不同品种马铃薯多酚氧化酶酶学特性对比

以大西洋、费乌瑞它、红宝石和黑美人4个马铃薯品种为原料,提取可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,对比不同品种马铃薯sPPO和mPPO的酶学特性。结果表明,黑美人和红宝石的sPPO和mPPO粗酶液浓度均高于大西洋和费乌瑞它,黑美人和红宝石sPPO和mPPO的最适pH为6.0,略低于大西洋和费乌瑞它;大西洋sPPO的最适反应温度为35 ℃,其他3个品种马铃薯sPPO的最适反应温度均为30 ℃,大西洋和费乌瑞它mPPO的最适反应温度为30 ℃,黑美人和红宝石mPPO的最适反应温度为25 ℃;4个品种马铃薯sPPO和mPPO在邻苯二酚反应体系中最适底物浓度均为50 mmol/L;黑美人sPPO和mPPO的V_(max)/K_m比值分别为93.0和38.7,高于其他3个品种,黑美人sPPO和mPPO的酶促反应速度最快,大西洋的酶促反应速度最慢。不同品种马铃薯sPPO和mPPO酶学性质存在差异,对马铃薯制品加工的品种选择及加工过程中的酶促褐变控制技术具有指导意义。     

可溶态和膜结合态双孢蘑菇多酚氧化酶的分离纯化及酶特性分析

为开发一种双孢蘑菇两种不同形态多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）的提取纯化方法，通过温度诱导相分配、分步硫酸铵沉淀盐析、DEAE阴离子交换层析，对双孢蘑菇中的可溶态PPO(soluble PPO,sPPO)和膜结合态PPO(membrane-bound PPO,mPPO)进行分离纯化，并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和Native-聚丙烯酰氨凝胶电泳及米氏方程对纯化后两种形态PPO的纯度、分子质量及酶促反应动力学进行探究。双孢蘑菇sPPO和mPPO经纯化后对邻苯二酚的比活力分别达到6 912.88 U/mg和19 092.94 U/mg，相比于粗酶液，酶的比活力分别提高到12.20倍和10.86倍，且纯化后mPPO的比活力显著高于sPPO。酶促反应动力学结果显示，sPPO和mPPO对不同底物的催化活性差异较大，对底物邻苯二酚的催化活性较高，且mPPO比sPPO对底物邻苯二酚的亲和力更强，酶促反应速度更高。sPPO和mPPO对邻苯二酚的最适反应温度均为30℃，最适pH值均为6.8。本研究为双孢蘑菇两种状态PPO的质谱鉴定、酶学特性以及抑制酶促褐变的发生等研...     

可溶态和膜结合态马铃薯多酚氧化酶的性质对比

以大西洋马铃薯为原料,制备可溶态(s PPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,并对两种粗酶液的酶学性质进行研究。结果表明,s PPO最适反应温度为35℃,最适p H值为7,mPPO最适反应温度为30℃,最适pH值为7。以焦性没食子酸、邻苯二酚为底物时,sPPO的米氏常数(K_m)分别为10.04 mmol/L和24.00 mmol/L,最大反应速度(V_(max))值分别为443 U/(mL·min)和965U/(m L·min),mPPO的米氏常数(K_m)分别为4.98 mmol/L和48.04 mmol/L,最大反应速度(V_(max))值分别为299 U/(mL·min)和912U/(m L·min),且对焦性没食子酸的催化效果优于邻苯二酚。6种抑制剂对比发现,Na_2SO_3对sPPO活性的抑制效果最好,Vc对mPPO活性的抑制效果最好。sPPO和mPPO的酶学特性有一定的差异,对马铃薯制品加工过程中酶促褐变的控制具有指导意义。     

响应面优化可溶态和膜结合态马铃薯多酚氧化酶提取工艺

以大西洋马铃薯为原料,分别用柠檬酸-磷酸盐缓冲液浸提和超声波辅助Tris-HCl缓冲液浸提法提取马铃薯中可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,以酶比活力为评价指标,在单因素实验基础上,通过响应面对sPPO和mPPO的提取工艺进行优化。结果显示:sPPO最优提取工艺为料液比1:3.2、浸提时间12 h、缓冲液pH7.1,在该条件下测定sPPO比活力平均值为(130.5±2.4) U/mg,三个因素对sPPO提取的影响大小依次为:浸提时间>料液比>缓冲液pH。mPPO最优提取工艺为料液比1:5.2、浸提时间7 h、缓冲液pH6.7,在该条件下测定mPPO比活力平均值为(686.4±7.9) U/mg,三个因素对mPPO提取的影响大小依次为:超声时间>料液比>缓冲液pH。所得响应面模型可以很好地预测和分析sPPO和mPPO提取工艺条件。     

西葫芦多酚氧化酶酶学特性研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对西葫芦多酚氧化酶(PPO)的酶学特性及不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行研究。结果表明,西葫芦多酚氧化酶最适pH为6.6,最适温度为35℃,90℃处理5min可使该酶失活。多酚氧化酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数为Km=0.0417mol/L,Vmax=208.33U。四种抑制剂对PPO的抑制效果由强到弱依次为:亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>抗坏血酸>柠檬酸。     

右旋糖酐酶酶学特性及热失活动力学研究

以右旋糖酐为底物,采用DNS法测定右旋糖酐酶酶活,揭示其酶学特性及热失活动力学性质。考察了温度、pH、离子强度、常见食品添加剂对右旋糖酐酶活性的影响,并建立右旋糖酐酶酶促反应动力学及热失活动力学参数。结果表明,最适温度、pH和离子强度分别为60/65℃,5.5,0.015 mol/L;pH 5.5～9.5或乙醇添加量0%～30%的环境常温保存30 min,酶活性保持相对稳定;酶促反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,其K_m和V_(max)分别为0.01321 mol/L、0.5153μmol/(min·U);右旋糖酐酶的热失活遵循一级反应动力学规律,在60℃、含蔗糖0,200 g/L的环境下热失活速率常数分别为0.1268,0.1105 min~(-1)。2 mmol/L亚硫酸钠对右旋糖酐酶活性具有抑制作用(P0.05)。该试验为制糖行业和其他行业应用该酶提供了较详细的数据支持。     

苹果多酚氧化酶的提取及其抑制作用的研究

以冷冻丙酮制备苹果多酚氧化酶(PPO), 通过以邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,对苹果果肉中多酚氧化酶的pH值、温度、热稳定性及抗氧化剂抑制作用进行了研究.结果表明:用真空冷冻干燥得到的酶粉能更好的保持多酚氧化酶活性;酶氧化邻苯二酚的最适pH为6.0,最适温度为25℃;PPO在20-25℃时对热较稳定,期后随着温度升高后,酶活迅速降低;在100℃维持1min酶全部失活;抗坏血酸和黄酮类物质能明显地抑制酶促褐变.     

龙眼果肉中多酚氧化酶和过氧化物酶性质研究

测定了10个不同品种龙眼果肉中的多酚氧化酶活性.结果表明:华路广眼的多酚氧化酶活力最强,为25440U/(g·min),而罗伞木最弱,为9120U/(g·min).以石硖为试材,对其多酚氧化酶的性质进行研究时发现:龙眼多酚氧化酶酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数Km=0.64mol/L,Vmax=0.12U/min;且底物过量时,多酚氧化酶活性随其加入量的增大而迅速增大,但底物逐渐饱和时其活性增加减缓直至饱和值.在灭酶条件研究中发现:多酚氧化酶粗酶液在100℃水浴中处理1min即完全失活;而果浆中的多酚氧化酶在100℃水浴中处理5min才能完全失活.实验还测得石硖中过氧化物酶活力为4440 U/(g·min),且其果浆中过氧化物酶在100℃水浴中处理7min完全失活.     

荠菜过氧化物酶热失活动力学的研究

目的 研究热烫处理引起荠菜过氧化酶(POD)失活的速率常数和动力学规律。方法 对荠菜在80～100℃的热水处理一定时间条件,对荠菜过氧化酶的残余活性进行测定,并用一级动力学模型对过氧化物酶失活动力学进行拟合,分析失活速率常数。结果 热烫处理钝化新鲜荠菜POD活性效果明显,在80～100℃处理范围内,随着处理温度的上升,荠菜POD 失活速率常数k 值从0.01702增加到0.14260,反应活化能为114 kJ/mol。一级动力学模型拟合决定系数R²＞0.99。结论 荠菜POD 的热失活动力学符合一级动力学模型。     

砀山酥梨多酚氧化酶酶学特性及抑制效应的研究

多酚氧化酶是酶促褐变的关键酶,其特性与对其抑制效应研究一直是果蔬酶促褐变生理生化研究的重要内容,本试验以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对砀山梨多酚氧化酶的酶学特性及不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行了研究。结果表明：砀山梨PPO的最适pH为4.5,最适温度为34℃;短时间高温能显著抑制PPO活性;PPO催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,该酶促反应的最大速率为178.57U/min,酶反应速度为最大反应速度1/2时的底物浓度为0.125mol/L;柠檬酸、L-半胱氨酸、抗坏血酸,亚硫酸氢钠较柠檬酸能较好地抑制PPO活性,随着浓度的升高,抑制效应逐渐增强,但综合研究表明L-半胱氨酸抑制效应较好。     

Comparison of biochemical properties and thermal inactivation of membrane‐bound polyphenol oxidase from three apple cultivars (Malus domestica Borkh)

A comparative study of the properties of membrane‐bound polyphenol oxidase (mPPO) from three apple cultivars, namely Red Fuji (FJ), Granny Smith (GS) and Golden Delicious (GD), was carried out for the first time. Data indicate that mPPOs from three cultivars exhibit significantly different properties. GS mPPO had the strongest affinity to catechol, but FJ mPPO had the highest maximum velocity. Red Fuji (FJ) mPPO had the significantly higher activity than those of GD and GS mPPOs. Red Fuji (FJ) mPPO had the highest activity at pH 8.00, while GD and GS mPPOs at 4.50 and 7.50–8.00, respectively. Red Fuji (FJ) mPPO was more stable than GD and GS mPPOs over the pH range of 5.0–8.5. The optimal temperature for GS mPPO was within 70–75 °C, which is higher than those for mPPOs from FJ and GD. Thermal inactivation of the three mPPOs followed a first‐order kinetic model with different inactivation kinetic parameters.     

库尔勒梨多酚氧化酶的酶学特性

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对库尔勒梨多酚氧化酶(PPO)的酶学特性进行研究。结果表明：库尔勒梨PPO 的最适pH 值为5.7,最适温度为42℃;短时间高温能显著抑制PPO 酶活力;PPO 催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,该酶促反应的最大速率为169.49U/min,Km 值为0.152mol/L;与柠檬酸、NaCl 和EDTA-2Na相比,抗坏血酸对库尔勒梨PPO 的抑制效果较好。     

双孢菇中多酚氧化酶活性的影响因素

以双孢菇为供试原料提取多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO),以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在420nm研究温度、pH值、底物浓度和加热时间对该酶活性的影响;同时探讨抗坏血酸、柠檬酸、氯化钠、EDTA-Na 四种抑制剂对双孢菇酶促褐变的抑制效果。结果表明：该酶的最适温度30℃、最适pH5.5、最适底物浓度0.05mol/L,90℃加热处理80s时,该酶几乎全部失活。4种抑制剂对该酶均表现出一定的抑制效果,其中抗坏血酸的抑制效果最好,抑制效果强弱次序为抗坏血酸＞柠檬酸＞氯化钠＞EDTA-Na。     

Biochemical studies of cocoa bean polyphenol oxidase

Polyphenol oxidase (EC 1.14.18.1) was isolated and partially purified from cocoa beans. The properties of the enzyme were studied. The Michaelis constant K_m for catechol was 1 × 10^?2 M . The pH optimum of polyphenol oxidase activity assayed with catechol as substrate occurred at pH 6.8 and was characterised by a relatively high thermal stability, 50% of its activity was lost after heating for 40, 25 and 5 min at 60, 69 and 80°C respectively. The optimum temperature for the enzyme activity with catechol as substrate was around 45°C. The enzyme was reactive towards 3-(3,4-dihydroxy phenyl)-DL -alanine, 3-hydroxytyramine hydrochloride and 4-methyl catechol but showed no activity towards tyrosine, p-cresol, and 4-hydroxy-phenol. A rapid deactivation of the enzyme was observed when catechol of concentration > 40 mM was used as substrate. The enzyme activity was inhibited by ascorbic acid, L -cysteine, sodium bisulphite and thiourea.     

雪梨多酚氧化酶酶学特性及其果汁褐变控制技术研究

雪梨在加工过程中极易发生酶褐变,为抑制雪梨汁的酶褐变,试验以雪梨为原料制备多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)粗酶提取液,加入邻苯二酚为底物,采用分光光度法对其PPO的酶学特性及不同护色剂对PPO活性的影响进行了研究;并选择L-半胱氨酸、D-异抗坏血酸钠、抗坏血酸3种添加剂对雪梨汁进行护色,通过响应面优化试验确定雪梨汁最优护色组合。结果表明:雪梨PPO的最适pH为4.5,最适温度为30 ℃;雪梨PPO具有一定的热稳定性,随着温度的提高,抑制PPO活性所需要的时间逐渐减少;雪梨PPO催化底物邻苯二酚的酶促反应动力学与米氏方程高度符合,最大反应速率Vmax=217.39 U/min,米氏常数Km=0.152 mol/L。雪梨汁加工的最优护色剂组合为:6.56 mmol/L的L-半胱氨酸、4.58 mmol/L的D-异抗坏血酸钠和6.18 mmol/L的抗坏血酸,在此条件下对雪梨汁褐变的抑制率可达90.82%。     

The Inactivation Kinetics of Soluble and Membrane-Bound Polyphenol Oxidase in Pear during Thermal and High-Pressure Processing

Polyphenol oxidase (PPO) from pear was characterized with catechol as substrate. The Michaelis constant of soluble and membrane-bound PPO were 15.6 and 23.8 mM, respectively, and their optimum pH for activity were 6.0 and 6.5, respectively. The inactivation kinetics of soluble and membrane-bound PPO during thermal (45–75 °C) and high-pressure thermal processing (600 MPa, 40–80 °C) were studied. The inactivation kinetics of pear PPO were described by a first-order model at all processing conditions. Compared to soluble PPO, membrane-bound PPO was more sensitive to thermal and high-pressure inactivation. Both soluble and membrane-bound PPO displayed higher sensitivity towards thermal inactivation at pH 3.5 (pH of pear puree made from pears dipped in citric acid prior to blending) compared to pH 4.4 (pH of non-acidified pear puree). High pressure and temperature had synergistic inactivation effects on pear PPO at pH 4.4 while slight antagonistic effects were observed at pH 3.5.     

一株产高活性多酚氧化酶菌株筛选鉴定及其酶学性质

采用变色圈法从土壤样品中分离筛选产多酚氧化酶的菌株,对其进行形态学观察、分子生物学鉴定,并对其所产多酚氧化酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选得到1株产多酚氧化酶活性较高的菌株,命名为ZL-2,其被鉴定为竹黄菌属（Shiraia sp.）。菌株ZL-2发酵8 d产多酚氧化酶酶活最高,达到521 U/mL。菌株ZL-2产多酚氧化酶最适底物为邻苯二酚,其最适pH值为6、最适温度为30 ℃;酶活在温度20～40 ℃及pH 3～6范围内稳定。金属离子Cu2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+对多酚氧化酶都有激活作用,其中Cu2+激活作用最强;Ca2+、Al3+对酶活有一定抑制作用;L-抗坏血酸和亚硫酸氢钠对该酶抑制作用较强。     

宣木瓜多酚氧化酶酶学特性与抑制剂研究

研究宣木瓜不同部位的多酚氧化酶(PPO)的活性及其温度、pH值、底物专一性等特性和抑制方法。结果表明：果心中的PPO活性明显高于果皮和果肉,宣木瓜组织的褐变主要是由多酚氧化酶引起;PPO最适底物为邻苯二酚;最适温度20℃,在80℃处理5min即可钝化PPO的活性;最适pH5.5,在酸性条件下稳定性优于碱性;抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸氢钠、柠檬酸和氯化钠均能有效的抑制PPO的活性。     

香蕉酶促褐变的研究

本文以邻苯二酚为底物采用分光光度计测定氧化产物的方法对香蕉果肉多酚氧化酶(PPO)的催化特性、最适温度、最适pH值、热稳定性等性质进行了研究。结果表明,香蕉PPO的最适温度为25℃,最适pH为5.0,75℃水浴处理5min酶基本完全失活,100℃水浴处理20s可钝化PPO的活性,并且香蕉PPO具有同功酶。