液(84:16,V:V)提取,多毒素免疫亲和柱净化。色谱柱为Agilent Proshell 120 SB·C₁₈(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相为甲醇-5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为40℃。采用电喷雾离子源正负离子同时扫描,多反应监测模式(MRM)进行质谱检测。结果:8种霉菌毒素在1.0～50.0 ng/mL范围内线性关系良好(R²>0.992),方法检出限在0.05～0.50μg/kg之间,定量限在0.17～1.65μg/kg之间;8种霉菌毒素加标回收率在75.6%～106.3%之间,相对标准偏差(RSD)为3.5%～9.3%。结论:该方法操作便捷、灵敏度高、准确可靠,能满足水产品中多种霉菌毒素残留快速检测需求。     

秸秆两步发酵法制备丁二酸研究

目的：以秸秆为原料进行生物转化制备有机酸。方法：在秸秆汽爆法预处理的基础上,以绿色木霉为菌种进行秸秆降解发酵,对降解单糖接种放线杆菌进行二次发酵制备丁二酸。结果：第一步绿色木霉发酵时,通气量0.3L/L·min,30℃发酵36h,后将发酵扩增8倍进行55℃酶解24h,五、六碳糖累积浓度达到49.4g/L。第二步产丁二酸放线杆菌发酵时,控制温度37℃、罐内CO2 压力0.11MPa、转速250r/min,发酵40h,最终产丁二酸累积浓度为67g/L。结论：秸秆制备丁二酸的两步发酵法工艺具有工业推广价值。     

酒花中原花青素的提取纯化研究

建立了酒花中原花青素的初步提取方法。以乙醇为萃取剂的有机溶剂萃取最佳条件为:pH为4.0～4.2,萃取剂乙醇浓度为50%,萃取温度85℃（沸腾）,萃取时间2h,料液比为1:20。得到酒花中原花青素粗提液,用大孔吸附树脂（φ10×200mm）为填料的层析柱进一步分离提纯。从国产ADS-8、ADS-17、ADS-21、AB-8和D101五种不同大孔吸附树脂中选择分离效果最好的AB-8树脂,进行原花青素粗提液的层析柱动态吸附实验,得到最佳大孔树脂吸附分离条件为:柱体积为14.5mL,酒花粗提液原花青素浓度为1.8mg/mL时,上样量为3mL,上样流速为20mL/h,洗脱剂乙醇浓度为100%,洗脱流速为60mL/h,洗脱剂用量为70mL。      

反向高效液相色谱测定发酵液中的聚苹果酸

采用高效液相色谱柱AlltimaTMC18(4.6 mm×150 mm,4μm)上定量测定发酵生产的聚苹果酸,流动相为乙腈和0.025 mol/L磷酸二氢钾混合溶液(磷酸调pH 2.5)(V:V=5:95),流速1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量5μL。发酵液经离心除菌体、纯沉除多糖、水解处理后进样,可以将其中的L-苹果酸完全分离定量。采用液相方法的回收率为98.70%~100.65%,RSD为0.4~1.11%。采用试剂盒的方法的回收率为96.7~97.23%,RSD为0.57~1.19%。可见,液相的精确度和试剂盒相差不大。但液相的价格相对比试剂盒要便宜很多,说明该法是测定发酵液中聚苹果酸的一种很有效的方法。