短棒状杆菌有效成分的分离及其作用

目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用。方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应。结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热。结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用。     

我国与英国短小棒状杆菌苗的质量比较

本文对我国与英国短小棒状杆菌苗进行了无菌试验、毒性试验、热原试验、脾激活试验和抑瘤试验,均达到中国生物制品规程要求。其中我国菌苗的脾指数和抑瘤试验的小鼠保护率均高于英国菌苗。     

水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)的大鼠长期毒性试验

目的观察SD大鼠注射水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)后可能出现的毒性反应、毒性反应的恢复情况及可能出现的延迟性毒性反应。方法将SD大鼠随机分为8组,1~4组(主试验组)分为阴性对照组(生理盐水,2.5 ml/只)、细胞基质对照组(SV-1细胞基质,2.5 ml/只)、疫苗低剂量组(水痘减毒活疫苗1剂)和疫苗高剂量组(水痘减毒活疫苗5剂),每组30只;5~8组(卫星组)分组同1~4组,每组10只。均经大鼠颈背部皮下单点注射,每2周注射1次,连续注射3次,末次免疫后6周为恢复期。试验期间进行一般临床观察、体重、食量、体温、眼科、血细胞计数、凝血功能、血液生化、免疫指标、大体解剖观察、主要脏器称重、组织病理学等检查。结果试验期间,主试验组各组动物一般状况良好,各项指标检测均未见有毒理学意义的规律性改变,且动物脏器重量均未见与疫苗相关的明显改变,各组织脏器大体解剖观察均未见明显与给药相关的毒性病理学改变,注射局部组织未见明显与疫苗相关的刺激性反应;卫星组大鼠免疫前血清抗体均为阴性,末次免疫后2周,阴性对照组和细胞基质组抗体检测结果均为阴性,低剂量组和高剂量组抗体阳转率100%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶73.5和1∶111.4,仅有部分大鼠可检测到分泌IFNγ的T淋巴细胞。结论水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)经大鼠长期毒性试验未见明显毒性反应,初步证实该疫苗具有良好的安全性及有效性。     

应用CD_2~+细胞增长试验筛选和评价免疫制剂

建立 1种筛选和鉴定生物制品免疫活性的方法—— BSA免疫细胞化学法 CD+ 2 细胞增长试验。经预试 ,确定了胰酶的最适浓度和处理时间 ,业经处理的 PBMC温育的合适时间和药物的最适浓度 ,并对已知具有免疫增强或免疫抑制功能的若干种制剂作活性检测 ,表明本法具有操作简便、重复性好、易标准化的优点。     

一株分离自内蒙古传统酸马奶中的乳酸杆菌Lactobacillus casei.Zhang对小鼠免疫功能的影响

目的研究具有潜在益生特性的乳酸杆菌Lactobacillus casei.Zhang(LcZhang活)菌、灭活菌制剂对小鼠免疫功能的影响,为进一步研究其增强机体免疫活性的机理提供依据。方法采用动物活体试验方法,应用分离自酸马奶,并经过耐酸性实验、人工胃肠消化液中存活能力筛选的LcZhang,制备成热致死菌体和活菌制剂各分成高、中、低三个剂量组灌服小鼠15d,测定胸腺指数、脾脏指数;观察ConA促进脾淋巴细胞增殖作用、脾脏巨噬细胞吞噬中性红的能力。结果与对照组相比,实验各组的胸腺指数无明显变化。活菌制剂组脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力、脾巨噬细胞吞噬中性红的能力有所提高且差异显著(P<0.05);并且在本试验选取的3个剂量范围内基本呈量效关系。灭活菌制剂对以上指标的影响与对照相比无显著差异。结论LcZhang活菌制剂的免疫调节作用优于热致死菌体制剂。活菌制剂对小鼠的非特异性免疫功能及细胞免疫功能产生了多方面的、有利于机体免疫功能状态的调节作用。     

BCG-CpG-DNA一般毒性的初步评价

目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变化,14d后观察脏器是否发生病变;重复给药期间及末次给药后3周恢复期内,每周观察小鼠外观体征、局部刺激性和体重变化;末次给药后3d及3周检测血液学、血液生化学指标及主要脏器系数和抗双链DNA抗体水平。结果 BCG-CpG-DNA急性毒性试验中,各组小鼠均健康存活,体重增加,无毒性反应。BCG-CpG-DNA28d长期毒性试验中,动物体重、行为活动无异常,给药部位无局部刺激性表现;BCG-CpG-DNA重复给药可提高小鼠免疫细胞的数量;末次给药后3d,各试验组脾脏系数均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),经过3周恢复期回复正常;各试验组血清中抗双链DNA水平与对照组比较,差异无统计学意义,均低于25U/ml的临界值。结论 BCG-CpG-DNA主要影响小鼠的免疫细胞和免疫器官,未见其他明显的急性毒性和长期毒性作用,表明BCG-CpG-DNA具有较好的安全性。     

复方管花肉苁蓉片毒理安全性研究

通过大鼠急性经口毒性试验、三项遗传毒性试验(Ames试验、鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)及30天喂养试验对复方管花肉苁蓉片安全性进行评价。以26.40 g/kg·bw剂量给予大鼠灌胃后,无中毒现象,观察2周动物无死亡,试验结束后大体观察解剖动物未见明显异常。遗传毒性实验结果均为阴性。30天喂养试验中各剂量组大鼠的体重、摄食量、血液学及生化指标等较对照组差异无显著性(P0.05);组织病理学检查未见因样品产生的异常改变,在试验剂量范围内未见毒性副作用。因此,在本实验条件下复方管花肉苁蓉片具有较好安全性。     

农药液体制剂原液给药与经配制给药对大鼠急性经口毒性试验LD_(50)值的影响

[目的]探讨农药液体制剂原液直接给药与经配制后给药对大鼠急性经口毒性试验半数致死量(LD_(50))结果有无影响。[方法]按照霍恩氏法设计试验流程,采用原液法和配制法分别测定8种农药液体制剂大鼠急性经口毒性试验的LD_(50)值,比较2种不同试验方法所获得的试验结果与毒性分级。[结果]8个受试物采用原液法给药后的LD_(50)值结果均低于采用配制法给药的LD_(50)值结果且存在显著差异(P0.05),其中4个受试物的毒性分级出现跨级。[结论]农药液体制剂原液给药与经配制给药对大鼠急性经口毒性试验LD_(50)值结果有影响,甚至影响毒性分级。     

冻干b型流感嗜血杆菌荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物的制备及其质量评价

目的制备冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,并评价其质量。方法发酵培养白喉棒状杆菌C7 M1菌株表达CRM197蛋白,产物经DEAE SFF阴离子层析柱纯化,冻干后获得载体蛋白CRM197。Hib荚膜多糖水解后,采用氧化还原法与CRM197蛋白结合,制备结合物原液,冻干后制备3批成品。按《中国药典》三部(2015版)要求对成品进行各项生化指标检测及鉴别试验,并通过免疫新西兰幼兔,检测结合物的免疫原性。结果 3批冻干疫苗成品的各项生化指标及鉴别试验均符合相关规定,免疫后家兔血清中抗体滴度明显升高(P 0.01),且可通过加强免疫提高其免疫效果。结论成功制备了冻干Hib荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,且具有良好的免疫原性。     

真菌深部感染优质两性霉素B大有作为

美国密西西比大学药学院Cleary等通过体外试验评估了不同厂家脱氧胆氧胆酸两性霉素B制剂的毒性。结果显示，不同厂家生产的两性霉素B的毒性有显著差异，造成这种差异的主要原因可能是，不同制剂中多烯类物质或致热原性毒素的含量不同。由此可见，     

人活化素结合蛋白的分离及纯化

为了进一步研究人活化素结合蛋白的免疫生物学活性，从人卵泡液中提取了活化素结合蛋白，采用亲和层析及高效液相层析法，最终获得35KDa，SDS－PAGE显示为一条带的人活化素结合蛋白，经免疫活性测定、激活素结合试验以及FSH分泌抑制试验证实，所纯化的人活化素结合蛋白为具有生物学活性的天然活化素结合蛋白，可供进一步的免疫生物学研究用。     

Ⅰ型糖尿病模型大鼠在重复给药毒性试验中的应用

目的研究Ⅰ型糖尿病模型大鼠在精蛋白重组人胰岛素注射液重复给药毒性试验中的应用。方法使用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)对健康SD大鼠造模,55 mg/kg,计算6个月后的存活率。取模型大鼠,分高、中、低剂量(30、12、5 U/kg)组和对照组,每组20只,雌雄各半,高、中、低剂量组给予精蛋白重组人胰岛素注射液,对照组给予精蛋白重组人胰岛素注射液辅料空白液,均经大鼠皮下注射,1次/d,连续4周,进行重复给药毒性试验,给药4周后,经大鼠腹主动脉采血,检测血清胰岛素含量、C肽含量、糖化血红蛋白含量以及血液生化学和血液细胞学相关指标,并进行组织病理学观察。结果模型大鼠血糖均高于16.7 mmol/L,建模成功率为91.7%,6个月存活率为82%,确定建模成功。重复给药毒性试验高剂量组大鼠死亡4只。与其他剂量组相比,给药结束后和恢复期结束后高剂量组大鼠血清中糖化血红蛋白降低(P0.05);与对照组相比,给药结束后,胰岛素、C肽含量升高(P0.05),恢复期结束后,高、中剂量组胰岛素、C肽含量升高(P0.05);与对照组相比,给药结束后,高剂量组雄鼠和雌鼠血清中白蛋白、血小板升高(P0.05),淋巴细胞数降低(P0.05),而雌鼠红细胞、白细胞减少(P0.05),其余血液细胞学指标未见明显差异。恢复期结束后,各剂量组血液生化学和血液细胞学指标均无差异,建模成功大鼠主要脏器均出现病理变化,重复给药毒性试验中各组大鼠各主要脏器在给药结束后和恢复期结束后也分别出现不同程度的病理变化。结论用STZ造模的Ⅰ型糖尿病大鼠对于精蛋白重组人胰岛素产生的低血糖反应具有较好的耐受性,接近于临床患者的病理生理特征,在使用精蛋白重组人胰岛素进行重复给药毒性试验中具有实际应用价值。     

以白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素为载体的Y群脑膜炎球菌多糖结合物对小鼠的免疫原性

目的探讨以天然白喉毒素无毒变异体蛋白CRM197和破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为载体的Y群脑膜炎球菌多糖(group Y meningococcal polysaccharide,MenYPS)结合蛋白对小鼠的免疫原性。方法将MenYPS用1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)进行衍生,制备MenYps-ADH衍生物,将MenYPS-ADH衍生物在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,分别与CRM197和TT共价结合,制备3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物,采用琼脂双扩散法检测结合物中多糖抗原的血清型特异性。经BALB/c小鼠大腿内侧皮下注射制备的衍生物及结合物,2.5μg/只,0、14、28 d各免疫1次,分别于第7、21和35天经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清GMT。参考《中国生物制品规程》(2000版)进行无菌试验及异常毒性试验。结果制备的3批MenYPS-CRM197和MenYPS-TT结合物可与MenYPS诊断血清产生沉淀线。MenYPSTT和MenYPS-CRM197免疫小鼠3次后,均产生较高的滴度,MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2、3次免疫小鼠后产生的GMT均明显高于MenYPS-ADH衍生物,差异有统计学意义(P均0.05),而两种结合物GMT差异无统计学意义(P均0.05);MenYPS-TT和MenYPS-CRM197结合物第2次免疫后产生的GMT均明显高于第1次免疫后,第3次免疫后明显高于第2次免疫后,差异均有统计学意义(P均0.01)。无菌试验符合《中国生物制品规程》(2000版)相关要求;异常毒性试验中,豚鼠和小鼠观察7 d后,均无异常反应,体重增加,无死亡。结论 MenYPS与CRM197和TT的结合物均能诱导BALB/c小鼠产生较高的抗体水平,且产生了免疫记忆。     

15价肺炎球菌结合疫苗动物急性、长期毒性及免疫原性

目的 评价15价肺炎球菌结合疫苗（15-valent pneumococcal conjugate vaccine,PCV15）的动物急性、长期毒性及免疫原性。方法 将60只ICR小鼠随机分为磷酸铝佐剂对照组、0.9%NaCl对照组和2人份剂量PCV15组,每组20只,雌雄各半,进行急性毒性试验;将90只SD大鼠随机分为磷酸铝佐剂对照组、0.9%NaCl对照组和1人份剂量PCV15组,每组30只,雌雄各半,共免疫5次,间隔28 d,进行长期毒性试验;将45只NIH小鼠随机分为0.9%NaCl组、1/4人用剂量的市售13价肺炎球菌结合疫苗（PCV13）组和1/4人用剂量的PCV15组,每组15只,雌性,共免疫3次,间隔2周,进行免疫原性试验及免疫过程中安全性观察,全程监测并记录小鼠的体质量、体征及行为变化,并在每次免疫2周后经眼眶采血,间接ELISA检测血清中抗各型肺炎链球菌荚膜多糖抗体水平。结果 急性毒性试验表明,注射2人份剂量PCV15后,小鼠均未出现明显异常反应或死亡。长期毒性试验显示,1人份剂量的PCV15对大鼠临床症状、血液学和血清生化指标无明显影响,各器官未见明显病理学异常。...     

猪脑中提取胆甾醇的工艺研究

目的:研究从猪脑中提取胆甾醇的制备工艺。方法:采用正交试验法,以胆甾醇得率为指标对丙酮用量、提取时间、提取次数进行提取条件筛选,并采用化学反应法对产品进行定性鉴别。结果:优选工艺条件确定为提取3次,提取时间1 h,丙酮用量为5倍。定性鉴别显色稳定、特征明显。结论:本工艺条件温和、操作简便、重现性好,适合工业化生产。     

BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫毒性的初步评价

目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部皮下免疫7次,分别于初次免疫后14d、末次免疫后3d和3周,检测各组小鼠免疫器官脏器系数、淋巴细胞转化功能、细胞因子释放(ELISPOT法)、T细胞亚群变化(免疫荧光法)和NK细胞杀伤活性(乳酸脱氢酶法)。结果 BCG-CpG-DNA重复给药7次,主要影响小鼠初级免疫器官,表现为脾肿大,对胸腺、肝脏和肾脏无影响;对细胞免疫功能的影响是增强淋巴细胞转化功能;降低中、高剂量组CD3+T细胞亚群含量;提高体内分泌IFNγ和IL-4的细胞数二者的比例;增强NK细胞的杀伤能力。结论 BCG-CpG-DNA重复给药累计达3.5mg,小鼠表现为免疫功能增强,对免疫器官和免疫功能无不良影响,未见免疫毒性副作用。     

B族链球菌表面免疫原性蛋白的免疫原性及其抗体保护功能

目的制备B族链球菌(GBS)表面免疫原性蛋白(Sip),研究其免疫原性及抗体保护功能,为GBS蛋白疫苗研究奠定基础。方法采用基因重组技术构建表达载体,并表达GP-Sip融合蛋白。用pET-Sip融合蛋白免疫小鼠,并免疫家兔制备多克隆抗体。Western blot检测GP-Sip蛋白特异性,ELISA检测家兔及小鼠血清中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的功能。结果表达载体经酶切和测序证明构建正确,GP-Sip蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,纯化后纯度可达90%以上。Western blot显示GP-Sip蛋白可与pET-Sip蛋白的免疫血清发生免疫反应。ELISA显示Sip可诱发小鼠产生高水平的IgG抗体。Sip抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用。结论已成功构建GP-Sip表达载体,并高效表达了Sip。该蛋白具有良好的免疫原性,其抗体具有良好保护功能,可作为GBS蛋白疫苗成分或荚膜多糖疫苗载体成分。     

生物增效技术处理制革废水的试验

为提高制革废水生化系统的处理效率,减少制革废水污泥排放,通过向好氧系统和污泥消解池投加功能菌剂和营养剂的方式提高生化系统生物活性,提高污染物的去除率,减少污泥排放量.试验结果表明:每日在好氧池投加经现场活化的1#菌制剂20 mg/L、营养剂10 mg/L后,生化系统对CODCr和氨氮的去除有所提高,增效后生化系统的CODCr平均去除率为96.8％,氨氮平均去除率为97.6％,均高于对照组;每日向污泥消解池投加活化的2#菌制剂50 mg/L、营养剂25 mg/L后,试验组系统剩余污泥减量高达71.3％,污泥减量效果明显.为了解生物增效后好氧池菌群变化情况,对好氧池活性污泥进行高通量分析,分析结果表明,生物增效后生化系统菌种数量有所增加,部分有效功能菌的丰度明显提升.     

农药微囊剂及其制备技术研究进展

具有缓控释功能的微囊化技术在农药制剂的研究开发中广受关注,并得到越来越多的应用。农药微胶囊制剂具有控制农药有效成分释放,提高易光解农药的稳定性,降低农药对非靶标生物的毒性以及减少农药对环境的污染等良好特性。本文综述近年来农药微胶囊制剂产品、囊材以及微胶囊制备方法的研究进展。     

人用皮内注射布氏菌活疫苗毒理及药效学研究

目的研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性。方法对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测。结果小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的最大耐受量为1·0×109个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应。局部刺激试验,只有注射1·0×109个菌的部位会在48h后化脓,但在1~2周内可自愈。全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变。免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响。对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24~48h结果为阳性。皮内免疫小鼠14d后可测得小鼠体内有抗体产生,50d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14d与50d抗体检测均为阴性。结论毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的。