毛云芝菌产漆酶液体培养条件的优化

探索了不同的培养条件下毛云芝菌产漆酶的情况,发现该菌漆酶属于组成型漆酶,其酶活力高,产酶周期短,酶的合成与菌体生长没有明显相关性;以漆酶的酶活为指标,采用正交试验设计方法对毛云芝菌液体培养的摇瓶生长条件进行了优化研究.结果表明:优化培养基的组成(质量分数)为麸皮3%,蛋白胨0.2%,牛肉膏0.3%,MgSO4·7H2O 0.05%, KH2PO4 0.3%; TE 6%(体积分数),VB1 20 mg/L;自来水,pH自然.该营养条件下的酶活为1 668 U/mL,约是优化前培养基酶活的16倍,为工业化生产提供了一定的理论依据.     

灵芝突变株G1502漆酶的分离纯化及酶学性质研究

对灵芝突变株G1502发酵液中漆酶的分离纯化方法及酶学性质进行了初步研究.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析发现,G1502在发酵时只分泌一种漆酶.发酵液经透析浓缩、DEAE-纤维素柱层析,比活力提高 24.28倍,酶活力回收率18.66%.以愈创木酚为底物时该酶的动力学常数K m=1.94×10-4mol/L,Vmax=2.28×10-6 mol/L·min;愈创木酚浓度高时对酶活性有抑制作用.K 对酶有激活作用,Cu2 激活作用不大,Fe 2 、Co2 、Ca2 、Na 、Ba2 对酶活力有抑制作用.     

灵芝固态发酵三七渣产漆酶的培养基配方优化

该试验通过单因素试验考察了酵母浸出粉添加量、硫酸铜添加量、培养基初始水含量、磷酸二氢钾添加量、硫酸镁添加量对灵芝固态发酵三七渣产漆酶的影响,并采用正交试验对培养基配方进行了优化。研究结果表明,优化的培养基配方为采用过60目筛的三七渣10 g,酵母浸出粉添加量3%,磷酸二氢钠添加量0.15%,硫酸铜添加量0.02%,硫酸镁添加量0.2%,培养基初始水含量60%,pH自然。在此优化条件下,灵芝固态发酵三七渣产生的漆酶活性可达8.69 U/g。     

漆酶高产菌的筛选及产酶优化

采用愈创木酚初筛平板从干枯的木头中筛选得到一株产漆酶活力较高的菌株SYBC-L3(以下简称L3),在含有愈创木酚的PDA平板上生长时菌落周边出现明显的铁红色变色圈.通过对L3发酵产漆酶的单因素试验及L9(34)正交试验,确定了最适发酵条件,优化后的培养基为:麦芽糖 12 g/L, 豆粕 6 g/L,CuSO4 0.5 g/L,KH2PO4 1 g/L,Na2HPO4 0.2 g/L,MgSO4 ·7H2O 0.5 g/L,MnSO4 0.034 g/L, 愈创木酚0.8 mmol/L,吐温-80 0.5g/L;优化后的培养条件为:接种量10%(V/V),装液量80 mL/250 mL, 起始pH 4,转速200 r/min,温度30 ℃,以DMP为底物在第8天时酶活可达60 130 U/L,比优化前提高42倍.     

产腈水合酶菌株的驯化选育及其产酶条件的优化

以Rhodococcussp YL 1为出发菌株 ,通过逐渐增加培养基中丙烯腈的浓度重复继代培养 ,得到 1株酶活为 79 8U/mg的腈水合酶高活力菌株YL 2 ,酶活比出发菌株YL 1提高了 87%。对菌株YL 2的产酶条件进行了优化。结果表明 ,葡萄糖、诱导剂脲、Co2 + 及pH是影响腈水合酶高效表达的主要因素。在葡萄糖浓度为 2 0g/L ,诱导剂脲的添加量为 0 0 6g/L ,钴离子加入量为 0 3g/L ;培养温度为 30℃ ,培养基初始 pH为 7 0的条件下培养 4 0h后 ,酶活可达 134 5U/mg ,比优化前提高了 6 9%。     

一种产漆酶真菌的鉴定及其漆酶在生物漂白中的应用

在实验室分离纯化的一株产漆酶白腐菌,通过形态观察实验和扩增18s rDNA序列分析,研究了其子实体、担孢子形态及分子特征,对菌种进行分类鉴定,得知该菌种属革耳菌。该荣种稻草固体发酵产生漆酶高峰出现在第21d,酶活为3895 IU／L,漆酶协同介体ABTS处理硫酸盐竹浆,后经过氧化氢全无氯漂白,结果表明,经LOP和OLQP漂白的纸浆比未经漆酶处理的QP或OQP漂白的纸浆白度提高4～7个百分点,卡伯值下降,并保持较高黏度。这表明该菌产生的漆酶在介体存在时可用于竹子硫酸盐浆的生物漂白。     

纤维素降解芽孢菌的筛选及产酶条件优化

为筛选高效的纤维素降解芽孢菌,利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活性（以滤纸酶活表示）为评价指标进行复筛,从腐木中分离筛选出2株高产纤维素酶菌株K1、K2;结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,分别鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对培养条件进行单因素优化和正交试验优化,初步确定菌株K1最佳产酶条件为培养时间3 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量5%、装液量40%,在此优化条件下滤纸酶活为98.4 U/mL,是优化前的2.1倍。菌株K2最佳产酶条件为培养时间2 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量6%、装液量为30%,在此优化条件下,滤纸酶活为86.7 U/mL,是优化前的1.8倍。     

产几丁质酶菌株GXUN-20的筛选、鉴定及其产酶条件优化

为了提高虾蟹等海产品废弃物利用率及其附加值,从广西合浦县大神木海鸭场附近滩涂沉积物（虾蟹及贝壳废弃物）中分离、纯化、筛选出一株产几丁质酶菌株GXUN-20,经过生理生化鉴定以及16S rDNA序列构建系统发育树,初步判断该菌株为厚壁溶杆菌（Lysobacter firmicutimachus）。以几丁质酶活力为指标,对GXUN-20菌株进行发酵条件单因素优化,在单因素优化结果较显著的4因素（氮源浓度、发酵液初始pH、几丁质粉末浓度、接种量）基础上进行4水平正交试验及正交实验方差分析。结果显示:氮源浓度对产酶影响显著（P=0.013<0.05）,在氮源为1 g/L黄豆饼粉,几丁质粉末为20 g/L,接种量为3%,发酵液初始pH8.4,30 ℃、200 r/min发酵6 d的条件下,发酵液中几丁质酶活力最大,达到0.965 U/mL,是优化前酶活力的6.89倍。本研究结果为GXUN-20菌株产几丁质酶进一步开发与应用提供了基础数据和实验方法。     

葡萄浆果中β-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

以对-硝基苯酚β-D-葡萄糖苷为底物,对霞多丽葡萄浆果中β-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究.结果表明,酶反应底物在405 nm处有最大的吸光值,霞多丽葡萄浆果粗酶提取液PVP添加量为3%最理想,在37℃酶促反应曲线线性最好,在40℃和柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH6.0中酶活性较高.通过正交试验确定霞多丽葡萄酒浆果的β-葡萄糖苷酶最佳检测条件是37℃,在磷酸-柠檬酸pH 6.0缓冲液中反应90 min.     

产纤维素酶真菌的筛选及其产酶条件的研究

从腐朽的玉米秸秆上及土壤中筛选出了1株维素酶高产菌株HY-07,并以玉米芯和麸皮为主要原料,通过单因子试验和正交试验对该菌的产酶条件进行了研究.其最佳产酶条件为250mL三角瓶装料量6g,玉米芯麸皮为1114,固液比 10.8,吐温-80添加量为0.2%,K2HPO4含量0.05%,MgSO4·7H2O含量0.025%,(NH4)2SO4含量1%,pH值自然,30℃恒温培养7d,其酶活力达到674.44U/g,比初始增加了50.8%.     

灵芝原生质体诱变选育高产漆酶突变株的研究

对一株产漆酶活性较高的灵芝(Ganoderma.lucidumKarstNo.1)原生质体的制备、再生及紫外诱变育种进行了研究,获得了1株漆酶活性比对照菌株提高2.83倍的突变株G301。实验所确定的原生质体最佳制备条件为:以蔗糖为稳渗剂,采用4%(W/V)溶壁酶与2%(W/V)蜗牛酶等体积混合酶液,在30℃、pH6.0下,对液体培养48h的灵芝菌丝体酶解1h;同时实验所确定的原生质体诱变的适宜条件为:30W紫外灯距离40cm照射30s。     

灵芝菌丝体总三萜超声辅助提取工艺优化

以灵芝菌丝体为原料,在单因素试验基础上,通过正交试验和Box-Behnken响应面设计法优化超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜工艺。结果表明,超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜正交试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间50 min、pH 8、料液比1∶40(g/mL),在此条件下灵芝菌丝体三萜平均提取率为0.76%;超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜响应面试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间42 min、pH 8、料液比1∶30(g/mL),在此条件下,灵芝菌丝体总三萜平均提取率为1.09%,与最大预测值1.13%相差0.04%。这两种方法得到的提取工艺参数可靠,可为灵芝三萜工业化生产提供技术参考。     

灵芝深层培养的药质培养基及发酵工艺条件优化

研究灵芝发酵的药质(六味地黄丸)培养基最优配方组成及提高发酵生物量的优化工艺条件。采用均匀设计对影响发酵生物量的关键因子及其水平的相互关系进行研究。通过回归方程求解得到药质培养基最优组合;应用正交试验优化药质发酵的工艺条件。结果表明:生物量最佳的药质培养基组分是:六味地黄丸10g/L、黄豆粉50g/L、玉米粉10g/L、葡萄糖8.29g/L、MgSO41.0g/L、KH2PO41.0g/L、VB120～40mg/L。优化发酵条件为:接种量10%,通气量0.5m3/min、搅拌速度150r/min、发酵周期144h。均匀设计和正交试验结合,实现了对灵芝药质发酵条件的优化。     

酿制灵芝功能饮料醋工艺参数的优化

通过自分离的醋酸工程菌在灵芝深层发酵液中的生物反应,对生产灵芝功能饮料醋的工艺条件进行了实验研究。采用正交实验与神经网络相结合的方法,建立了灵芝功能饮料醋生产工艺因素之间的非线性映射模型。通过优化获得最佳生产工艺条件是:酒精加入量:6．5±0．2％;灵芝液加入量:30±1％;生物反应时间:72h;醋酸茵接种量:10％。     

灵芝菌丝体深层发酵工业化生产的研究

目的:采用生物发酵工程技术进行灵芝菌丝体多糖扩大生产;方法:利用农副产品(如玉米粉、豆粕粉)作培养基,在发酵罐中,根据其控制参数(如接种量、总糖量、还原糖、pH值、通风量、罐压、温度、生长因子),进行灵芝菌丝体多糖工业化扩大生产。结果:经过20批容积为10m3,定容为7.5m3发酵罐正常试验,生产周期平均为150h;pH值从6.5降至3.5;放罐后灵芝菌丝体经均质和喷雾干燥后其干粉平均每罐重量为66.1kg,干粉平均收率为8.76kg/m3,干粉中纯多糖含量为68.5g/kg,每罐纯多糖重量为4.225kg。镜检菌丝壁上无明显“芽头与锁状联合”,并有少量菌丝体自溶,无杂菌。结论:试验证明本工艺方案是成功的,是值得推广的新工艺。     

响应面法优化Ganoderma lucidum产漆酶种子培养基

以菌丝体生物量为指标,采用响应面法对产漆酶的灵芝菌UIM281的种子培养基组成进行了研究。首先采用单因素实验确定影响UIM281菌丝体生长的碳源、氮源及无机盐的种类和浓度范围。在此基础上,应用Box-Behnken设计对影响菌丝体生物量的显著因素进行优化,最终建立了以菌丝体生物量为响应值的二次回归方程模型,获得了最适的菌丝体增殖种子培养基。结果表明,在VB10.1g/L的条件下最佳种子培养基组成为:玉米粉18.0g/L,豆饼粉12.3g/L,MgSO4·7H2O 1.8g/L,在28℃,150r/min条件下振荡培养6d后,可获得24.18g/L菌丝体,可为漆酶发酵培养提供质优量大的接种体。      

富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵条件优化

以富硒大豆为原料,采用液体发酵技术对富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵条件进行研究。富硒大豆经浸泡、磨浆、过滤、煮沸后接种灵芝菌种发酵,以水解度为指标,通过单因素和正交试验对温度、初始pH值、摇瓶转速及豆浆质量分数等发酵条件进行优化。结果表明：富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵最佳条件为发酵温度28℃、培养基初始pH5.8、摇瓶转速160r/min、豆浆质量分数5%、发酵时间132h。在最佳发酵条件下,大豆蛋白的水解度达27.8%、大豆多肽产量7.0178mg/L、多糖产量1.75mg/L、灵芝酸产量0.66mg/L。     

脉冲超声辅助提取灵芝多糖的试验研究

以灵芝饮片为原料,用脉冲超声辅助提取灵芝多糖,由单因素试验和正交试验确定的最佳提取工艺参数为超声功率1500W、液料初始温度80℃、提取时间90min、液料比50︰1mL/g、脉冲超声间歇时间1s、工作时间3s。在此条件下,灵芝多糖的提取率为3.39%。与传统水提法相比,在液料初始温度和液料比取值相当的情况下,用脉冲超声辅助提取,多糖的提取率提高了26.02%,提取时间缩短了50%。