人破伤风免疫球蛋白国家标准品的研制

目的　研制人破伤风免疫球蛋白国家标准品。方法　按WHO有关要求制备并检测标准品 ,以人破伤风免疫球蛋白国际标准品为标准进行协作标定。结果　冻干人破伤风免疫球蛋白国家标准品经外观、水分、无菌、分装误差、效力检测 ,均符合要求 ,在 4℃保持 6 0个月效力稳定。协作标定平均值为 10 5 5IU 支 ,CV值为4 7%。结论　该批人破伤风免疫球蛋白标准品可以作为国家标准品 ,效价定为 10IU 支 ,批号为 0 0 1     

破伤风免疫球蛋白在破伤风治疗中的应用

破伤风免疫球蛋白(TIG)是治疗破伤风的重要药物之一,它能提供以IgG为主的高效抗体,中和破伤风毒素,从而发挥治疗作用。破伤风免疫球蛋白的疗效已获得国际组织机构和学者的肯定,并逐渐取代破伤风抗毒素。目前关于它的推荐治疗剂量建议很多,但尚未形成定论。本文将其最新的应用进展情况和国际上部分应用成功经验作一简述。     

人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的协作标定

应用中和试验、血凝试验和ELlSA对人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的推荐品进行了测定。中和试验测定样品A(推荐品)的效价为134.2(3.04％)IU/瓶;B(阳性对照)为58.6(7.95％)IU/瓶;C(阴性对照)为〈201U/瓶。ELISA测定的效价,A为108.2(7.13％)Iu/瓶;B为55.6(11.56％)IU/瓶。用血凝试验测定的效价,A为160.7HAU/瓶;B为84.3HAU/瓶。除血凝试验测定的结果偏高外,其它两法测定的结果均与协作组相近。此国际标准品已经WHO第43次生物检定专家委员会确定,效价为120IU/瓶。     

人血狂犬病免疫球蛋白的研制

采用人用狂犬病疫苗，对健康献血员进行7外基础免疫和3针加强免疫，采集高效价的狂犬病免疫血浆，按常规方法分离提制狂犬病免疫球蛋白（HRIO）。该制剂的蛋白质浓度为10％，γ-球蛋白纯度＞98％，lgG单体及二聚体含量＞90％，狂犬病抗体含量＞100lU／ml。该制剂为冻干剂型，效价稳定，安全性好，便于运输和保存．     

静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白的研制

目的研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白。方法用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价;采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型;按本公司静脉注射人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较。结果筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5%,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49%,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)"血液制品生产用人血浆规程"要求;甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主;制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白制检规程"要求。结论成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义。     

静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)的研制

目的研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin(pH 4)forintravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病。方法采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准;从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性。结果从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白(pH 4)"的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍。0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100%。EV71-IVIG对最近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性。结论已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择。     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

人抗乙肝免疫球蛋白的稳定性

<正> 为了观察人抗乙肝免疫球蛋白(HBIG)的稳定性,我们做了以下试验。 1.效价稳定性试验采用中国药品生物制品检定所推荐的平行线法和北京生物制品研究所生产的放免试剂。 8802批HBIG抗-HBs效价为173.7IU/ml,放2～10℃一年半后,抗体效价为152.3IU/ml,下降12.3％;放22℃一年半后,抗体效价为145.8IU/ml,下降16％。 2.IgG组分测定采用瑞典PHARMACIA快速蛋白液相层析系     

静脉注射人免疫球蛋白的质量控制

静脉注射用人免疫球蛋白 (IVIG)在抗体置换、免疫调节等方面有着广泛的应用。由于IVIG经静脉注射 ,且用量较大 ,其质量控制尤为重要。控制IVIG质量主要包括IgG的完整性、抗补体活性 (ACA)、多聚体含量、杂蛋白含量、抗体效价、病毒安全性等方面。     

乙型肝炎人免疫球蛋白的应用研究

本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述。     

育龄妇女破伤风抗毒素水平和破类免疫效果

应用IHA法对1318名15～45岁育龄妇女进行了破伤风抗毒素水平测定，阳性率8.80％，保护率7.97％，GMT0．0026IU／ml。抗体阳性率随年龄增大呈下降趋势；城镇与农村育龄妇女的抗体阳性率和保护率均无明显差异。对其中379名18～35岁育龄妇女进行破类免疫，接种1，2，3针后的抗体阳性率，由免前的7.12％分别上升到88．34％、95．33％和100％，保护率由免前的6.33％分别上升到86．02％、93．93／和100％；GMT由免前的0.002IU／ml分别上升到0.26IU／ml、0．38U／ml和0．68IU／ml。各针次间的抗体阳性率、保护率和GMT均有显著差异。而各年龄组间的血清学效果则无明显差异。     

抗破伤风类毒素单克隆抗体的研究

用精被类（TT）免疫的BALB／c小鼠牌细胞与小鼠骨髓癌SP2／O细胞融合，获得4株能分泌中和破伤风毒素的单克隆抗体细胞株．所分泌的单抗能识别不同的抗原表位。一种单抗在小鼠体内可中和0．1～0．4IU／ml破伤风毒素，2种、3种和4种单抗混和后分别可中和20、350和750IU／ml。     

人源抗破伤风毒素单克隆抗体的中和活性和预防治疗作用

目的 考察人源抗破伤风毒素单克隆抗体的中和活性及体内预防治疗作用。方法 对分泌人源抗破伤风毒素单克隆抗体(人源单抗)的两株细胞进行培养,并对其抗体进行纯化及检定。结果 人源单抗在小鼠体外具有中和活性。较高的剂量可完全中和毒素,延长小鼠生存时间。不同的人源单抗中和活性不同。单抗在小鼠攻毒实验中均具有一定的预防和治疗作用。结论 人源单抗可用于破伤风感染的预防治疗。     

Immune Prophylaxis and Therapy for Human Cytomegalovirus Infection

Human Cytomegalovirus (HCMV) infection is widespread and can result in severe sequelae in susceptible populations. Primary HCMV infection of naïve individuals results in life-long latency characterized by frequent and sporadic reactivations. HCMV infection elicits a robust antibody response, including neutralizing antibodies that can block the infection of susceptible cells in vitro and in vivo. Thus, antibody products and vaccines hold great promise for the prevention and treatment of HCMV, but to date, most attempts to demonstrate their safety and efficacy in clinical trials have been unsuccessful. In this review we summarize publicly available data on these products and highlight new developments and approaches that could assist in successful translation of HCMV immunotherapies.     

一种新型破伤风类毒素的理化和生物学特性的研究

对所研制的新型破类进行SDS－PAGE和HPLC分析，其主要成分为分子量大于584KD的聚合物，HPLC显示第一峰占82．09％～97．68％。此抗原的稳定性能良好，毒性逆转试验阴性，说明此种新破类解毒彻底。动物试验表明，其免疫原性大大优于常规破类，而且达到和超过了1990年版《中国生物制品规程》规定的吸附精制破伤风类毒素的要求。     

人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果

目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠,以NIH法检测保护效力,RFFIT法检测中和抗体,流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记,体外实验法检测淋巴细胞增殖能力,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性,ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比,可提高效力2~3倍,脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组,两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫,小鼠CD4+/CD8+比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比,差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。     

淋病奈瑟氏菌免疫血清的研究

用中国医学细菌保藏管理中心提供的淋病奈瑟氏菌 W 分群参考菌株,参考 Sandstrom 的方法免疫家兔。用 ELIISA 法测定免疫前、注射佐剂后、免疫抗原后和加强免疫后家兔血清中抗体,结果呈曲线递增升高,最高滴度可达1∶5120～1∶20480。传统用于试管凝集试验的甲醛固定的菌液抗原和用于玻片凝集试验的菌苔抗原,其与抗血清的凝集反应较弱,而且菌苔粘稠,不易观察结果。改用100℃1小时处理的菌液抗原,其与抗血清的凝集反应较强,而且不粘稠,无自凝现象。     

免疫抗体文库的构建及亚nM高亲和力人源抗体的筛选

目的构建免疫抗体文库,并筛选亚nM高亲和力人源抗体。方法采用破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)免疫的高效价人B淋巴细胞,经PCR扩增可变区基因,构建免疫抗体文库,并筛选高亲和力人源抗体。将获得的抗体基因片段转换成全分子,进行真核表达和纯化,并与人抗TT多克隆抗体进行比较分析。结果构建的人破伤风免疫噬菌体抗体库库容为4.5×106,多样性符合引物设计要求,经筛选获得相对亲和力为10-10M的高亲和力人源抗体,其体内中和活性高于人多克隆抗体。结论根据抗体基因使用频率设计引物构建小容量免疫抗体文库,可获得亚nM的高亲和力人源抗体,该策略可用于抗感染性疾病人源抗体的开发。     

抗人淋巴细胞球蛋白制剂的质量比较

抗人淋巴细胞球蛋白(ATG/ALG)是一种有效的免疫抑制剂。目前对ATG制剂的活性及质量体外检测方法均以细胞毒和花环抑制试验为主。本文用上述方法检定了兔抗人淋巴细胞球蛋白(R-ATG)和马抗人淋巴细胞球蛋白(E-ATG)。结果表明:两种制剂的细胞毒滴度和花环抑制试验基本相同。应用~3H—胸腺嘧啶渗入试验研究ATG对PBMC促有丝分裂活性,结果表明:R-ATG的活性高于E-ATG。ATG体外促有丝分裂活性可作为预测ATG临床疗效的一个参数。     

破伤风毒素及其片段的纯化

本文报道了破伤风毒素及其片段AB、BC、A和C的纯化方法。应用硫酸铵沉淀和Ultrogel AcA_(34)凝胶过滤制备的纯化毒素,于SDS-PAGE和PAGE中均形成单一的蛋白带,分子量为15万,pI为5.95,毒力为1～3×10~4MLD/μg。毒素经DTT还原、尿素处理、再用Ultrogel AcA_(44)凝胶过滤制备A和BC片段。A片段的分子量为54000,pI为4.8。BC片段的分子量为98 000,pI为7.2。木瓜酶处理毒素后用高压液相层析制备AB和C片段。纯化的AB片段分子量为98 000,于等电聚焦中为2条主要区带,pI为5.3和5.5,另有数条小区带;纯化的C片段分子量为51000,于PAGE中形成5条蛋白带,于等电聚焦中主要区带的等电点为7.3,另有几条小区带。