桑树韧皮纤维生物脱胶菌种产果胶酶的分离及应用研究

从沤麻水筛选出的No.9菌果胶酶经(H4)2SO4分级沉淀、透析,CM-Sephadex C-50离子交换柱、Sephadex G-100柱凝胶层析分离纯化,分离出电泳纯的果胶裂解酶,测得分子量为43 kD,最适反应温度为50℃,最适pH值为5.2;利用气相色谱法测得发酵液中果胶酯酶酶活为7μg/mL.     

黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵产纤维素酶的分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵所产纤维素酶进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100 凝胶柱层析,得到 5 个洗脱峰,其中峰 2 含内切葡聚糖苷酶和外切葡聚糖苷酶,且内切葡聚糖苷酶活最高;峰 3 含内切酶、外切酶及 ?-葡萄糖苷酶,酶系较全;峰 5 含内切酶和外切酶;峰 1 和峰 4 没有纤维素酶活性。采用 DEAF FF 弱阴离子交换柱层析对峰 2 进行了分离纯化,从中分离纯化得到一种内切葡聚糖苷酶组分,经 SDS-PAGE 电泳分析,其分子量为 61.5 KD。酶学性质研究结果表明,CMC 酶活在 pH4.0～6.0 的条件下,可保持初始酶活的 70 %～80 %,最适酶反应 pH 为 5.0;温度在 30～50 ℃范围内,酶活较高,最适酶反应温度为 50 ℃,若超过 60 ℃,酶活迅速下降。     

Isolation and Purification of Cellulase Produced by Mixed. Fermentation of AspergiUus niger Ⅲ and Trichoderca viride Ⅰ and Their Enzymatic Properties

对黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵所产纤维素酶进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析,得到5个洗脱峰,其中峰2含内切葡聚糖苷酶和外切葡聚糖苷酶,且内切葡聚糖苷酶活最高;峰3含内切酶、外切酶及β-葡萄糖苷酶,酶系较全面;峰5含内切酶和外切酶;峰1和峰4没有纤维素酶活性。采用DEAF FF弱阴离子交换柱层析对峰2进行分离纯化,从中分离纯化得到1种内切葡聚糖苷酶组分,经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为61.5 KD。酶学性质研究结果表明,CMC酶活在pH4.0～6.0的条件下,可保持初始酶活的70%～80%,最适酶反应pH值为5.0;温度在30～50℃范围内,酶活较高,最适酶反应温度为50℃,若超过60℃,酶活迅速下降。     

黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵产纤维素酶的分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵所产纤维素酶进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析,得到5个洗脱峰,其中峰2含内切葡聚糖苷酶和外切葡聚糖苷酶,且内切葡聚糖苷酶活最高;峰3含内切酶、外切酶及β-葡萄糖苷酶,酶系较全面;峰5含内切酶和外切酶;峰1和峰4没有纤维素酶活性。采用DEAF FF弱阴离子交换柱层析对峰2进行分离纯化,从中分离纯化得到1种内切葡聚糖苷酶组分,经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为61.5 KD。酶学性质研究结果表明,CMC酶活在pH4.0～6.0的条件下,可保持初始酶活的70%～80%,最适酶反应pH值为5.0;温度在30～50℃范围内,酶活较高,最适酶反应温度为50℃,若超过60℃,酶活迅速下降。     

绿藻硫酸鼠李聚糖酶性质研究

以绿藻硫酸鼠李聚糖为碳源,从青岛海域中筛选到1株可分泌绿藻硫酸鼠李聚糖酶的菌株SC127,通过硫酸铵沉淀、Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析等方法对其所产酶进行了分离纯化,并对纯化后的硫酸鼠李聚糖酶性质作了初步研究。研究结果显示:SC127菌株属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),所产硫酸鼠李聚糖酶经分离纯化后由SDS-PAGE电泳检验呈单一条带,测得其分子质量为110.6 k Da,此酶最适温度为38℃,最适p H为8,且适用于较广的温度与p H范围。对酶解产物分析表明:该硫酸鼠李聚糖酶可降解硫酸鼠李聚糖得到以聚合度4为主的硫酸鼠李寡糖。     

毛云芝菌固体发酵产漆酶的分离纯化及酶学性质

作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。     

一株深海来源苏云金芽孢杆菌SWJS07所产蛋白酶的分离纯化及性质研究

利用超滤、硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephadex G-75分子筛柱层析对一株南海深海来源菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)SWJS07所产蛋白酶进行分离纯化,纯化后经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,相对分子质量为37.0 k Da,酶的比活力提高了6.39倍,回收率为37.14%。研究其酶学性质表明,该蛋白酶最适催化温度为55℃,在30℃~45℃下稳定性较高,保温300 min残留酶活在80%以上;最适p H 6.5,在p H 6.0~9.0蛋白酶稳定,4℃放置24 h残留酶活在80%以上;2 m M Ca2+、Mn2+对蛋白酶有不同程度的激活作用,而Hg2+、Cd2+、Al3+则强烈地抑制蛋白酶活;当在蛋白酶中添加2 m M Ca2+、Mn2+时,其最适催化温度分别为60℃和55℃,蛋白酶活分别提高了32.86%和28.35%,60℃保温30 min相对酶活基本保持不变,与纯酶(相对酶活残留21.02%)相比蛋白酶的热稳定性显著提高;EDTA-Na2可强烈抑制蛋白酶活,推测该蛋白酶属于金属蛋白酶。     

地衣芽孢杆菌A 产碱性蛋白酶的研究

研究从经过60Co 照射的东海香参水解液中分离出的地衣芽孢杆菌A 产碱性蛋白酶的产率、分离纯化与生化特性。经硫酸铵沉淀、DEAE- Sepharose 离子交换层析和Sephadex G-75 凝胶层析分离纯化后,碱性蛋白酶产率为5.8%;经SDS- PAGE 电泳测得其分子质量为35kD。酶的最适反应温度为50℃,最适pH 值为11,热稳定性较好。该蛋白酶具有一定的耐氧化能力。     

米曲霉As-W6脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究

米曲霉As-W6的脂肪酶发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤层析纯化后得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为86.7倍,回收率为23.2%,相对分子质量为40.8 ku,酶学性质研究结果表明,该脂肪酶最适反应温度和最适p H分别为40℃和7,在40℃以下和p H6~8之间有较好的稳定性;Ca2+、Mg2+和丙酮能够明显促进提高脂肪酶的活性,而Cu2+、Fe2+、Mn2+和SDS对其有显著抑制作用;当大豆油作为底物时该脂肪酶的酶活力最高,表明其对大豆油具有显著的特异性。     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的特性研究

对裂褶茵所产内切β-1,3-葡聚糖酶进行有效分离纯化并用电泳法对其纯度进行鉴定,进而研究其酶学特性.结果表明:经过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤分离纯化得到电泳纯分子量约为45 kD的内切β-1,3-葡聚糖酶,其最适pH为5.0,最适温度为45℃;Fe<'2+>、B...     

粪肠球菌SK32.001精氨酸脱亚胺酶的分离纯化及酶学性质研究

对Enterococcus faecalis SK32.001所产的精氨酸脱亚胺酶(ADI)进行分离纯化并对其酶学性质进行研究。实验结果表明,通过细胞破碎,硫酸铵沉淀,Hi Prep Q FF 16/10阴离子交换层析,Sephadex G-75等纯化方法获得电泳纯精氨酸脱亚胺酶,分子量约为42ku,催化最适温度和p H分别为50℃和6.5,在30~40℃和p H5.5~7.5时较稳定。不同浓度的Zn2+对酶活性影响较大。1mmol/L的Zn2+和10mmol/L的Co2+、Ca2+、Mg2+对酶活有较大的促进作用,10mmol/L的Cu2+对酶的抑制作用最强。精氨酸脱亚胺酶在最适反应条件测定其米氏常数为1.33mmol/L,最大反应速度为2.41μmol/min。     

真菌发酵液中纤维素酶分离提取工艺研究

该研究建立了两种分离提取纤维素酶的方法。二级盐析-G-75凝胶色谱法分离提取工艺为：纤维素酶发酵液经0.22 μm微滤膜预处理后,依次采用饱和度为20%、80%的（NH4）2SO4对其进行二级盐析,经G-75凝胶色谱层析,冷冻干燥后测得纤维素酶活性为13 675.76 U/g,总酶活收率为91.96%,总纯化倍数为31.41;二级超滤-G-75凝胶色谱法分离提取工艺为：纤维素酶发酵液经0.22 μm微滤膜预处理后,以30.165 mL/（min·m2）的膜通量分别经6×104 Da和1×104 Da的超滤膜分离,操作压力分别为0.050 MPa和0.037 MPa,经G-75凝胶色谱层析,冷冻干燥后测得纤维素酶活性为12 769.87 U/g,总酶活收率为92.91%,总纯化倍数为21.23。二级盐析-G75凝胶色谱法适合小规模间歇操作;二级超滤-G-75凝胶色谱法适合大规模连续操作。     

一株广西红树林青霉属菌株纤维素酶的纯化及酶性质研究

一株广西红树林青霉属菌株经液态发酵,提取纤维素酶粗酶液,经硫酸铵盐析,Sephadex G-25脱盐和Sephadex G-100柱层析,高效液相色谱结果显示出3个峰。根据标准蛋白质分子量大小和保留时间得出3种酶的相对分子质量分别为56.4ku、52.6ku和49.0ku,初步判断分别是β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶EG和外切葡聚糖酶CBH,EG的纯化倍数和酶活回收率分别为8.5倍和26.5%,CBH的纯化倍数和酶活回收率分别为29.0倍和87.6%,滤纸酶FPase的纯化倍数和酶活回收率分别为16.9倍和57.2%。酶学性质表明该纤维素酶系最适反应条件为:CMC为55℃、pH值为3.2;CBH为45℃、pH值为3.2;FPase为55℃、pH值为3.6,其最大酶活分别为:1262U/mL、612U/mL和943U/mL。     

康氏木霉诱变菌株纤维素酶系的分离纯化与酶学特性研究

探讨来源于康氏木霉诱变菌株SG0026 10L发酵罐发酵液中纤维素酶系的分离纯化过程及其酶学性质。采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析柱和CM-Sepharose FF阳离子交换层析等分离纯化技术,从康氏木霉诱变菌株发酵液中分离纯化得到3个电泳纯的纤维素酶系组分(内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶)。对纯化的电泳纯内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的酶活进行测定,发现3种酶的比活力分别为4.67±0.06 IU/mg、5.16±0.08 IU/mg和12.52±0.12 IU/mg。采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定其分子量,发现其分子量分别为78.1、91.2和83.1k Da。利用Linewaeaver-Burk法对3种酶的动力学参数进行测定,发现3种酶的Km值分别为3.84、6.62和6.21 mg/m L,Vmax值分别为2.29、1.74和2.19 mg/(min·m L)。在此基础上,对3种酶的反应温度和pH进行了研究,发现3种酶的最适反应温度分别为50、50和55℃,最适反应pH均为5.0。     

白地霉红枣果胶酶的分离纯化及酶学性质的研究

为了得到专用于红枣浓缩汁的果胶酶制剂,通过硫酸铵盐析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析技术对白地霉发酵产得果胶酶粗酶液分离纯化,得到电泳纯的果胶酶,并研究了其相关的酶学性质。结果表明:发酵上清液经三步分离纯化后比活力达到8036.34 U/mg,纯化倍数为3.12,回收率37.22%,SDS-PAGE电泳检测分子质量为59.62 ku。最适的作用温度为50℃,p H为6。在低于50℃保温2 h酶活剩余80%以上,60℃保温1 h酶活损失60%;p H稳定范围较窄,在p H(5~7)范围内稳定性较好。Ca~(2+)、Mg~(2+)、K~+对果胶酶有激活效应,尤以Ca~(2+)(180.29%)最为突出,Mn~(2+)、Ag~+、Fe~(3+)对果胶酶有抑制作用,其中Ag~+(44.52%)抑制效果显著。通过Lineweave-Burk作图法得到K_m=8.75 mg/m L,V_(max)=60.24μg/min·m L,表明果胶酶对底物具有较强的亲和力。     

枯草芽孢杆菌纳豆激酶分离纯化及酶学性质

利用30%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Sephadex G-50凝胶过滤层析对浅盘发酵纳豆激酶进行分离纯化并对其酶学性质进行初步研究。以纤维平板法测定纳豆激酶活力,SDS-PAGE检验纯化效果。结果表明:纯化后纳豆激酶为电泳纯,分子质量约27.518kD,纯化倍数和酶活回收率分别为19和42.1%,纳豆激酶最适温度为50℃,最适宜pH值为8.0。     

绿豆β-葡萄糖苷酶的分离纯化与性质研究

本文采用硫酸铵分级沉淀、超滤、DEAE-52离子交换、Sephadex G-100凝胶层析纯化的方法,对绿豆β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化,并对纯化酶的部分特性进行了研究。研究结果表明,绿豆中含有两种β-葡萄糖苷酶同功酶,两种同功酶分别被纯化了3.02倍和7．24倍,收率分别为46．75％和91.14％：同功酶的分子量分别为92．4kDa和140．0kDa,其中一种为双亚基蛋白酶：该同功酶的最适反应温度分别为50℃和20℃;最适反应pH值分别为6．0和5．0;两同功酶对对硝基苯-β-D-葡萄糖苷有相似的亲和力。     

南美白对虾虾头内源酶的分离纯化

对南美白对虾虾头的内源酶进行分离纯化及酶学性质的研究。利用正交正交试验优化了硫酸铵粗提内源酶最佳工艺条件:缓冲溶液pH6.8,硫酸铵一级沉淀饱和度20%,硫酸铵二级沉淀饱和度80%。虾头内源酶经硫酸铵分级沉淀后,再经Sephadex G-50葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等3个酶活峰。对酶活最高的组分I进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱分析,表明组分Ⅰ中主要活性酶分子质量约为41.0kDa。凝胶层析分离组分Ⅰ最适作用pH为7.0～9.0,最适作用温度为60～70℃。     

一株嗜热菌木糖异构酶的纯化与性质研究

研究了1株嗜热菌(Anoxybacillus flavithermus)所产木糖异构酶的分离纯化以及酶学性质。结果表明,经硫酸铵沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤、纤维素DE-52弱阴离子交换柱和Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析得到的木糖异构酶,分子量约为181 ku,由4个相同分子量的亚基组成。酶反应的最适温度为80℃,最适为pH为7.0且最适pH范围宽泛,pH6.0~11.0酶反应活性能保持80%左右。该酶热稳定性及耐碱性能良好,70℃保温1 h后酶活仍能保持近80%左右;pH5.0~8.0保温1 h后酶活仍能保持近80%以上,甚至pH12.0保温1 h后酶活性仍能保持40%左右。Mn2+和Co2+对酶活性有明显促进作用,Zn2+、Cu2+以及Al3+对酶活性有一定程度的抑制。     

灰平链霉菌Streptomyces griseoplanus S501产外切菊粉酶的分离纯化及酶学性质研究

1株产外切菊粉酶的海洋放线菌灰平链霉菌Streptomyces griseoplanus S501发酵粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、透析脱盐后,分别采用Sephadex G-75凝胶、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析和SDS聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)分离纯化,得到菊粉酶不同活性组分。纯化倍数为10.42倍,比酶活249.5 U/mg(蛋白),相对分子质量为28.184 k Da。酶学性质研究结果表明,该菊粉酶的最适温度和p H值分别为50℃和5.0。在50℃和p H5.0条件下,以菊粉为底物时,该酶的Km值和vmax值分别为3.83 mg/m L和4.64 mg/(m L·min)。金属离子对酶活性影响实验表明,Mg2+、I-、Li+、Fe3+、Al3+和K+对该菊粉酶酶活有很强的抑制作用,Cu2+、Ca2+和Ag+对该菊粉酶活性具有一定促进作用。