CA125单克隆抗体的制备及初步应用

利用CA125抗原免疫Ba1b／c小鼠，采用杂交瘤细胞技术，建立了分泌抗CA125抗体的杂交瘤细胞株。将CA125单克隆抗体应用到酶促化学发光免疫分析和免疫放射分析方法中，建立了CA125酶促化学发光和CA125免疫放射分析。     

肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制

采用两株CA125单克隆抗体,一株用于125I标记,另一株包被于试管作为固相抗体,稀释卵巢癌患者腹水制备标准品,建立了双位点夹心法人血清肿瘤标志物CA125免疫放射分析法.标准曲线的最大标准点免疫结合与零标准非特异结合之比大于100;最小检测限为1.0 U/mL;批内、批间变异系数分别为 4.4%～5.8 %和8.4%～9.9 %;样品中加入已知量CA125测定,回收率为96.8%～112.5%;对含高浓度CA125的血清样品稀释测定,结果表明方法的健全性良好.38例健康女性血清样品测定值范围为2.9～24.1 U/mL;±2s为9.6±9.6 U/mL.     

AFP单克隆抗体的研制及其在免疫分析中的初步应用

获得了四株分泌ＡＦＰ（甲胎蛋白）单克隆抗体的杂交瘤细胞株并已稳定传代。其中Ａ４Ａ１１、Ａ１４Ｃ１１在ＡＦＰ ＩＲＭＡ中得到了很好的配对，经ＲＩＡ鉴定其滴度分别为１：８００００和１：１５０００，亲和常数分别为１．７×１０＾９Ｌ／ｍｏｌ和１．４×１０＾１０Ｌ／ｍｏｌ。Ａ１４Ｃ１１作为包被抗体应用于ＡＦＰ ＥＬＩＳＡ中也得到较好的结果。     

人血清CA15-3免疫放射分析法的建立

一株CA15-3单克隆抗体用于^125I标记，另一株CA15-3单克隆抗体包被试管作为固相抗体，建立了双位点夹心肿瘤标志物CA15-3免疫放射分析法。CA15-3标准品以CIS公司免疫放射分析药盒标准品校正。最小检测限为0.4U／mL；批内、批间变异系数分别为6．0％～6．2％和4．1％～5．9％；样品中加入已知量CA15-3测定，回收率为86．8％～118．6％；高浓度CA15-3的血清样品系列倍比稀释后测定，实测值和计算值呈线性相关，相关系数大于0.99；38例健康女性血清样品测定值为5．7～23．7U／mL。     

CA_(125)时间分辨荧光免疫分析

以CA12 5单克隆抗体固相包被 ,用平衡饱和法与CA12 5、Eu3+标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA12 5单抗形成三层夹心 ,以 β -二酮体为增强液 ,建立CA12 5的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为 4 .5%和 4 .0 % ,平均回收率 96.7% ,灵敏度 3.3μg L ,可测范围为 16— 2 0 62 μg L。本法与CEA无交叉 ,与AFP有 4 .6%交叉 ,与 β -HCG有 12 .4 %交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较 ,相关系数为 0 .999,结果呈高度相关。     

CA125时间分辨荧光免疫分析

以CA125单克隆抗体固相包被,用平衡饱和法与CA125、Eu^3 标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸－CA125单抗形成三层夹心,以β－二酮体为增强液,建立CA125的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为4．5％和4．0％,平均回收率96．7％,灵敏度3．3μg/L,可测范围为16－2062μg／L。本法与CEA无交叉,与AFP有4．6％交叉,与β－HCG有12．4％交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较,相关系数为0．999,结果呈高度相关。     

糖类抗原CA19-9免疫放射分析法的建立

采用两株CA19-9单克隆抗体,一株用于125I标记、另一株包被于试管作为固相抗体,用血清稀释CA19-9抗原,制备标准品,建立了CA19-9双位点夹心免疫放射分析方法（IRMA）。分析采用两步法,本方法最小检测限为2.0 U/mL,批内、批间变异系数分别为 6.4%~9.5%和6.0%~12.6%,样品添加实验结果显示,回收率为88.1%~106.1%,血清样品倍比稀释后测定,测定值和稀释度的相关系数为0.990。CA19-9浓度至11800 U/mL时测定未见“弯钩”效应。69例健康人血清样品测定值为0.3~29.6 U/mL（ ±s 为7.4±5.8 U/mL）,和法国CIS公司的CA19-9免疫放射分析药盒同时测定84例人血清样品,二者测定值相关方程为y=1.32x-17.6,相关系数r=0.896。相似文献   

甲基苯丙胺和吗啡单克隆抗体的制备及初步应用

分别以甲基苯丙胺-牛血清白蛋白（BSA）联接物和吗啡-BSA联接物为免疫原免疫Balb/c小鼠,采用细胞融合技术制备了抗甲基苯丙胺（MA）单克隆抗体及抗吗啡（MP）单克隆抗体,获得了能够稳定分泌阳性抗MA杂交瘤细胞3株（BD1、BD2、BD10）和抗MP杂交瘤细胞4株（MP6A8、MP6D9、MP7D6、MP8D9）。 3株MA单克隆细胞株均为λ链IgG1型。用它们诱发的腹水亲合常数均大于107L/mol（RIA）。对50多种药物进行的交叉反应实验表明,三株MA单抗都达到免疫分析应用要求。其中,BD10单抗在ELISA及胶体金标记快速检测板、BD1、BD2在RIA的应用中取得了较好的效果。     

乳过氧化物酶法制备^125I标记膀胱癌（L4B4）单克隆抗体技术

采用乳过氧化物酶放射性碘化标记技术，制备了＾１２５Ｉ标记的膀胱癌单克隆抗体（Ｌ４Ｂ４）用于荷（Ｌ４Ｂ４）瘤的裸鼠放射性示踪实验，＾１２５Ｉ－Ｌ４Ｂ４浓集在肿瘤部位。     

前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异＜5%,批间变异＜15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。     

促卵泡激素酶促化学发光免疫分析试剂盒的研制

采用双抗体夹心法建立了测定人血清FSH酶促化学发光免疫分析方法。本方法的测量范围为1．5～100IU／L,灵敏度为0．36IU／L,批内变异系数为1．0％～1．6％,批间变异系数为4．0％～4．6%,回收率为90．6％～117．8％,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0．990。与TSH的交叉率〈0．23％,与LH和HCG的交叉率分别〈0．16％和〈0．27％。与贝克曼化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较,相关性方程为y=0．85x—0．03,相关系数r=0．954。与免疫放射分析试剂盒进行比较,相关性方程为y=0．97x＋5．29,相关系数r=0．965,与放射免疫分析试剂盒,进行比较,相关性方程为y=0．95z-3．82,相关系数r=0．954。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

催乳素酶促化学发光免疫分析试剂盒的研制

采用两株催乳素(PRL)单克隆抗体,一株包被化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,研制了测定人血清PRL浓度的酶促化学发光免疫分析试剂盒。本试剂盒测定范围50~4 000 mIU/L,灵敏度4.26 mIU/L,批内、批间变异系数分别小于10%、15%,回收率90.3%~100.8%;血清样品倍比稀释后的测定值和稀释度的相关系数为1;本试剂盒正常参考值范围:女性43.2~513.1 mIU/L(n=52),男性54.8~334.3 mIU/L(n=68)。     

游离前列腺特异抗原免疫放射分析方法的建立

采用双抗体夹心法,利用两株前列腺特异抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）的单克隆抗体（抗游离前列腺特异抗原F-PSA和抗血清中总前列腺特异抗原T—PSA）,建立了定量测定血清中F-PSA含量的免疫放射分析方法。该方法的最小检测限为0．04μg／L,批内变异系数≤4．0％,批间变异系数≤10．5％,平均回收率为102．7％。该法与CIS公司生产的放免试剂盒比对的相关方程为y=0．9651x-0．0011,相关系数r=0．9964。本研究建立的F-PSA免疫放射分析方法灵敏度高,定量分析效果较好,适用于临床诊断。     

重组抗人CD22嵌合抗体SM03的 125I标记及生物活性

为了探讨125I标记的重组抗人CD22嵌合抗体SM03的生物活性,采用Iodogen法进行单克隆抗体SM03的125I标记, Sephacryl S-300 HR色谱柱分离标记混合物,测定分离后样品的纯度与浓度.采用竞争结合法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定纯化后样品的活性.抗体经过放射性标记后,放化纯度>99%,回收率>47%.125I-SM03的生物活性与未标记抗体差异没有显著性,P=0.907.用125I-SM03筛选CD22抗原表达量最多的细胞,在Raji、Daudi和Ramos细胞中,SM03与Ramos细胞的特异性结合量最多,每个细胞的结合量为1.3 pmol.以上结果表明,Indogen法可以用于单克隆抗体SM03的标记,标记后不影响SM03的生物活性.     

胰岛素免疫放射分析方法的建立

摘要：采用两株抗胰岛素单克隆抗体，一株包被聚苯乙烯试管作为固相抗体、另一株标记125I，建立了胰岛素测定的双抗体夹心免疫放射分析方法。其方法学灵敏度为2.8mIU/L；曲线范围5～160mIU/L；批内、批间变异系数分别小于5%、10%；回收率92.3％～112.6％；高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数0.996；39例健康人血清样品测定值为4.7～14.3mIU/L，该方法与胰岛素放射免疫分析法的相关性良好（r=0.981）。     

放射免疫分析与化学发光免疫检测应用对比及发展趋势

对比放射免疫分析技术（RIA）与化学发光免疫检测技术（CuA）在医学诊断中的发展和应用，结合RIA与CLIA免疫分析技术在临床应用情况，分析两种技术的发展现状、检测水平，并展望发展前景。RIA与CLIA均具有较高的精密度和灵敏度。RIA检测品种广泛、覆盖率高、种类齐全，适用于临床、科研教学，且收费标准低，可减轻患者经济负担，今后仍是重要发展方向之一。CLIA操作简便快速，无污染，仪器能实现自动化，具有一定竞争力。在相关政策扶持及本身技术改进的基础上，RIA将迎来快速发展时期。     

碘[~(131)I]爱克妥昔单抗注射液免疫反应活性的分析方法

研究建立了碘[~(131)I]爱克妥昔单抗注射液免疫反应活性检验分析方法。用活细胞结合百分数法,对细胞选择、反应时间、反应温度和分离方法进行研究,并应用该方法分析爱克妥昔单抗注射液免疫活性的稳定性及批间变异系数。结果表明:选择CEA表达阳性的LS180活细胞,反应时间为16h,反应温度为4℃,分离方法为直接分离法。该方法批间变异系数小于10%,重复性好,可以用于分析碘[~(131)I]爱克妥昔单抗注射液的免疫反应活性。     

恩诺沙星单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

采用抗恩诺沙星单克隆抗体建立酶联免疫吸附法（ELISA）用以检测恩诺沙星在动物源性食品中的残留。经方法学鉴定,本方法的检测范围为0．5～50μg／L,灵敏度为0．2μg／L,批内变异系数〈10％,批间变异系数〈20％。鸡肉、鱼肉、虾和蜂蜜样品的回收率分别为95．5％～107．5％、80．0％～101．3％、105．7％～122．7％和93．3％～111．3％。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。