冠状病毒非结构蛋白的研究进展

近20年来,动物冠状病毒(coronavirus,CoV)变异并传播于人,引起严重的烈性传染病,在全球造成巨大的经济损失.因此,对CoV进行基础研究非常重要.CoV的非结构蛋白(non-structural protein,NSP)在病毒复制过程中发挥着重要作用,如抑制宿主的固有免疫、帮助病毒逃避宿主细胞感应、形成复制...     

轮状病毒Vp6蛋白的免疫荧光检测

目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RV SA11感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(rVp6)蛋白和RVSA11分别免疫豚鼠,制备抗血清,以抗rVp6豚鼠血清作为检测抗体,应用间接免疫荧光技术检测rVp6蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。分别用抗Vp6和抗RV SA11豚鼠血清检测Vp6蛋白和RV SA11株在感染的MA104细胞中的分布。结果在轮状病毒感染的MA104细胞和大肠杆菌BL21(DE3)中均能检测到轮状病毒Vp6蛋白。以抗RV SA11血清作为一抗检测感染细胞,比用抗rVp6血清检测具有更强的敏感性。结论免疫荧光试验可用于轮状病毒Vp6蛋白的检测。     

硒蛋白P结构及功能的研究进展

硒蛋白P(Selenoprotein P,Sepp1)是一种由2个结构域构成的分泌性糖蛋白。血浆中多数Sepp1均源于肝脏,肝脏合成的Sepp1能影响整个机体的硒含量,因此Sepp1在维持机体内硒的动态平衡和分布上起着关键作用。另外,血浆中的Sepp1能够调控微量元素硒缺乏,也是检测硒含量的指标之一。本文就Sepp1结构及功能的研究进展作一综述。     

柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C基因的克隆与表达

目的克隆并表达柯萨奇B4病毒(CVB4)非结构蛋白P2C基因。方法提取CVB4总RNA,RT-PCR扩增P2C基因,克隆入pUCm-T载体中,进行酶切和测序鉴定。双酶切重组质粒pUCm-T-P2C,将P2C基因片段定向亚克隆至原核表达载体pMAL-C2中,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果RT-PCR扩增得到987bp的基因片段,测序结果与GenBank公布的P2C基因序列一致。pMAL-C2-P2C经双酶切鉴定,证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约78000,表达量约占菌体总蛋白的25%,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了CVB4P2C基因,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

人类博卡病毒结构蛋白基因VP2的克隆与表达

采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测、Western Blot分析,证明目的蛋白得到了表达。可为目的蛋白的纯化及结构和功能的研究、相应抗体的制备打下坚实的基础。     

超声波处理对麦胚清蛋白结构和功能性质的影响

研究了超声波功率和处理时间对麦胚清蛋白的紫外光谱、荧光光谱、表面疏水性、溶解度、起泡性能、乳化性能的影响. 结果表明,超声波处理对麦胚清蛋白的紫外和荧光光谱有明显的影响,其溶解度在超声波功率1800 W时最高,比对照组提高了96.2%;在600 W的表面疏水性和乳化性、900 W的起泡性和起泡稳定性最高,分别比对照组提高了16.8%, 12.5%, 18.8%和6.0%;处理时间为20 min时的溶解度及10 min时的表面疏水性、起泡性、起泡稳定性、乳化性达到最大,分别比对照组提高了101.3%, 22.1%, 15.0%, 21.9%和12.7%. 但超声波处理降低了麦胚清蛋白的乳化稳定性.     

基于轮状病毒VP6蛋白新型候选疫苗的研发进展

轮状病毒(rotavirus,RV)是一种人畜共患病原体,给畜牧业和人类健康带来巨大威胁。对RV感染的治疗,目前尚无有效药物,接种疫苗是有效防控RV性胃肠炎暴发的重要措施。目前人商品化RV疫苗均为口服减毒活疫苗,存在散毒风险及潜在安全性等问题,且该疫苗在不发达国家的免疫效力较低,因此,非复制型疫苗很可能成为主要的候选疫苗。本文以RV结构蛋白VP6为基础,对该蛋白在RV免疫应答中的作用及其在RV非复制型疫苗的研发及防治中的应用作一综述。     

烟叶中高营养F─I蛋白的研究进展

Ｆ—Ｉ蛋白是一种很有希望的新型高营养品质的蛋白质资源，其应用前景受到了世界上许多国家的关注。本综述总结了从烟叶中提取Ｆ—Ｉ蛋白的研究进展，介绍了Ｆ—Ｉ蛋白的基本性质，功能特性及温度、酸、碱、酶对其功能的影响以及提取方法，讨论了其作为生产植物化学品应用的工业前景。     

亮氨酸拉链结构蛋白基因的合成及其表达

为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理,设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需的35个氨基酸的折叠片段,并将其克隆到Escherichia coli BL21表达.以ZG1(+)、ZG1(-)、ZG2(+)、ZG2(-)、ZG3(+)、ZG3(-)寡聚核苷酸片段在PCR自动热循环系统连接得到亮氨酸拉链蛋白基因片段,将此片段克隆到pET3b质粒中,酶切后用2%琼脂糖电泳检测证明克隆成功,将这种重组质粒转化到E.coli DH5α,发现pET3b重组体在E.coli DH5α中表达成功,从转化子中分离得到重组质粒pET3b,序列分析证明插入序列为合成的亮氨酸拉链蛋白基因;将重组质粒pET3b在E.coli BL21于5 mL含有50 μg*mL-1氨苄青霉素和34 μg*mL-1氯霉素的LB液体培养基中以IPTG为诱导剂,37℃下表达,10%SDS-PAGE检测到外源基因蛋白质分子量为4000 Da左右;重组体在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中、28℃时能大量表达.     

肠道病毒71型2A、3C、3D蛋白的研究进展

肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因。非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制。2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关。一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染。本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述。     

B族链球菌表面免疫原性蛋白的免疫原性及其抗体保护功能

目的制备B族链球菌(GBS)表面免疫原性蛋白(Sip),研究其免疫原性及抗体保护功能,为GBS蛋白疫苗研究奠定基础。方法采用基因重组技术构建表达载体,并表达GP-Sip融合蛋白。用pET-Sip融合蛋白免疫小鼠,并免疫家兔制备多克隆抗体。Western blot检测GP-Sip蛋白特异性,ELISA检测家兔及小鼠血清中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的功能。结果表达载体经酶切和测序证明构建正确,GP-Sip蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,纯化后纯度可达90%以上。Western blot显示GP-Sip蛋白可与pET-Sip蛋白的免疫血清发生免疫反应。ELISA显示Sip可诱发小鼠产生高水平的IgG抗体。Sip抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用。结论已成功构建GP-Sip表达载体,并高效表达了Sip。该蛋白具有良好的免疫原性,其抗体具有良好保护功能,可作为GBS蛋白疫苗成分或荚膜多糖疫苗载体成分。     

GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定

目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。     

SARS病毒S2蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定

目的研究用毕赤酵母菌表达SARS病毒S2蛋白亚单位。方法依据GenBank中SARS基因组序列,采用人工合成的方法合成SARS病毒刺突蛋白S2亚单位的基因(1590bp),再与CTL表位基因(195bp)重组后,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-S2,转化毕赤酵母GS115,并经MD和MM平板筛选及PCR鉴定,得到阳性重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-S2。经诱导、表达,并对表达产物进行分析、鉴定。结果所构建的重组质粒pPIC9K-S2正确,在毕赤酵母中可高效表达,其表达产物与阳性SARS血清产生特异性反应。结论SARS病毒刺突蛋白S2亚单位可在毕赤酵母中高效表达,产物具有良好的抗原特异性。     

2-(2'-咪唑偶氮)萘酚-4-磺酸的合成及其分析性质的研究

合成了新显色剂咪唑偶氮－２－萘酚－４－磺酸（ＩＡＮ－４Ｓ）,研究了试剂的离解常数及其与金属离子的显色反应。     

A群链球菌疫苗的研究进展

A群链球菌(GAS)是人类细菌感染最常见的病原菌之一,其疫苗的研发仍是尚未解决的难题。本文介绍了目前GAS疫苗研发的不同策略,并重点阐述了M蛋白多肽疫苗的最新研究进展。     

Compartmentalization Role of A-Kinase Anchoring Proteins (AKAPs) in Mediating Protein Kinase A (PKA) Signaling and Cardiomyocyte Hypertrophy

The Beta-adrenergic receptors (β-ARs) stimulation enhances contractility through protein kinase-A (PKA) substrate phosphorylation. This PKA signaling is conferred in part by PKA binding to A-kinase anchoring proteins (AKAPs). AKAPs coordinate multi-protein signaling networks that are targeted to specific intracellular locations, resulting in the localization of enzyme activity and transmitting intracellular actions of neurotransmitters and hormones to its target substrates. In particular, mAKAP (muscle-selective AKAP) has been shown to be present on the nuclear envelope of cardiomyocytes with various proteins including: PKA-regulatory subunit (RIIα), phosphodiesterase-4D3, protein phosphatase-2A, and ryanodine receptor (RyR2). Therefore, through the coordination of spatial-temporal signaling of proteins and enzymes, mAKAP controls cyclic-adenosine monophosphate (cAMP) levels very tightly and functions as a regulator of PKA-mediated substrate phosphorylation leading to changes in calcium availability and myofilament calcium sensitivity. The goal of this review is to elucidate the critical compartmentalization role of mAKAP in mediating PKA signaling and regulating cardiomyocyte hypertrophy by acting as a scaffolding protein. Based on our literature search and studying the structure–function relationship between AKAP scaffolding protein and its binding partners, we propose possible explanations for the mechanism by which mAKAP promotes cardiac hypertrophy.     

Advances in drug delivery systems based on synthetic poly(hydroxybutyrate) (co)polymers

Within the general context of nanomedicine, drug delivery systems based on polymers have sparked a rapidly growing interest and raised many efforts to tackle various diseases, among which cancer. Polyester-based nanoparticulate drug delivery systems, including polymer-drug conjugates and amphiphilic block copolymers, represent a major class with promising outcomes, especially for those derived from poly(3-hydroxybutyrate) (PHB). This review describes recent advances in drug delivery systems designed from the self-assembly of synthetic (co)polymers derived from PHB. The various strategies for the synthesis of PHB-conjugates, PHB/poly(ethylene glycol) (PEG) and other PHB-based copolymers are first summarized. Nanoparticles, micelles, microparticles, and hydrogels elaborated from these (co)polymers following various preparation methods, along with their exploitation in the encapsulation and release of various therapeutic agents, are next detailed. Finally, we discuss the synthetic challenges, drug delivery outlooks, and perspectives of PHB-based drug delivery systems. Engineered nano-scaled materials based on PHB self-assembled systems are thus anticipated to emerge as a valuable platform for original drug delivery systems.