人源性嗜酸乳杆菌的分离及分子鉴定

从健康婴儿的新鲜粪便中分离纯化的10株乳杆菌,用嗜酸乳杆菌l6S rDNA的特异性引物和建立的PCR方法对乳杆菌分离株进行分子水平上的鉴定。结果表明,有3株菌和嗜酸乳杆菌参考菌株扩增出大小一致的目的片段,证明此3株菌为嗜酸乳杆菌。测序结果显示,3株分离菌株与标准菌株的同源性达到95%以上,进一步说明了3株菌为嗜酸乳杆菌。     

16S rDNA-RFLP技术鉴定西藏地区乳制品中的乳杆菌

将16S rDNA PCR技术和RFLP技术相结合,对分离自乳制品中的乳杆菌进行分类和鉴定.从我国西藏地区传统发酵乳中分离出51株乳杆菌,采用通用引物扩增16S rDNA,利用限制性内切酶AluI,HaeIII和HinfI将16S rDNA扩增产物进行酶切后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱将菌种鉴定到种的水平.根据16S rDNA-RFLP的结果从中选出8株有代表性的菌株进行生理生化实验和16S rDNA序列的测定,实验结果与RFLP鉴定结果相吻合,表明此方法是一种快速、准确的可用于大量乳杆菌分类和鉴定的方法.     

利用16S rDNA序列及tuf-RFLP鉴定蒙古国发酵乳中的乳酸菌

运用16S rDNA序列分析和tuf-RFLP技术对采于蒙古国扎布汗省的25份发酵乳样中分离出的110株乳酸菌进行鉴定。首先将分离的110株乳酸菌的16S rRNA基因进行扩增,测序并构建系统发育树,初步鉴定为41株嗜热链球菌,40株瑞士乳杆菌,11株德氏乳杆菌保加利亚亚种,2株发酵乳杆菌,1株乳明串珠菌,2株肠膜明串肠膜亚种,1株乳酸乳球乳酸亚种和12株属于干酪族的菌株。由于干酪乳杆菌族的16S rDNA序列差异很小,故采用tuf-RFLP技术对这12株进行了进一步的验证,通过分离菌株与模式菌株tuf-RFLP图谱的比较分析,结果表明这12株菌均为干酪乳杆菌。     

高效液相色谱法提高红曲细菌分离与分析的效果

为了探讨高效液相色谱技术(HPLC)在复杂微生态体系中微生物分离、分析的应用潜力,提高现代分子生物学技术检测的灵敏度和准确性,本文选取红曲作为模式体系,优化红曲中细菌样品的制备方法,应用HPLC技术对红曲中的生产菌株进行分离,并结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)、细菌16S rDNA鉴定方法对色谱分离得到的菌株进行鉴定。结果显示:根据HPLC紫外检测图谱收集到5个明显的洗脱峰,其中有3个洗脱峰经DGGE分析为单一条带,16S rDNA鉴定洗脱峰分别包括环状芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、人参土芽孢杆菌和脂肪酸芽孢杆菌。研究表明,高效液相色谱技术能够从复杂的红曲微生物样品中分离出单一的细菌,与传统PCRDGGE技术相比,无需进行胶回收便可实现16S rDNA的直接测序,且具有准确性高,试验周期短,细菌细胞可回收等优点。色谱分离技术在下一代测序技术中的应用潜力也在探讨中。     

新疆特色果蔬中乳酸菌分离鉴定及其抑菌活性

利用MRS,M17等4种培养基对采自新疆不同地区的8种水果中的乳酸菌进行分离鉴定,根据16S rRNA基因序列确定菌株的系统进化关系,并利用牛津杯法筛选具有抑菌活性的乳酸菌。共分离疑似乳酸菌90株,rep-PCR指纹图谱分型选出15株代表菌株,经16S rRNA基因序列分析,它们分别隶属于乳杆菌属(Lactobacillus)8株、明串珠菌属(Leuconostoc)6株、乳球菌属(Lactococcus)1株,共3个属,8个种。利用牛津杯法筛选出8株对枯草芽孢杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用的乳酸菌,为乳酸菌作为生物防腐剂应用到食品工业中奠定基础。     

海南黑山羊瘤胃液中乳酸菌的分离和鉴定

以海南黑山羊瘤胃液为研究对象,对其进行乳酸菌的分离和鉴定,为黑山羊饲料的青贮提供优质的乳酸菌菌株。通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分得菌株进行初步鉴定,并对分离得到的菌株进行16S rDNA基因扩增与测序。结果表明从黑山羊胃液中筛选出15株革兰氏阳性、H2O2酶阴性的乳酸菌疑似菌株,除菌株HBG20不能在pH 3.0条件下生长,其余菌株均能生长;三株代表菌株HBG11、HBG46和HBG86在低温5 ℃和高温55 ℃条件以及pH2.5时均能生长,同时在盐浓度为6.5%时也能生长。16S rDNA基因测序结果表明,菌株HBG11与耐久肠球菌（Enterococcus durans）同源性最高,菌株HBG46与植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）同源性最高,菌株HBG86与干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）同源性最高。     

传统分离培养结合DGGE技术研究新疆传统发酵酸驼乳中乳酸菌的多样性

目的:分析新疆传统发酵酸驼乳中乳酸菌多样性,为我国传统乳制品微生物资源的利用提供基础数据。方法:采用传统分离培养和基于16S r DNA的PCR-DGGE方法,对12份酸驼乳样品中分离出的87株可培养乳酸菌进行形态、生理生化结合16S r DNA分子法鉴定菌株;对DGGE图谱上的15条16S r DNA目标条带切胶回收测序。结果:传统培养法显示样品中乳酸菌总数在106~108CFU/m L之间,其中植物乳杆菌为优势菌群,次优势菌群为乳酸片球菌;通过DGGE目标条带序列分析与相似性比对,植物乳杆菌、瑞士乳杆菌丰度最高,是优势菌群。此外,鉴定出干酪乳杆菌、屎肠球菌、乳明串珠菌、芽孢杆菌。DGGE图谱显示:样品混合菌群中有5条条带无对应的纯菌株,而纯菌株在混合菌群的图谱上都有相应的条带。结论:传统分离培养与PCR-DGGE在分析优势细菌种群上结果一致,均为植物乳杆菌;用传统分离培养未鉴定到屎肠球菌和芽孢杆菌。DGGE图谱能更全面地反映样品中的弱势菌群,体现样品细菌多样性的真实水平。     

产凝集素乳杆菌的筛选及PCR—16S rDNA鉴定

目的 从泡菜汁中分离产凝集素乳杆菌并鉴定.方法 通过凝集实验筛选产凝集素的乳杆菌,用聚合酶链式反应(PCR)扩增16S rDNA可变区基因鉴定产凝集素乳杆菌.结果 此菌株呈革兰阳性,短杆状,产乳酸.通过同源性比较,此菌株与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性为99%.结论 分离得到了产凝集素的菌株,鉴定表明此菌株为植物乳杆菌.     

婴儿粪便长双歧杆菌的分离与多样性分析

本研究旨在分析婴儿粪便长双歧杆菌的多样性,采用改良MRS培养基从哈尔滨地区健康婴儿粪便中分离双歧杆菌,采用生理生化实验结合16S rDNA和热应激蛋白60基因(heat-shock protein 60,hsp60)同源性分析鉴定分离株,利用同源性分析及随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphism DNA,RAPD)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进一步分析长双歧杆菌多态性。实验从11个婴儿体内分离得到18株厌氧的细菌菌株,经形态学分析、生理生化实验、16S rDNA测序及hsp60测序实验发现,其中7株为长双歧杆菌长亚种,3株为长双歧杆菌婴儿亚种。RAPD和MLST结果表明:7株长双歧杆菌长亚种为6个基因型,3株长双歧杆菌婴儿亚种为2个基因型,上述结果说明不同人源婴儿粪便长双歧杆菌基因型差异较大。     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。