桑黄多糖分离纯化及其结构初步鉴定

本文用离子交换和凝胶层析对桑黄多糖进行了纯化,并对多糖的结构、组成及理化常数进行了分析。结果表明,经弱碱性阴离子和弱酸性阳离子交换树脂一次串联脱蛋白,蛋白脱除率达94.96%,多糖回收率为77.77%。再经凝胶层析,得到大分子量多糖组分HHM(2.84×106Da)和小分子量多糖组分HLM(5.33×104Da),HLM和HHM的旋光度分别为[α]D25= 64.8°和[α]D25= 58.4°,由IR分析,初步推测该HHM和HLM多糖为β型吡喃多糖,由TLC法测得的HHM的单糖组成为葡萄糖,HLM单糖组成分别为葡萄糖和半乳糖。     

鱼鳞胶原蛋白提取残渣中角蛋白的回收与表征

为充分开发鱼鳞的经济价值,增加其回收利用率,本研究以草鱼鱼鳞为原料,研究了分离鱼鳞胶原蛋白的最佳方法以获得较纯的角蛋白,并以提取过胶原蛋白的鱼鳞残渣为原料,运用单因素实验和正交试验确定角蛋白的最优提取工艺,再对提取的鱼鳞角蛋白进行表征。结果表明:1%的柠檬酸溶液中加0.60 g胃蛋白酶于4 ℃下浸泡24 h,胶原蛋白去除率最高,去除效果及结构完整性最好;提取草鱼鱼鳞角蛋白的最优工艺条件为:提取温度60 ℃,氢氧化钠浓度9%,料液比1:12.5。鱼鳞角蛋白的紫外吸收峰分别在218.2、280.4 nm处,SDS-PAGE电泳显示鱼鳞角蛋白的表观分子量约为48 kDa,红外结果显示角蛋白的二级结构为α-螺旋,氨基酸组分的特征与羊毛角蛋白基本一致。     

多糖的提取、分离与纯化

介绍了动物,植物和菌类多糖的提取方法,并针对粗多糖中所含的杂质不同,采用不同的方法加以去除,以达到多糖与杂质的分离。     

草鱼鱼鳞胶原蛋白的提取及其理化性质研究

以草鱼鱼鳞为原料,在低于蛋白变性温度的条件下提取酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对其理化性质进行系统测定。实验结果表明,ASC 和PSC 的热变性温度分别为30～35℃和28～35℃; PSC 在溶解性能、乳化性能和乳化稳定性方面优于ASC,而在溶液黏度、吸水性能、吸油性能、起泡性以及泡沫稳定性方面,ASC 明显好于PSC。     

大麦多糖的分离纯化鉴定

大麦多糖为β葡聚糖，通过离心透析等方法得到纯净的β葡聚糖，多糖测定为８６％，薄层层析为单一葡萄糖，表明此多糖为以葡萄糖分子连接而成的多分子长链。     

油松花粉多糖分离纯化及初步结构鉴定

采用水提法从油松花粉中提取多糖,用DEAE-纤维素52柱色谱和Sephaeryl S-200凝胶柱色谱进行分离纯化,获得2种均一组分D11和D31.经过Sephaeryl S-300凝胶柱色谱进行纯度鉴定,表明D11和D31是均一多糖,用凝胶过滤法测定D11分子量为76468u,紫外光谱证明D11不含蛋白质,红外光谱表明D11中含有多糖类物质的特征吸收峰.     

灵芝多糖的分离纯化及结构鉴定

运用DEAE-Sephadex A25离子色谱和Sepharose CL-6B凝胶色谱分离纯化得到一种灵芝多糖组分GLPS1a。高效液相凝胶渗透色谱法(high-performance gel-permeation chromatography,HPGPC)法测得其呈单一峰,重均分子质量为1.8×105D。GLPS1a经单糖组成分析、红外、核磁共振等手段分析,结果表明单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木聚糖,物质的量比率为4:2:10:1。GLPS1a具有一条以β→(1,3)位键合的吡喃葡萄糖主链,同时存在β→(1,3)阿拉伯糖、β-D-(1,4)半乳糖、α-D-(1,2)木糖和α-D-(1,6)葡萄糖的分支残基。     

黄梨渣多糖的提取、分离纯化和结构鉴定

研究黄梨渣中多糖提取、分离纯化的方法,并对其相对分子质量、单糖组成及其基本结构进行初步分析。结果表明：超声辅助提取法的最优条件为料液比1∶13（g/mL）、超声时间60?min、超声功率132?W、超声温度57?℃,此条件下的多糖提取量最高,为62.375?mg/g。Sevag法与木瓜蛋白酶联合去除蛋白的方法效果最佳,蛋白脱除率和多糖损失率分别为75%和24.71%,工艺操作简易、省时,最大限度去除蛋白质的同时可保证多糖得率。H2O2法脱色率最高达78.56%,且多糖损失率最低仅为25.86%。DEAE-52纤维素柱层析纯化后得到梨渣多糖的主要成分为LPB-C组。经测定,LPB-C组的黏均分子质量为8.47×104?g/mol,由甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖4?种单糖组成,物质的量比为3.3∶2.3∶10.6∶23.2,是一种含有β糖苷键的吡喃型多糖。该研究为今后黄梨渣的进一步开发和利用提供一定参考。     

大麦多糖的分离纯化鉴定

大麦多糖为β葡聚糖,通过离心透析等方法得到纯净的β葡聚糖,多糖测定为86％,薄层层析为单一葡萄糖,表明此多糖为以葡萄糖分子连接而成的多分子长链。     

草鱼鱼鳞胶原蛋白酸酶分步提取工艺研究

为实现鱼鳞胶原蛋白的高效提取,在优化脱钙、混酸法和酶法提取工艺基础上,对鱼鳞胶原蛋白的酸酶进行分步提取。研究发现,鱼鳞最佳脱钙工艺为料液比8:100(g/mL),盐酸浓度1.0 mol/L,反应时间1.0 h,反应温度20℃;混合酸法提取鱼鳞胶原蛋白的最佳条件为醋酸料液比1:12(g/mL),柠檬酸料液比1:10(g/mL),乳酸料液比1:12(g/mL),即混合酸料液比为1:34(g/mL),其中,0.8 mol/L柠檬酸、1 mol/L乳酸、0.8 mol/L醋酸的体积比为6:5:6,提取时间2 d,胶原蛋白的提取率为48.14%;最佳酶法提取条件为胃蛋白酶用量450 U/g,提取温度30℃,提取时间72 h,该条件下提取率为45.26%。酸酶耦合法优于单一方法或同种方法两次提取的效果,可实现酸溶性和酶溶性胶原蛋白的连续提取,先酸后酶法胶原蛋白的提取率达84.61%,SDS-PAGE凝胶电泳发现其为Ⅰ型胶原蛋。     

草鱼肝胰中CPIs初步分离鉴定及其活性测定

首先比较了偶氮酪蛋白(Azocasein)法和荧光合成肽底物法,在监测草鱼肝胰半胱氨酸蛋白酶抑制剂CPIs(cysteine proteinase inhibitors)活性时的适用性。进而通过凝胶过滤高效液相色谱法、反相酶谱和免疫印迹法,对草鱼肝胰中CPIs的分子量分布及可能的家族类型进行定性鉴定。结果表明在粗提液中加入丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂(40 mmol/L PMSF或0.4 mmol/L Pefabloc SC),或经90℃加热5 min,仅荧光合成肽底物法可准确地监测到CPIs活性的变化。液相色谱结果显示,草鱼肝胰中存在分子量(98、26、12、5~1 ku)不同的CPIs活性部分。但反相酶谱法仅能够判断其中大于20 ku的CPIs。而免疫印迹法证明存在约12 ku的Cystatin(家族II)类型CPIs,发现小于12 ku的显色条带,可能是该蛋白降解形成的低分子量的活性片段。      

木瓜蛋白酶制备草鱼鳞胶原肽的工艺优化及产物特性分析

以草鱼鱼鳞为对象,研究木瓜蛋白酶酶解条件对鱼鳞蛋白酶解产物水解度和氮收率的影响,以获得较高氮收率及水解度的鱼鳞胶原肽。结果表明,水解温度、起始pH值、底物浓度和加酶量对木瓜蛋白酶水解产物的水解度和氮收率都有显著影响(p<0.05);木瓜蛋白酶在底物浓度为5%、起始pH值为5.0、加酶量为3000 U/g蛋白、水解温度为60℃条件下水解鱼鳞120 min,鱼鳞水解产物的水解度和氮收率都较好,其水解度为12.68%、氮收率为89.42%;且水解产物在酸性、中性及碱性条件下的溶解性均在97%以上,分子量呈连续分布,主要分布在200～ 5000 u之间。     

桦褐孔菌多糖的分离纯化及其组成分析

为更好地开发利用桦褐孔菌这一丰富的真菌资源,采用水提法得到桦褐孔菌粗多糖（CIP）,经DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析、SepharoseCL-6B和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到一个桦褐孔菌多糖组分（IP2a）。采用高效液相色谱法、比旋度法及琼脂糖电泳法鉴定其纯度,气相色谱法、高效液相色谱法及红外光谱研究其组成、相对分子质量和结构。结果表明IP2a为均一组分;IP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为2.3∶4.5∶1∶2.5,其相对分子质量为86053u,含有α-型糖苷键。IP2a是一种不含核酸和蛋白质的杂多糖,是桦褐孔菌水溶性多糖的重要组成。      

香菇子实体多糖Le-Ⅲ的提取、分离及纯度鉴定

对香菇子实体多糖其中一个级分Ｌｅ－Ⅲ的提取分离和纯度鉴定等方面进行了研究。     

海星多糖的分离纯化及鉴定

目的:建立海星多糖分离纯化的方法,并对纯化组分进行鉴定。方法:用碱提-酶解法提取海星多糖,再用离子交换层析和凝胶过滤层析法进行纯化;用理化方法和光谱法对纯化组分进行鉴定。结果:分离纯化的海星多糖不含蛋白质,含硫酸基,其中SSP1含己糖醛酸18.5%,含氨基己糖22.6%,含岩藻糖16.8%。结论:获得海星多糖6个纯化组分(SSP1-6),其中SSP1由己糖醛酸、氨基己糖、岩藻糖和硫酸基组成,其组成摩尔比约为:1.00∶1.10∶1.07∶(未测含量)。     

小米多糖分离纯化及抗氧化活性研究

以河峪黄小米为原料,通过响应面实验考察料液比、超声时间、提取温度、纤维素酶量对小米多糖提取量的影响,并对小米多糖进行分离纯化和体外抗氧化活性研究。结果表明：超声辅助酶法提取小米多糖的最佳工艺：料液比为1:22（g/mL）,加酶量1%,超声时间21 min,提取温度60 ℃,此时小米多糖提取量为 30.34 mg/g。木瓜蛋白酶法-Sevag法蛋白脱除率为78.23%,多糖保留率为89.42%。用D315树脂法脱色率为88.00%,多糖保留率为80.20%。DEAE-52纤维素色谱柱和Sephadex G-100柱色谱纯化得到多糖组分MP-1。MP-1对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子清除率最高分别为75.33%、70.69%、68.62%,对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子半抑制浓度分别为1.105 mg/mL、0.200 mg/mL、1.371 mg/mL,表明小米中多糖具有较好的抗氧化能力。     

枇杷多糖的提取纯化及理化性质初步研究

本文建立了枇杷多糖的提取纯化方法,并对提取的枇杷多糖进行了理化性质分析。枇杷多糖经40％乙醇分级得到的组分Lens 5,用Sephadex G-150凝胶柱层析得到单一峰,Lens 5的酸性水解液经纸层析和薄层层析分析,其单糖组成为葡萄糖和木糖,用Sephadex G-150凝胶柱层析法测得其相对分子量为43000道尔顿。     

杏鲍菇碱溶性多糖的酶法提取及其结构的初步分析

以杏鲍菇子实体为原料提取并分离纯化,得到碱溶性多糖组分,通过采用正交实验得到了提取碱溶性多糖的最佳方案。该多糖经层析方法和Smith降解等反应,证实其为单一组分,该组分多糖由葡萄糖为单一糖基组成;并证实了该多糖具有β(1→3)及β(l→6)连接的糖苷键。     

超声波辅助酶法提取草鱼皮胶原蛋白及其纯化

本文研究了超声波辅助提取草鱼皮胶原蛋白的工艺。以超声功率、超声时间和酶解时间为实验因素,胶原蛋白提取率为响应值,利用Box-Behnken设计实验及响应面法分析实验,确定其最佳提取工艺条件。结果显示:最佳工艺条件为超声功率310 W,超声时间10 min,酶解时间29 h,此时胶原蛋白提取率达到68.67%,与模型理论预测值（68.80%）较为相近,相对误差仅为0.189%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱（SDS-PAGE）和傅里叶红外光谱（FTIR）谱图,对比超声波作用下与无超声波作用的胶原蛋白发现,超声波对胶原蛋白结构无明显影响。