PCR—DGGE用于浓香型大曲微生物群落分析的条件优化

试验对浓香型大曲微生物群落的PCR—DGGE电泳最佳变性剂梯度范围、电泳时间进行了优化。结果表明：细菌DGGE电泳最佳变性剂浓度梯度为35％～55％;而真菌DGGE电泳最佳变性剂浓度梯度为30％～50％。通过时间进程法得出最佳电泳时间为16小时。运用此优化后的PCR—DGGE技术对不同时期曲药微生物群落进行了研究,获得了较丰富的微生物多样性。     

厌氧活性污泥PCR-DGGE图谱的优化

针对特种污泥PCR-DGGE图谱的优化一直是微生物分子生态学研究的重点.在反硝化抑制硫酸盐还原菌的研究中,研究厌氧硫酸盐还原污泥和反硝化污泥DNA的提取方法,应用通用引物958F/1401R扩增16S rDNA序列,探讨不同的退火温度对DGGE指纹图谱多样性影响,同时采用时间进程法对DGGE图谱进行优化.结果表明,采用PBS洗涤污泥和超声震荡有利于硫酸盐还原污泥DNA提取;采用958F/1401R为引物时,扩增片段大约500 bp,不同的退火温度对DGGE指纹图谱的多样性影响不显著;采用时间进程法可以很好地再现不同电泳阶段对样品的分离效果,最佳变性剂梯度为40%～60%,在130 V电压下,最佳电泳时间为5 h.     

PCR-DGGE技术分析浸矿体系细菌群落结构的实验优化

为了研究低品位黄铜矿细菌搅拌浸出的浸矿菌液中的细菌群落结构,对 PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术相关的实验方法进行了优化,主要涉及低丰度基因组 DNA提取方法优化、16SrRNA基因的 PCR扩增条件优化以及变性梯度凝胶电泳条件的优化.结果表明,采用分级离心多次浓缩的方法收集矿浆样品中的菌体,再用试剂盒提取基因组 DNA,有较好效果;使用含特定“GC夹板”的引物5′-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3′进行热启动降落 PCR,能显著提高目的条带的 PCR扩增效率;当 DGGE电泳设置温度为60℃左右,胶浓度为6%,尿素变性梯度为30%~50%,恒定电压为100V,时间为9h时,可以获得效果较好的 DGGE电泳图谱,该优化方案提高了对浸矿体系中细菌群落结构的检测效果     

超声波破碎法提取活性污泥DNA及其DGGE分析

为快速提取活性污泥中的微生物DNA,进一步应用于变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析其群落结构,采用细胞超声波破碎法直接提取反应器活性污泥DNA,以16S rRNA V3区域通用引物进行PCR扩增,随后利用DGGE技术对扩增产物的多样性进行评估.结果表明,超声波破碎法可以快速地提取活性污泥DNA,用超声波破碎法提取到的活性污泥克服了PCR扩增困难的问题.在一定的超声波功率下,超声时间对DNA产率、PCR扩增效率和DGGE分析均有很大影响,实验的最佳超声时间为27 s.DGGE分析表明,用该法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,种群强度最高能达到0.7 OD,能够进一步应用于群落结构分析.     

窖泥微生物群落SSCP分析条件优化的研究

由于窖泥微生物群落结构复杂,而PCR—SSCP是研究环境微生物群落较理想的一种方法。试验对影响SSCP图谱的条件进行优化分析,为窖泥微生物群落结构解析提供了有效的手段。结果表明：变性缓冲液配比为：去离子甲酰胺1．9mL、溴酚蓝3mg、5×TBE 250μL、0．5MEDTA5μL、10％SDS 5μL;凝胶条件为：凝胶浓度为12％、丙烯酰胺与N,N′-亚甲基双丙烯酰胺的比例为29：1、无甘油。经95℃变性10min,4℃条件下200V电泳8h,可得到较理想的图谱。     

均匀设计优化Wickerhamomyces anomalus Y-1菌株产酯条件及其产香分析

产酯酵母是白酒酿造的重要功能微生物,发掘其产香特性并优化产酯条件对白酒酿造技术的提升具有重要意义.以大曲中分离得到的1株异常威客汉姆酵母为出发菌株(命名为Wickerhamomyces anomalus Y-1),对其生长耐受性进行研究,用均匀设计法进行优化试验,结合回归分析考察了培养温度、时间、转速、接种量等因素对其...     

处理垃圾渗滤液复合式膜生物反应器中微生物群落结构的演变和分析

为了揭示复合式膜生物反应器中微生物群落结构多样性的演变过程,为改进工艺提供依据,分别3次从反应器混合液中和生物膜上采集样品并提取样品的微生物总DNA,然后使用V6-V8区引物对(GC968F/1492R)进行PCR扩增,最后用PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE).DGGE分析表明,在反应器运行初期微生物群落结构变化较大;在整个反应器运行过程中,微生物群落多样性较高;在该系统中,由于有生物填料的存在,可能存在厌氧微环境,所以在该反应器中可能存在短程脱氮和同步脱氮.在反应器运行约2个月时,出现的一些菌群是膜污染物产生和累积的主要因素.     

山豆根中生物碱的毛细管电泳分析方法对比研究

采用两种电泳模式——毛细管区带电泳(CZE)和毛细管胶束电泳(MEKC)分别对山豆根中的生物碱进行分离分析。在优化的分离条件下，两种模式都以盐酸麻黄碱作内标物，在电压为25kV和检测波长为208nm的条件下进行。在CZE模式中，以0.04mol/L含50％甲醇(V／V)的柠檬酸作为缓冲溶液(pH=4.5），能够分离得到6种生物碱；在MEKC模式中，以20mmol／L硼砂溶液、30mmol／L十二烷基硫酸钠(SDS)、40％甲醇(V／V)作为电解质溶液，能够分离得到7种生物碱。两种模式在所选定条件下，都能将山豆根中主要生物碱进行基线分离，且有较好的重现性和较低的灵敏度。在两种不同的分离模式下，分别对山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱进行了定性定量研完，从分子结构上阐明了这两种主要生物碱在不同的分离模式下的迁移机制。     

处理垃圾渗滤液复合式膜生物反应器中微生物群落结构的演变和分析

为了揭示复合式膜生物反应器中微生物群落结构多样性的演变过程,为改进工艺提供依据,分别3次从反应器混合液中和生物膜上采集样品并提取样品的微生物总DNA, 然后使用V6-V8区引物对(GC968F/1492R)进行PCR扩增,最后用PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE).DGGE分析表明,在反应器运行初期微生物群落结构变化较大;在整个反应器运行过程中,微生物群落多样性较高;在该系统中,由于有生物填料的存在,可能存在厌氧微环境,所以在该反应器中可能存在短程脱氮和同步脱氮.在反应器运行约2个月时,出现的一些菌群是膜污染物产生和累积的主要因素.     

强化生物除磷工艺富集聚磷菌及其微生物菌群分析

为了研究聚磷菌的生长机理和菌种特性,在序批式SBR反应器中,以普通活性污泥富集聚磷菌,在厌氧/好氧条件下,以乙酸钠/丙酸交替作为碳源富集高浓度聚磷菌,采用FISH结合DGGE的分子生物学手段研究了富集周期内系统微生物种群结构的变化.DGGE结果表明:试验前后微生物种群结构发生了明显改变,其菌群的多样性指数、丰富度指数和条带数具有一致的变化趋势,在运行第2阶段末期达到最高值,进入稳定运行阶段,这3项指数下降,优势度上升.聚类分析表明,稳定运行期间种群群落相似度较高.FISH结果表明:在启动和负荷提高阶段聚磷菌与聚糖菌呈现共同增长的趋势,在第71天分别达到41%和39%;在稳定运行阶段聚磷菌成为明显的优势菌属,占总菌群的89%,反应器内仅存在少量聚糖菌.     

BEAC工艺中微生物群落变化和种群稳定性

为了解生物增强活性炭(BEAC)上微生物群落变化和种群的稳定性,从运行13 d、26 d和39 d的BEAC炭柱的上层、中层、下层进行取样,通过细胞裂解来获取基因组DNA,纯化后,用对细菌16S rDNA基因V3区具有特异性的通用引物F357-GC和R518对其进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,得到长约250 bp的PCR产物.用变性梯度凝胶电泳(DGGE)对PCR产物进行分离,获得炭柱内微生物群落的16S rDNA基因V3区的指纹图谱.研究表明:随着反应器的运行,活性炭柱内微生物的群落结构、种类以及数量都具有时序动态性;原水带入的其他菌的种类和数量不断减少;人工强化固定的5株菌一直存在,它们在空间上呈现不同的分布,这些菌经历了动态的演替后,逐渐成为优势菌群,群落结构趋于稳定.固定化菌群的稳定性从根本上保证了整个系统的运行和处理效果的稳定性.     

阳离子聚氨酯电泳漆电泳工艺的探讨

研究了水性聚氨酯电泳漆的电泳工艺温度、电压、时间、电流密度及pH值对电泳漆膜质量及性能的影响,得到了最佳漆膜质量的工艺参数。当电泳电压为30V、时间为60s、pH为6、烘烤温度为140℃,漆膜的质量较为理想。     

毛细管电泳法测定吡罗昔康的含量

建立高效毛细电泳法来测定吡罗昔康含量。采用毛细管电泳仪进行实验：弹性石英毛细管柱75μm×60cm,进样压力100mPa,电动进样5s,分离电压24kV,毛细管温度20℃,检测波长为254nm,运行缓冲液为0.01mol/L硼砂溶液。采用t法和F法进行与HPLC法的显著性检验。吡罗昔康样品的线性范围：1.0×10-6~1.0×10-2 mol/L,回收率：98.66%,RSD=2.1%,与HPLC法无显著性差异。实验表明毛细管电泳法分离效率高、分析速度快、样品和试剂用量少。     

脉冲放电等离子体甲烷氯化制氯代甲烷

采用脉冲电晕放电等离子体活化手段在线-筒式反应器中,进行甲烷氯化合成氯代甲烷反应.考察了原料气V(Cl2):V(CH4)值、电晕放电脉冲电压和电晕放电重复频率参数对甲烷转化率及氯代甲烷选择性的影响.反应物及各产物通过气相色谱法进行在线分析.实验结果表明:常温常压下,在脉冲电晕等离子体作用下,甲烷和氯气反应可以生成氯代甲烷.甲烷的转化率随加入能量强度的增加而提高.提高氯气/甲烷摩尔比,多氯甲烷的产率也提高.当反应气总流速为100 mL/min,V(Cl2)∶V(CH4)=1.2∶1,脉冲放电电压为17.5 kV,放电频率为80 Hz时,甲烷的转化率为10.5％,一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯甲烷的选择性分别为67.6％,17.7％,13.3％和1.4％.     

PCR-DGGE在真菌群落研究中的应用解析

论述了变性梯度凝胶电泳（DGGE）在真菌群落结构研究中的技术应用的主要步骤：从样品中直接提取真菌DNA,选取5′端含GC夹的特异性引物对18S rDNA或IST序列等的部分片段进行扩增,得到合适的目的DNA片段,并在变性梯度的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳,使不同来源的真菌DNA片段有效分离,再进行各种分类分析。     

毛细管电泳-安培检测法测定中药黄独中的四种活性成分

采用毛细管电泳-安培检测法（CE-AD）,同时测定中药黄独中的表儿茶素、异香草酸、香草酸和杨梅素等四种主要生物活性成分的含量.实验采用柱端射壁式检测法,以直径300 m的碳圆盘电极为工作电极,检测电位为＋0.95 V（vs.SCE）.在优化的测定条件下,上述四种组分在40×10-3mol/L,pH8.7的硼酸盐缓冲溶液中15 min内达到基线分离.各组分在三个数量级的范围内呈良好线性关系,该方法成功的被应用于实际样品的分析,获得令人满意的结果.