蛹虫草深层培养产纤溶酶条件的优化

蛹虫草是名贵中药材之一,本课题组发现其液体发酵物中含有较强的纤溶活性物质,具有开发成溶栓药物的潜力。以本实验室已优化的蛹虫草深层培养产纤溶酶的培养条件为基础,对蛹虫草深层培养产纤溶酶的条件进一步优化,并对其深层培养产纤溶酶过程从摇瓶条件到10L发酵罐进行比拟放大。实验结果表明:蛹虫草深层培养产纤溶酶的最适培养条件为蔗糖2%、豆饼5%,250mL三角瓶装液量为50mL,23℃培养5d,培养基初始pH为自然(6.0左右),接菌量为直径1cm菌片一片(每50mL)或深层培养3~5d的液体菌种0.5%(V/V);10L发酵罐在搅拌转速和通风量为100r/min,600L/h的条件下纤溶酶活力达286.21U/mL(尿激酶单位),较摇瓶条件下的酶活力提高了3.2倍,纤溶酶对菌丝生物量的得率较摇瓶条件下提高了5.5倍。      

蛹虫草纤溶酶研究进展

蛹虫草是我国一种传统的药食两用真菌,其中的纤溶酶是近些年来发现的一种新型的纤维蛋白溶解酶。本文就蛹虫草纤溶酶的产酶条件、分离纯化、酶学性质、生物活性以及在分子生物学等方面的研究进展进行综述,为期为以后的研究提供一定的参考及有益借鉴。      

蛹虫草固态发酵联产多糖和纤溶酶的工艺优化

以玉米粉作为主要原料,利用蛹虫草固态发酵同时生产多糖和纤溶酶.以多糖含量和纤溶酶活力为指标,通过单因素和正交试验优化了蛹虫草固态发酵培养基和培养条件.结果表明:培养基由玉米粉和麸皮构成,比例为18:2(g/g),料水比例1:1(m/V),接入6％(V/m)蛹虫草液体菌种,23℃发酵时间3 d.在优化条件下获得浸提液中的...     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

采用盐析和离子交换层析法制备蛹虫草纤溶酶粗酶样品,并对其酶学性质进行初步研究。结果显示：该酶最适pH 值和作用温度分别为8.0 和37℃; 在pH6～10.6 范围内较稳定,但对高温较为敏感;EDTA 对蛹虫草纤溶酶具有抑制作用,说明该酶是一种基质金属蛋白酶;金属离子Ca2+、Fe2+ 在低浓度(0.01mmol/L)时对此酶有促进作用,但高浓度时有抑制作用,而NH4+对酶活性影响不大。     

蛹虫草菌静息细胞培养方法及纤溶酶的诱导研究

以纤溶酶活力和生物量为评价指标,建立了蛹虫草菌静息细胞培养方法,并研究了酪蛋白肽对纤溶酶的诱导作用。 结果表明,静息细胞培养基中碳源和氮源确定为葡萄糖0.08%和尿素0.06%;培养条件为培养基初始pH 7.0,接种量10%,摇床转速180 r/min, 23 ℃培养12 h。 在此条件下,纤溶酶在血纤维蛋白平板上形成的溶圈面积为34.97 mm2,蛹虫草菌生物量为2.38 g/L。 酪蛋白肽组分C2 是合成纤溶酶的直接诱导物,当其添加量为0.1 g/L时,纤溶酶活力较对照提高了264%。     

蛹虫草产纤溶酶活性菌株的筛选及产酶条件的研究

蛹虫草是著名的药用真菌,具有扩张气管、镇静、抗心律失常、降血压、抗病原微生物、抗恶性肿瘤等多种药理活性。本研究采用蛋白纤维平板法筛选出具有溶纤活性的蛹虫草菌株,通过综合分析,选择产纤溶酶比活性最高的菌株,并对该菌株的产酶条件进行了优化。研究结果显示:菌株产酶最佳营养条件的组分为2%葡萄糖,2%蛋白胨,碳氮比为1/1;最佳环境条件为温度25℃,pH为6,装液量60 mL,发酵周期9 d,接种量2%,转速150 r/min。在此条件下,发酵液纤溶酶活力可达到111.85 U/mL。     

发酵蛹虫草菌丝体胞外几丁质酶活性研究

胞外几丁质酶等多种水解酶系在虫草侵染宿主的过程中发挥着重要的作用,增强酶活对于提高虫草子实体人工培养的成功率有着重要的意义。文中研究考查了多种碳、氮源、初始培养基pH值和培养时间对于液态培养的蛹虫草菌丝体胞外几丁质酶活性的影响。结果表明,几丁质酶的活性主要取决于碳源,几丁质对几丁质酶的诱导合成十分重要,其中以1%胶状几丁质最佳。当培养基中不存在几丁质、细胞优先利用其它营养物质或存在酶解产物阻遏时,酶的合成就会被抑制。最终确定的优化培养基以2%胶状几丁质为碳源,0.1%酵母膏为氮源,初始培养基pH值6.0;培养时间5d,此时胞外几丁质酶的活性为12.0mU/mL以上。     

不同种类氨基酸对蛹虫草菌丝体生长和虫草素含量的影响

在蛹虫草液体摇瓶培养过程中分别添加20种不同的氨基酸,添加量为0.2g/100mL,以研究其对蛹虫草菌丝体生长和虫草素含量的影响。结果表明:在20种氨基酸中,16种氨基酸能显著促进蛹虫草菌丝体的生长。其中列前5位的依次为3种碱性氨基酸:精氨酸、赖氨酸和组氨酸,两种酸性氨基酸:谷氨酸和天冬氨酸。这5种氨基酸分别使菌丝体生长量增加了1.10、0.82、0.63、0.48、0.40倍。且每一种氨基酸添加后都能使菌丝体中虫草素含量显著增加。其中两种碱性氨基酸中的精氨酸和组氨酸添加后菌丝体中的虫草素含量分别增加了1.91和1.90倍,极性氨基酸中的苏氨酸和天冬酰胺添加后虫草素含量分别增加了1.43和1.42倍,非极性氨基酸中的丙氨酸添加后虫草素含量增加了1.05倍。     

蛹虫草的稳定碳同位素和脂肪酸研究

本文旨在对冬虫夏草替代品的脂肪酸组成和稳定碳同位素比值及其变异规律开展研究。采用元素分析-同位素比值质谱仪(EA-IRMS)先对8种冬虫夏草替代品(包括6种蛹虫草和2种虫草菌丝体)和1个冬虫夏草子座样品的稳定碳同位素比值进行测定,再采用化学方法将其中性油脂和极性油脂进行高效分离,并采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对中性油脂和极性油脂的脂肪酸组成进行测定;最后将检测结果与作者之前报道的冬虫夏草数据进行对比分析。对比研究表明,不同冬虫夏草替代品在稳定碳同位素比值、粗脂肪含量和脂肪酸组成上存在明显差异;冬虫夏草替代品的粗脂肪和不饱和脂肪酸含量低于冬虫夏草,显现出冬虫夏草的不可替代性;稳定碳同位素比值和脂肪酸组成是冬虫夏草替代品掺杂判识的两类重要标志。     

不同谷物培养基质对蛹虫草有效成分的影响

以蛹虫草菌种为材料,高粱、糜子、油莎豆3 种谷物为培养基质,测定谷物蛹虫草菌丝共生体和蛹虫草子实体的主要活性成分,研究不同培养基质对蛹虫草有效成分含量的影响。结果表明,油莎豆培养的蛹虫草菌丝共生体产纤溶酶酶活最高,为312.26 U/g;油莎豆培养的蛹虫草子实体产虫草素含量最高,为7.34 mg/g。高粱培养的蛹虫草子实体麦角甾醇含量最高,为6.10 mg/g;糜子蛹虫草菌丝共生体粗多糖含量最高,为72.5 mg/g。高粱适合作为培养高产麦角甾醇的蛹虫草子实体的培养基质,糜子适合作为培养高产粗多糖的菌丝共生体的培养基质,油莎豆适合作为培养高产虫草素的蛹虫草子实体和高产纤溶酶的菌丝共生体的培养基质。     

蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

蛹虫草静置发酵产虫草素的优化

对蛹虫草14014产虫草素的静置发酵培养基和发酵条件进行了优化,旨在探寻大规模制备虫草素的工艺方法。为了提高数理统计的精度,缩短发酵周期,通过单因素实验,获得了种龄为3d,接种量为10%的液体培养物最佳接种方式。通过Placket-Burman设计从7个因素中筛选出了有显著影响的温度、酵母膏和蛋白胨三个因素。通过最陡爬坡实验、中心复合实验设计及响应面分析确定主要影响因素的最佳值及回归模型,并经实验验证模型的可行性。最佳培养基组成和培养条件为:葡萄糖60g/L,KH2PO40.7g/L,MgSO4·7H2O 0.7g/L,酵母膏9.00g/L,蛋白胨17.10g/L,初始pH6.30,温度27.1℃。在优化条件下,虫草素产量达到6.50g/L,含量比优化前提高2倍。      

Radical scavenging activities of Asterina pectinifera fermented with Cordyceps militaris mycelia

The degradation behavior of L-ascorbic acid (ASA) was investigated under different parameters of temperature, time, and pH. Higher temperatures and longer times accelerated the ASA degradation. Degradation product distributions changed with different pH values. As solution pH of 4.5 was beneficial for formation of uncolored intermediate products with an absorbance maximum at 294 nm. Formation of brown products was promoted at pH values from 5.8 to 6.8 with an absorbance maximum at 420 nm. Under different pH conditions, volatile products formation varied. Furfural and derivatives of furan were primary products due to the effects of pH. The non-enzymatic selfdegradation behavior of ASA was characteristic of first-order kinetics based on a classic dynamic model. Activation energy values varied under different pH values. An ASA degradation mechanism and pathway are proposed.     

Non-volatile taste components of Agaricus blazei,Antrodia camphorata and Cordyceps militaris mycelia

Three non-Ganoderma medicinal mushrooms are currently popular in Taiwan, including Brazilian mushroom (Agaricus blazei), chang-chih (Antrodia camphorata) and northern caterpillar fungus (Cordyceps militaris). The moisture contents of three dry mycelia ranged widely from 6.65 to 14.91%. All mycelia were high in carbohydrate content with chang-chih being the highest. The protein contents ranged from 9.49 to 29.1%. Soluble sugars found were arabitol, glucose and trehalose, and the contents exceeded 10%. Total free amino acid contents ranged from 7.01 to 11.1 mg g⁻¹ dry weight. Contents of monosodium glutamate-like components were relatively low and similar in Brazilian mushroom and chang-chih, but high in northern Cordyceps. Contents of bitter components were significantly high in Brazilian mushroom and northern Cordyceps. Contents of flavour 5′-nucleotides were similarly high in chang-chih and northern Cordyceps, and low in Brazilian mushroom. The three mushroom mycelia had different proximate compositions. However, northern Cordyceps and chang-chih might exhibit similar umami and sweet tastes.     

北虫草液态发酵天然培养基的优化研究

对北虫草液态发酵天然培养基进行优化研究,经比较确定适宜液态发酵的北虫草菌株及最佳氮源,之后采用混料设计对发芽糙米浆、麦芽汁和豆粕汁三种原料的组成配比进行优化,确定适宜北虫草液态发酵的最佳培养基。研究表明:北虫草CM-3菌株适宜液态发酵,且该菌在以豆粕为氮源时生长最好;发芽糙米浆、麦芽汁和豆粕汁(可溶性固形物含量分别为6%)混料比为55:5:40时,CM-3的菌丝干重达最高(17.0g/L)。     

固体发酵生产豆豉纤溶酶的研究

对细菌型豆豉的生产工艺作了深入研究。分析了影响豆豉纤溶酶产量的诸多因素，包括大豆浸泡水量、时间、大豆破碎程度、碳源、离子强度、蒸煮时间等。并对豆豉提取物的功能性进行了研究，如溶栓作用、抗氧化作用、抑菌作用等。     

响应面法优化蛹虫草酸奶发酵工艺

目的以蔗糖添加量、蛹虫草浓缩液添加量和稳定剂添加量为影响因子优化蛹虫草酸奶制备工艺。方法以酸奶的组织状态、乳清析出状况、口感及风味等为评价指标,采用单因素试验研究蔗糖添加量、蛹虫草浓缩液添加量及稳定剂添加量等对酸奶感官品质的影响,通过响应曲面法优化确定酸奶的最佳工艺参数。结果蛹虫草酸奶最佳制备工艺为蔗糖添加量8.11%、蛹虫草浓缩液添加量2.04%、稳定剂添加量0.69%,感官评分为94.79。结论蛹虫草酸奶具有较好的感官特性,丰富了现有的酸奶口味。