琯溪蜜柚柚皮苷纯化鉴定及其对胰脂肪酶的抑制作用

为了探索琯溪蜜柚黄酮作为胰脂肪酶抑制剂的应用价值,本实验采用Sephadex LH-20葡聚糖柱层析、高效液相色谱-质谱联用、傅里叶变换红外光谱对琯溪蜜柚柚皮黄酮进行分离纯化及结构鉴定,并通过酶反应动力学和分子对接技术研究其对胰脂肪酶的抑制类型和分子间相互作用。高效液相色谱-质谱联用和傅里叶变换红外光谱分析结果表明,纯化后的琯溪蜜柚柚皮主要黄酮成分为柚皮苷;纯化鉴定的柚皮苷对胰脂肪酶半抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）为0.99 μg/mL,抑制类型为可逆非竞争型,抑制常数Ki＝0.58 μg/mL;该黄酮与胰脂肪酶的结合自由能为－30.14 kJ/mol,相互间的分子作用力包括范德华力、疏水相互作用、氢键、π键等,结合区域位于酶催化活性中心之外的位点。本研究表明琯溪蜜柚的主要黄酮成分柚皮苷对胰脂肪酶具有强烈的抑制作用,为利用琯溪蜜柚黄酮开发高效安全的胰脂肪酶抑制剂提供了理论依据。     

枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用

采用酶动力学法探讨枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用。采用紫外、荧光和红外光谱研究枸杞叶黄酮与胰脂肪酶相互作用的机理。结果表明:枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性有抑制作用,半抑制浓度(IC50)为(0.910±0.008) mg/mL,抑制类型为可逆非竞争抑制,抑制常数为6.04 mg/mL。紫外和荧光光谱显示:枸杞叶黄酮能使胰脂肪酶芳香氨基酸暴露,微环境和酶构象改变,内源荧光猝灭,猝灭类型为动态猝灭为主的混合型猝灭。热力学参数显示:枸杞叶黄酮与胰脂肪酶的相互作用力主要为疏水相互作用。红外光谱显示:枸杞叶黄酮对酶蛋白二级结构的影响,主要表现为复合物结构变得有序化,β-折叠向α-螺旋的转化。枸杞叶黄酮通过改变胰脂肪酶结构和微环境,进而抑制胰脂肪酶活性。     

柚皮素对胰脂肪酶抑制作用的研究

抑制胰脂肪酶的活性能够有效地减少肥胖的发生。该研究从酶学动力学、荧光猝灭和分子对接的不同角度研究柚皮素对胰脂肪酶的抑制作用。抑制酶活性试验结果表明,柚皮素以可逆竞争性方式抑制胰脂肪酶的活性,且半数抑制浓度为2.413 mmol/L。荧光猝灭试验结果显示,柚皮素与胰脂肪酶结合后酶的荧光被猝灭,胰脂肪酶的构象发生变化。分子对接结果显示,柚皮素与胰脂肪酶形成了酶-抑制剂复合物,阻止了酶和底物的结合,从而导致酶催化活性降低。     

鞣花酸抑制酪氨酸酶的动力学、荧光光谱分析及分子对接

以蘑菇酪氨酸酶为靶点,采用抑制动力学、荧光光谱分析结合分子对接模拟技术,系统研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对酪氨酸酶的抑制作用及机理。体外研究与动力学结果表明,EA以可逆的混合型抑制方式显著抑制酪氨酸酶活性(IC₅₀=0.05 mg/mL),其结合常数K_IIS,表明EA与游离酶的结合比与酶-底物复合物的结合更紧密。荧光光谱猝灭分析表明,EA与酪氨酸酶存在静态猝灭作用,两者通过自发的吸热过程结合生成复合物,主要作用力为疏水作用力,只有1个或1类结合位点。同步和三维荧光光谱分析表明,EA使酪氨酸酶的微环境极性增大,疏水能力减弱,酪氨酸酶的Trp残基更靠近结合位点。分子对接模拟分析进一步印证上述实验结果,形象地表明EA对酪氨酸酶为混合型抑制,EA主要通过疏水作用力和氢键与游离酶或酶-底物复合物进行结合,最终导致酶活性降低。本研究对EA在食品工业中作为保鲜剂的各种应用具有一定参考意义。     

金丝桃苷对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及分子机理

膳食黄酮具有很高的抑制黄嘌呤氧化酶（XOD）的潜力,本文通过酶抑制动力学、多光谱法和分子对接研究金丝桃苷对XOD的抑制特性并分析其分子机制。酶动力学结果表明,金丝桃苷对XOD具有混合竞争性的可逆抑制作用,IC₅₀值为(162.059±2.291) μmol/L,抑制常数Ki为(18.079±0.154) μmol/L。多光谱实验表明,金丝桃苷与XOD具有较高的亲和力,其相互作用主要受氢键和范德华力驱动。圆二色谱表明,金丝桃苷诱导XOD的构象变化,α-螺旋和无规则卷曲含量增加,β-折叠和β-转角含量减少。分子对接结果证实,金丝桃苷与XOD活性区域内的氨基酸残基（如:GLN767,GLY797和PHE798等）产生相互作用。这些结果将为金丝桃苷在开发具有潜力的功能性食品或药品方面提供实验和理论基础。     

香水莲花提取物对胰脂肪酶活性的抑制作用

采用96微孔板法测定香水莲花整花、雄蕊、花瓣、花托醇提物以及雄蕊不同极性部位提取物对胰脂肪酶的抑制活性;通过酶反应动力学方法确定雄蕊乙酸乙酯提取物对胰脂肪酶的抑制类型,并考察其在人工模拟消化肠液中对胰脂肪酶抑制效果的影响。结果表明,香水莲花各部位的醇提物对胰脂肪酶都具有一定的抑制作用,雄蕊醇提物的抑制作用最强。雄蕊不同极性部位提取物对胰脂肪酶的抑制活性由强到弱依次是乙酸乙酯提取物(半数抑制浓度IC_(50)=5.64mg/mL)二氯甲烷提取物(IC_(50)=8.75 mg/mL)正己烷提取物(IC_(50)=11.80 mg/mL)正丁醇提取物(IC_(50)=22.47 mg/mL)。乙酸乙酯提取物对胰脂肪酶的作用类型为非竞争性抑制;经体外模拟消化后,对胰脂肪酶仍有较强的抑制效果,而且抑制率随浓度的升高而增大。因此,香水莲花提取物是一种具有胰脂肪酶抑制活性的优良植物源原料,可用于降脂功能性产品的开发。     

藜麦蛋白肽的酶解制备及体外降血脂与降尿酸活性研究

为研究藜麦蛋白降血脂肽的最佳酶解工艺条件和降尿酸活性,本研究以藜麦为原料提取蛋白,采用胰脂肪酶抑制率为活性指标,通过单因素实验和响应面分析法优化降血脂肽的制备工艺,并对藜麦蛋白肽的胰脂肪酶抑制活性、牛磺胆酸钠结合活性、胆固醇酯酶抑制活性、黄嘌呤氧化酶抑制活性和氨基酸组成进行分析表征。结果表明,藜麦降血脂肽的最优酶解条件为pH1.6、酶解温度42.9℃、底物浓度3.03%、酶解时间1 h和酶底比0.2%,所得酶解液的胰脂肪酶抑制率理论值为90.43%,实际值为90.93%±0.10%。该条件下制备的最优酶解物表现出优异的体外降血脂效果,其胰脂肪酶抑制率和胆固醇酯酶抑制率的IC₅₀分别为7.49μg/mL和4.73 mg/mL,牛磺胆酸钠结合率的EC₅₀为0.53 mg/mL。此外,最优酶解物显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制效果(IC₅₀=5.97 mg/mL),表明其具有体外降尿酸的作用。氨基酸分析表明,藜麦蛋白肽的必需氨基酸含量丰富(34.23%),并且疏水性氨基酸和酸性氨基酸百分含量分别为34.11%和31.66%。藜麦蛋...     

地参结合酚提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的抑制作用

目的:探讨地参结合酚提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶活性的抑制作用。方法:采用X-5大孔树脂纯化地参结合酚提取物,并用Folin-酚法测定地参结合酚提取物酚含量;同时,采用HPLC对地参结合酚提取物的组成进行分析;以抑制率为考察指标,测定地参结合酚提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶活性的抑制作用。结果:地参结合酚提取物酚含量为155.55~164.95 μg GAE/mg,主要的酚类化合物单体为咖啡酸(40.67~72.18 μg/mg EDW)和迷迭香酸(22.01~46.22 μg/mg EDW);抑制α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的IC₅₀值范围分别为2.0275~3.7538和1.4438~3.1030 mg/mL。结论:地参结合酚提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制剂具有显著的抑制作用,可作为α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制剂。     

槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用与分子机理

本文以L-多巴为底物,采用酶抑制动力学法研究了槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用大小及类型,并采用荧光光谱技术分析其与酪氨酸酶的猝灭作用类型、结合位点、作用力类型。在此基础上,进一步利用柔性分子对接技术分析槲皮素对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,槲皮素对酪氨酸酶具有抑制作用,抑制常数KI为36 m M,以竞争性抑制剂形式抑制酪氨酸酶活性,是一种可逆性抑制剂;槲皮素以1:1比例通过氢键和疏水作用力结合于酪氨酸酶活性中心,且对酪氨酸酶的荧光产生静态淬灭作用,具有氢键及疏水作用力;分子对接结果验证了以上实验结论:槲皮素占据了酪氨酸酶活性中心,且与活性中心部位的Asn260和Gly62残基形成了强烈的氢键作用,同时伴有疏水作用共同稳定复合物的结构。     

对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化反应的抑制机理

本文研究了对羟基肉桂酸(HCA)对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸和催化二酚底物L-多巴的抑制能力,并利用紫外-可见光谱、荧光光谱以及分子对接技术探究了其抑制机理。结果表明对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸比催化二酚底物L-多巴具有更强的抑制作用,半抑制浓度分别为0.096 mmol/L和0.500 mmol/L;紫外-可见分析发现对羟基肉桂酸能与Cu2+发生螯合,使光谱发生明显红移。进一步通过荧光光谱分析得到,对羟基肉桂酸在酪氨酸酶溶液中并没有出现荧光淬灭反而随着对羟基肉桂酸浓度的增大荧光强度变强,说明对羟基肉桂酸被酪氨酸酶催化氧化成对应的醌类物质。利用分子对接技术揭示了对羟基肉桂酸通过氢键和疏水作用竞争性地占据了单酚和二酚底物的空间位置,并与酪氨酸酶中双核铜离子螯合,从而抑制酪氨酸酶催化L-酪氨酸和L-多巴氧化的活性机理。     

水翁花蕾提取物DMC对胰脂肪酶的抑制作用研究

本文主要探讨了2',4'-二羟基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基查耳酮(2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone,DMC)对胰脂肪酶(Pancreatic Lipase,PL)的抑制作用及作用机理。以4-硝基苯丁酸酯为底物,采用对硝基苯酚法检测DMC对PL活性的影响,采用紫外光谱法、荧光光谱法以及分子对接法研究DMC与PL的相互作用。结果表明:DMC对PL有抑制作用,半数抑制浓度为50.01±3.56 μmol/L,酶动力研究表明DMC是PL的竞争型抑制剂;光谱实验结果显示DMC的加入使PL发生了荧光猝灭,猝灭类型为动态猝灭;同步荧光及三维荧光实验表明DMC不会改变PL构象;热力学参数ΔG<0,两者的相互作用是自发进行,ΔH<0,ΔS<0,表明DMC与PL的相互作用力主要为氢键和范德华力;分子对接实验进一步验证了以上结果。由此可见,DMC具有作为PL抑制剂的潜能。     

Licochalcone A: A lipase inhibitor from the roots of Glycyrrhiza uralensis

In order to develop a functional food and anti-obesity drug through the inhibition of absorption of dietary lipids, we investigated the inhibitory effects on pancreatic lipase of extracts from more than 800 species of herbs in Korea. In this study, licochalcone A was isolated from the ethyl acetate/n-hexane fraction of ethyl acetate extract of the roots of Glycyrrhiza uralensis. Its structure was elucidated by ¹H NMR, ¹³C NMR and HR-EI mass spectroscopy. Licochalcone A substantially inhibited activity with IC₅₀ value of 35 μg/mL (103.4 μM). In an investigation of reversibility, licochalcone A was shown to be reversible to pancreatic lipase. The inhibition mode of licochalcone A was a non-competitive inhibitor, determined by Lineweaver–Burk plot analysis, and K_i value was 11.2 μg/mL (32.8 μM). Furthermore, licochalcone A significantly reduced the production of oleic acid with not only artificial substrate DNPB but natural substrate triolein by pancreatic lipase.     

没食子酸对猪胰α-淀粉酶和蛋白酶的抑制作用

以没食子酸为材料,通过考察酶质量浓度、反应体系中底物和酶及没食子酸添加顺序、不同反应时间、不同没食子酸质量浓度对猪胰α-淀粉酶、蛋白酶的活性影响,研究没食子酸对两种酶的抑制作用。结果表明,在底物质量浓度为1g/100mL、体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液37℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰α-淀粉酶活性最优条件为:α-淀粉酶质量浓度0.64mg/mL,反应时间15min,没食子酸对α-淀粉酶的最大抑制率为95.52%;在体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液40℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰蛋白酶活性的最优条件为:胰蛋白酶质量浓度0.63mg/mL,反应时间30min,没食子酸对胰蛋白酶的最大抑制率为99.24%。没食子酸对两种酶的抑制效果均随没食子酸质量浓度的增大而增强。     

茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶活性的抑制作用

以湖南茯砖茶为原料通过热水浸提、树脂吸附分离得到茯砖茶多酚类物质,并采用酶动力学和荧光猝灭分析方法探讨了茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶的抑制作用。结果表明：茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶有抑制作用,半抑制浓度（IC50）为0.81 mg/mL,抑制类型为可逆非竞争性抑制,其抑制常数Ki为2.56 mg/mL。荧光光谱分析表明茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶具有荧光猝灭效应,与茯砖茶多酚类物质的结合可能造成了酶结构的改变,从而降低了酶的催化活性。     

枇杷幼果总黄酮提取物对脂肪酶的抑制效应及机制

目的研究天然提取物枇杷幼果总黄酮对脂肪酶活性的抑制效应。方法采用抑制率、抑制动力学以及荧光淬灭等方法研究枇杷幼果总黄酮对脂肪酶的作用。结果枇杷幼果总黄酮对脂肪酶有较为显著的抑制作用,半抑制浓度为(54.51±4.07)μg/mL,以竞争性与非竞争性相混合的方式抑制脂肪酶活性,且枇杷幼果总黄酮能抑制脂肪酶的荧光强度。结论枇杷幼果总黄酮提取物能与脂肪酶结合,进而抑制脂肪酶的活性。     

板栗壳黄酮结构分析及其对胰脂肪酶活力的抑制作用

在分析板栗壳黄酮结构的基础上，研究其对胰脂肪酶的抑制作用及类型。采用醇提法提取板栗壳中的黄酮，并用AB-8大孔吸附树脂进行纯化，冻干后得到的黄酮含量为（107.50±1.00）mg/g，提取得率为（5.66±0.05）%。利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱联用技术对板栗壳黄酮进行结构分析，鉴定出8 种黄酮类化合物。采用对硝基苯酚法测定胰脂肪酶活力，分别考察板栗壳黄酮对胰脂肪酶的抑制效果及不同反应条件下板栗壳黄酮对胰脂肪酶活性的影响，结果表明，板栗壳黄酮对胰脂肪酶有较好的抑制作用，半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）为0.074 mg/mL，且使胰脂肪酶最适pH值向碱性偏移。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法确定其抑制类型为非竞争性抑制，抑制常数Ki＝53.19 mg/mL。由此可见，板栗壳黄酮是一种效果良好的胰脂肪酶抑制剂。     

桑叶多糖的化学组成及其对胰脂肪酶的抑制作用研究

将复合酶辅助热水提取所得的桑叶粗多糖依次进行脱蛋白和脱色处理后得到桑叶多糖,研究其化学组成和对胰脂肪酶的抑制作用及作用类型。结果表明,桑叶多糖的总糖含量为58.28%,其单糖组成及摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸=8.61:23.42:4.23:12.73:1.31:3.06:41.40:123.32。桑叶多糖对胰脂肪酶有一定抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为10.32 mg/mL,抑制作用类型为非竞争性抑制。桑叶多糖有望作为胰脂肪酶抑制剂用于减肥保健食品的加工。     

Polyphenols Extracted from Black Tea (Camellia sinensis) Residue by Hot‐Compressed Water and Their Inhibitory Effect on Pancreatic Lipase in vitro

Abstract: Polyphenols, retained in black tea wastes following the commercial production of tea beverages, represent an underutilized resource. The purpose of this study was to investigate the potential use of hot‐compressed water (HCW) for the extraction of pancreatic lipase‐inhibiting polyphenols from black tea residues. Black tea residues were treated with HCW at 10 °C intervals, from 100 to 200 °C. The resulting extracts were analyzed using high‐performance liquid chromatography‐mass spectrometry and assayed to determine their inhibitory effect on pancreatic lipase activity in vitro. Four theaflavins (TF), 5 catechins, 2 quercetin glycosides, quinic acid, gallic acid, and caffeine were identified. The total polyphenol content of extracts increased with increasing temperature but lipase inhibitors (TF, theaflavin 3‐O‐gallate, theaflavin 3′‐O‐gallate, theaflavin 3,3′‐O‐gallate, epigallocatechin gallate, and epicatechin gallate) decreased over 150 °C. All extracts inhibited pancreatic lipase but extracts obtained at 100 to 140 °C showed the greatest lipase inhibition (IC₅₀s of 0.9 to 1.3 μg/mL), consistent with the optimal extraction of TFs and catechins except catechin by HCW between 130 and 150 °C. HCW can be used to extract pancreatic lipase‐inhibiting polyphenols from black tea waste. These extracts have potential uses, as dietary supplements and medications, for the prevention and treatment of obesity. Practical Application: Active forms of lipase inhibitors can be recovered from black tea residues. They could be used as dietary supplements or medications.