对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化反应的抑制机理

本文研究了对羟基肉桂酸(HCA)对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸和催化二酚底物L-多巴的抑制能力,并利用紫外-可见光谱、荧光光谱以及分子对接技术探究了其抑制机理。结果表明对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸比催化二酚底物L-多巴具有更强的抑制作用,半抑制浓度分别为0.096 mmol/L和0.500 mmol/L;紫外-可见分析发现对羟基肉桂酸能与Cu2+发生螯合,使光谱发生明显红移。进一步通过荧光光谱分析得到,对羟基肉桂酸在酪氨酸酶溶液中并没有出现荧光淬灭反而随着对羟基肉桂酸浓度的增大荧光强度变强,说明对羟基肉桂酸被酪氨酸酶催化氧化成对应的醌类物质。利用分子对接技术揭示了对羟基肉桂酸通过氢键和疏水作用竞争性地占据了单酚和二酚底物的空间位置,并与酪氨酸酶中双核铜离子螯合,从而抑制酪氨酸酶催化L-酪氨酸和L-多巴氧化的活性机理。     

柚皮素对胰脂肪酶抑制作用的研究

抑制胰脂肪酶的活性能够有效地减少肥胖的发生。该研究从酶学动力学、荧光猝灭和分子对接的不同角度研究柚皮素对胰脂肪酶的抑制作用。抑制酶活性试验结果表明,柚皮素以可逆竞争性方式抑制胰脂肪酶的活性,且半数抑制浓度为2.413 mmol/L。荧光猝灭试验结果显示,柚皮素与胰脂肪酶结合后酶的荧光被猝灭,胰脂肪酶的构象发生变化。分子对接结果显示,柚皮素与胰脂肪酶形成了酶-抑制剂复合物,阻止了酶和底物的结合,从而导致酶催化活性降低。     

枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用

采用酶动力学法探讨枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性的抑制作用。采用紫外、荧光和红外光谱研究枸杞叶黄酮与胰脂肪酶相互作用的机理。结果表明:枸杞叶黄酮对胰脂肪酶活性有抑制作用,半抑制浓度(IC50)为(0.910±0.008) mg/mL,抑制类型为可逆非竞争抑制,抑制常数为6.04 mg/mL。紫外和荧光光谱显示:枸杞叶黄酮能使胰脂肪酶芳香氨基酸暴露,微环境和酶构象改变,内源荧光猝灭,猝灭类型为动态猝灭为主的混合型猝灭。热力学参数显示:枸杞叶黄酮与胰脂肪酶的相互作用力主要为疏水相互作用。红外光谱显示:枸杞叶黄酮对酶蛋白二级结构的影响,主要表现为复合物结构变得有序化,β-折叠向α-螺旋的转化。枸杞叶黄酮通过改变胰脂肪酶结构和微环境,进而抑制胰脂肪酶活性。     

苦荞麦多糖对胰脂肪酶抑制作用的研究

以三油酸甘油酯为底物,研究苦荞麦多糖在不同条件下对胰脂肪酶抑制作用的影响,确定其最佳抑制条件、抑制作用类型及抑制常数。结果表明,苦荞麦多糖对胰脂肪酶具有明显抑制作用,其半抑制浓度IC50为28.23mg/m L。多糖浓度为30mg/m L,反应时间为15min,p H为7.5,温度为37℃时抑制效果最佳,抑制率达到52.17%,为非竞争性抑制,抑制常数Ki=43.28mg/m L。通过紫外吸收光谱测定表明胰脂肪酶紫外吸收光谱最大吸收波长发生红移,显示苦荞麦多糖是通过改变胰脂肪酶的构象,致使其酶催化活性受到抑制。苦荞麦多糖可以作为植物源的胰脂肪酶抑制剂发挥减肥因子的作用。     

黑木耳多糖对胰脂肪酶活性的抑制作用

目的:以月桂酸4-硝基苯酯为底物,考察黑木耳多糖对胰脂肪酶活性的抑制作用,确定最佳抑制条件、抑制类型及抑制常数。方法:采用水提醇沉的方法制备黑木耳多糖,阴离子交换树脂分离多糖,考察不同反应条件（浓度、p H、温度、时间）下黑木耳多糖各组分对胰脂肪酶活性的抑制效果;通过紫外吸收光谱研究黑木耳多糖与胰脂肪酶构象之间的关系;测定不同浓度底物时的反应吸光度值,初步确定黑木耳多糖对胰脂肪酶抑制作用的机理。结果:分离获得6个组分,其中中性多糖组分a对胰脂肪酶抑制效果较好。当p H为7.5、温度37℃、反应时间为60 min时抑制效果最佳,此时中性多糖组分a抑制率最高达到46.93%;反应类型为非竞争性抑制,米氏常数Km为17.68 mg/m L,最大反应速率V_max为1.43μmol/min,抑制常数Ki为30.32 mg/m L。通过紫外吸收光谱测定,胰脂肪酶最大吸收波长发生红移,说明黑木耳多糖改变了胰脂肪酶的构象,致使其酶催化活性受到抑制。结论:黑木耳多糖对胰脂肪酶活性具有抑制作用,表明黑木耳多糖降血脂作用可能与胰脂肪酶的活性抑制有关,为降血脂功能性产品的开发奠定理论基础。      

苦瓜多糖对胰脂肪酶抑制作用的研究

研究测定苦瓜多糖在不同的反应条件下对胰脂肪酶的抑制率,探讨了浓度、pH、反应时间、反应温度等条件下苦瓜多糖对胰脂肪酶活性的影响。结果表明,苦瓜多糖浓度为30mg/mL,pH为7.5,反应时间为15min,反应温度为37℃时,对胰脂肪酶的抑制效果最佳。在此条件下,苦瓜多糖对胰脂肪酶半抑制浓度IC50为29.86mg/mL,抑制率为51.24%。抑制类型为非竞争性抑制作用,抑制常数Ki=21.62mg/mL。苦瓜多糖对脂肪酶具有明显的抑制作用,为新型减肥药物的开发提供了新的思路。     

黄酮“落新妇苷”对胰脂肪酶抑制作用研究

通过研究落新妇苷对胰脂肪酶的抑制活性,进一步探索其调节脂肪代谢的可能原因。结果表明,落新妇苷对胰脂肪酶有一定的抑制作用,半抑制率浓度为105μmol/L,最大抑制率为56.3%;且抑制效果随二者作用时间延长而增强。酶动力学特征研究表明,落新妇苷是胰脂肪酶非竞争性抑制剂,不改变其与底物的亲和程度,但使最大反应速度减小。荧光光谱滴定法表明落新妇苷会使胰脂肪酶内源荧光淬灭,并使其最大发射波长红移,二者结合常数lg Ka为5.50,结合位点数n为1.17。     

茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶活性的抑制作用

以湖南茯砖茶为原料通过热水浸提、树脂吸附分离得到茯砖茶多酚类物质,并采用酶动力学和荧光猝灭分析方法探讨了茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶的抑制作用。结果表明：茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶有抑制作用,半抑制浓度（IC50）为0.81 mg/mL,抑制类型为可逆非竞争性抑制,其抑制常数Ki为2.56 mg/mL。荧光光谱分析表明茯砖茶多酚类物质对胰脂肪酶具有荧光猝灭效应,与茯砖茶多酚类物质的结合可能造成了酶结构的改变,从而降低了酶的催化活性。     

桑叶多糖的化学组成及其对胰脂肪酶的抑制作用研究

将复合酶辅助热水提取所得的桑叶粗多糖依次进行脱蛋白和脱色处理后得到桑叶多糖,研究其化学组成和对胰脂肪酶的抑制作用及作用类型.结果 表明,桑叶多糖的总糖含量为58.28％,其单糖组成及摩尔比为甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸=8.61∶23.42∶4.23∶12.73∶1.31∶3....     

胰脂肪酶特异性卵黄抗体对胰脂肪酶活性的抑制作用研究

肥胖对人类的健康构成了极大的危害,胰脂肪酶抑制剂由于可以有效地预防和治疗肥胖而受到了人们的广泛关注。本研究首次以胰脂肪酶为抗原制备了胰脂肪酶特异性卵黄抗体（L-Ig Y）,并分析了其对胰脂肪酶活性的抑制效果。结果表明,L-Ig Y可通过与胰脂肪酶的非竞争性结合发挥显著的酶活抑制作用（p<0.05）,计算得出其表观半抑制浓度（IC50）为168.62μg/m L。模拟胃液消化环境中10 min,L-Ig Y的活性几乎完全丧失,但是在模拟肠液中2 h,L-Ig Y的免疫活性仅下降了约20%,表明其有望作为一种潜在的胰脂肪酶抑制剂应用于肥胖的预防和治疗。      

文冠果壳皂苷抑制胰脂肪酶活性的研究

本文旨在确定文冠果壳皂苷作为减肥因子对胰脂肪酶活性的作用效果。通过对胰脂肪酶反应条件(pH、反应时间和反应物加入顺序)的摸索,确定AB-8大孔树脂纯化的文冠果壳皂苷对胰脂肪酶活性的影响,并通过紫外吸收光谱(200~340 nm)、荧光光谱(激发波长290 nm,扫描波长300~450 nm)确定文冠果壳皂苷对胰脂肪酶作用的机理。研究结果表明,文冠果壳皂苷对胰脂肪酶抑制率高达87.5%,最佳反应体系pH 7.4,反应时间15 min,反应物加入顺序为底物与文冠果壳皂苷预热后加入胰脂肪酶溶液反应。文冠果壳皂苷与胰脂肪酶作用后,改变了胰脂肪酶中发光氨基酸(Trp、Tyr)所在微环境,胰脂肪酶分子结构和构象发生变化,导致胰脂肪酶紫外吸收光谱最大吸收波长红移和荧光强度降低,胰脂肪酶活性抑制。文冠果壳皂苷可通过抑制胰脂肪酶发挥减肥因子的作用。     

槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用与分子机理

本文以L-多巴为底物,采用酶抑制动力学法研究了槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用大小及类型,并采用荧光光谱技术分析其与酪氨酸酶的猝灭作用类型、结合位点、作用力类型。在此基础上,进一步利用柔性分子对接技术分析槲皮素对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,槲皮素对酪氨酸酶具有抑制作用,抑制常数KI为36 m M,以竞争性抑制剂形式抑制酪氨酸酶活性,是一种可逆性抑制剂;槲皮素以1:1比例通过氢键和疏水作用力结合于酪氨酸酶活性中心,且对酪氨酸酶的荧光产生静态淬灭作用,具有氢键及疏水作用力;分子对接结果验证了以上实验结论:槲皮素占据了酪氨酸酶活性中心,且与活性中心部位的Asn260和Gly62残基形成了强烈的氢键作用,同时伴有疏水作用共同稳定复合物的结构。     

荞麦黄酮和荞麦糖醇对胰脂肪酶的抑制作用

目的：了解荞麦麸皮中活性成分抑制胰脂肪酶的活性。方法：以苦荞麸皮醇提物（主要成分为芦丁）、醇提残渣水解物（主要成分为芦丁、槲皮素和异槲皮素的混合物）和甜荞麸皮水提物（主要成分为荞麦糖醇）为实验材料,测定3 个样品对胰脂肪酶的抑制作用,以市售胰脂肪酶抑制剂--奥利司他为参照;通过研究底物、抑制剂和酶的加入顺序对抑制率的影响,初步确定醇提水解物的抑制机理。结果：实验材料对胰脂肪酶的抑制作用依次为奥利司他＞醇提水解物＞醇提物＞水提物,半数抑制浓度（IC50）分别为0.47、1.94、2.53、17.6 mg/mL;醇提水解物的抑制作用机理主要是通过苦荞黄酮与底物相互作用,从而阻碍了底物与酶的作用,属于竞争性抑制。结论：荞麦黄酮（即醇提物和醇提水解物）对胰脂肪酶有抑制活性;醇提残渣经高压水解后更有利于其对胰脂肪酶的抑制作用;荞麦糖醇（即水提物）在低质量浓度下抑制效果不明显,在较高的质量浓度下则表现出抑制活性。     

分子动力学模拟研究壳寡糖与脂肪酶相互作用机制

壳聚糖及其衍生物在酶固定化领域有着广泛的应用.了解酶与壳聚糖衍生物在分子水平上的相互作用机制,对相关生物催化剂的设计和应用具有重要意义.本研究采用分子动力学模拟方法研究南极假丝酵母脂肪酶B(CaLB)与壳寡糖(OCTS)的相互作用,并对脂肪酶与催化底物进行分子对接研究脂肪酶催化活性中心和底物结合构象和结合亲和力.结果表...     

有机相脂肪酶催化合成阿魏酸乙酯

本实验研究了有机溶剂中脂肪酶催化阿魏酸乙酯合成反应。对催化合成阿魏酸乙酯反应的脂肪酶和反应介质进行了比较,最佳溶剂为叔丁醇,在所选的6种脂肪酶中,固定化于大孔丙烯酸树脂的南极假丝酵母脂肪酶B(Novozym 435)的催化活性最好。同时对影响合成阿魏酸乙酯反应的因素(底物浓度、底物摩尔比、温度、初始水含量、反应时间等)进行了探讨,优化了反应条件:在10ml无水叔丁醇中,当酸醇摩尔比为1:1,酸浓度为0.1mol/L,反应温度为60℃,反应时间为120h时产率达到最高,脂肪酶Novozym 435具有较高的稳定性,重复使用六次后产率仍然可达到23%。     

根霉脂肪酶有机相合成己酸乙酯条件的研究

用根霉ZM-10脂肪酶为催化剂,在有机相中催化合成己酸乙酯。文中研究了温度、底物浓度、酸醇比、溶剂、吸水方法等对己酸乙酯合成转化率的影响。结果表明,以环己烷为溶剂,以摩尔比为1∶1.3的己酸和乙醇为底物,己酸浓度为0.2 mol/L,在40℃条件下振荡反应14h,合成己酸乙酯的的转化率可达到91.5%。