重组α_(2b)型人干扰素工程菌菌种稳定性试验

重组α2b型人干扰素 (rIFN 2b)PBV889/JM10 3工程菌菌株传 10 0代后 ,经一系列检定表明 ,干扰素表达水平、质粒性状及其遗传稳定性、染色特性、菌落形态、电镜检查及其他理化特性均与原始菌种差异无显著意义 ,且无支原体及其他微生物污染 ,因此仍可作为生产用菌种     

重组人干扰素α2b栓剂的检定及其临床疗效

目的对重组人干扰素α2b栓剂进行质量检定及临床疗效观察。方法连续试制3批样品,进行各项质控指标的检定及宫颈糜烂的临床疗效观察。结果本品各项检定指标均符合质量要求。治疗组宫颈糜烂的有效率为74·8%,对照组的有效率为60·0%。治疗组和对照组的副反应发生率分别为9·1%和8·3%。结论重组人干扰素α2b栓剂质量稳定,安全性好,疗效确切。     

重组人干扰素α_(2a)软膏剂的检定及其临床疗效观察

目的　对重组人干扰素α2a软膏的质量进行检定及临床疗效观察。方法　连续试制 3批样品进行稳定性试验及生殖器疱疹的临床疗效观察。结果　本品性质稳定 ,2～ 10℃保存 18个月生物学活性无明显下降 ,其他各项检定指标均符合质量要求。生殖器疱疹的临床疗效观察 ,治疗组有效率为 85 .72 % ,对照组的有效率为 6 5 .2 7% ,差异有显著意义。结论　该制品生产工艺稳定 ,疗效确切 ,安全性好     

重组人干扰素α2b脂质体乳膏的抗病毒作用及毒理学研究

目的观察重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)脂质体乳膏的抗病毒及毒性作用。方法采用体外和体内抗病毒试验以及大鼠急性和长期毒性试验,检测rhIFNα2b脂体乳膏的抗病毒及毒性作用。结果rhIFNα2b脂质体乳膏对单纯疱疹病毒和水痘疱疹病毒均有明显的抑制作用。在大鼠试验中,10000倍临床剂量用药后1周以及4000倍临床剂量用药后4周,均未出现毒性反应。结论rhIFNα2b脂质体乳膏用于治疗病毒性疱疹病是安全有效的。     

重组人γ-型干扰素单克隆抗体的鉴定

5株小鼠杂交瘤细胞ID5、1C10、1C11、3H9和6F8，所分泌抗重组人γ－型干扰素（rIFN－γ）单克隆抗体经双扩散试验证明其中4种为小鼠IgG1型，另一种为IgG2b型。用ELISA间接法测定小鼠腹水抗体效价为1：8000～1：128000。经免疫印迹试验证实5种单抗均能特异地识别rIFN－γ，其中1D5、3H9和1C11单抗对rIFN－γ具有中和活性，中和效价＞1：8000，用2种单抗建立的ELISA夹心法检测rIFN－γ，最低可测值为10．0ng／ml，且与白细胞介素－2，重组人α和β干扰素无交叉反应。     

重组人干扰素a2a软膏剂的检定及其临床疗效观察

目的 对重组人干扰素a2a软膏的质量进行检定及临床疗效观察。方法 连续试制3批样品进行稳定性试验及生殖器疱疹的临床疗效观察。结果 本品性质稳定，2～10℃保存18个月生物学活性无明显下降，其他各项检定指标均符合质量要求。生殖器疱疹的临床疗效观察，治疗组有效率为85．72％，对照组的有效率为65．27％，差异有显著意义。结论 该制品生产工艺稳定，疗效确切，安全性好。     

卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液模拟使用的稳定性

目的评价卡式瓶多剂量包装重组人干扰素α2b注射液使用过程中的稳定性。方法将3批重组人干扰素α2b注射液装入配套使用的多剂量可重复使用注射笔中,安装胰岛素针头,每天模拟注射过程后分别存放于2~8、(25±2)和(37±2)℃条件下,并分别于0、7、21、35 d,0、3、5、7 d,0、2、4 d取样,依据《中国药典》四部(2015版)和《重组人干扰素α2b注射液制造和检定规程(暂定)》规定,进行外观、可见异物、pH、生物学活性、渗透压、细菌内毒素、间甲酚、无菌检测。结果 3批重组人干扰素α2b注射液模拟使用过程中,于2~8、(25±2)和(37±2)℃分别放置35、7和4 d,外观、可见异物、pH、生物学活性、渗透压、细菌内毒素、间甲酚、无菌检测结果均符合本品相关质量标准规定,且各项检测指标的检测结果均与初始检测结果接近,几乎无变化。结论本品模拟使用过程中即使破坏包装,于2~8、(25±2)和(37±2)℃条件下仍可分别稳定存放至少35、7和4 d。本研究为本品使用过程中的存放条件及相应存放条件下的存放时限确定提供了数据支持。     

重组人干扰素α-2b重点专利及重要申请人技术发展分析

重组人干扰素α-2b具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节的作用,在临床上被广泛应用。本文以重组人干扰素α-2b的专利文献为基础,对该领域涉及的关键技术和重点专利进行了梳理,并重点综述了首次向市场推出重组干扰素α-2b产品的先灵公司(Schering)的技术发展路线,旨在为该领域的研发提供参考。     

重组人干扰素α2b阴道泡腾片抗豚鼠单纯疱疹病毒性阴道炎的疗效

目的观察重组人干扰素α2b阴道泡腾片对单纯疱疹病毒性阴道炎动物模型的疗效。方法采用单纯疱疹病毒感染建立豚鼠实验性阴道炎模型,并分别用重组人干扰素α2b阴道泡腾片600、3 000和15 000 IU/只进行治疗。以阿昔洛韦(无环鸟苷)和干扰素α2b栓剂15 000 IU/只作为对照。对治疗前后豚鼠阴道外观及组织切片进行评分。结果应用重组人干扰素α2b阴道泡腾片对豚鼠实验性单纯疱疹病毒性阴道炎进行治疗后,豚鼠阴道外观病变与组织切片病变评分均显著降低,其中15 000 IU/只效果最好。同样剂量的α2b泡腾片药效优于栓剂。结论重组人干扰素α2b阴道泡腾片对实验性单纯疱疹病毒性阴道炎有明显的疗效。     

重组人干扰素α_(2b)工程菌的生物学特性检测

目的 观察和了解重组人干扰素α2b（以下简称rhIFN-α2b）工程菌的生物学性质,保证产品质量稳定。方法 通过对rhIFN-α2b工程菌的微生物学、分子生物学和免疫学检测,全面了解工程菌的性质。结果rhIFN-α2b工程菌呈现典型的大肠杆菌形态,在甘油中可以贮存1年,在冻干条件下可以保存2年,其生物学特性比较稳定。结论 rhIFN-α2b工程菌生物学特性稳定不变。     

重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎临床研究

目的评价重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎患者的临床疗效和安全性,探讨两者联合治疗的协同作用。方法治疗组服用阿德福韦10mg,每天1次口服。重组干扰素α-2b注射液500万单位,每周2次,皮下注射。对照组单用阿德福韦10mg,每天1次口服,疗程均为6个月。结果治疗满6个月后,治疗组和对照组ALT复常率差异无显著性意义;HBeAg/抗HBe血清转换率HBVDNA转阴率差异有显著性意义,停药随访6个月后,2组ALT复常率、HBeAg/抗HBe血清转换率HBVDNA转阴率差异有显著性意义。结论重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎疗效优于单一用药,是慢性乙型肝炎患者安全有效的治疗方法。     

聚乙二醇-重组人干扰素α2b结合物冻干保护剂的筛选

目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂。方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和生物学稳定性,筛选最佳保护剂配比。结果通过6～12个月的试验,证实该冻干制剂外观、pH无明显改变,但再溶解速度略慢于以人血白蛋白作保护剂的冻干制剂;采用15mmol/L精氨酸+10mmol/L谷氨酸+4%甘露醇+1%蔗糖/海藻糖的冻干保护剂配方,在4℃和25℃放置12个月后,抗病毒活性仍较好,相当于人血白蛋白的冻干保护效果。结论已筛选出不含人血白蛋白的PEG-rhIFNα2b结合物的冻干保护剂。     

重组人干扰素α2b凝胶联合阿昔洛韦对带状疱疹的疗效

目的观察重组人干扰素α2b凝胶联合阿昔洛韦治疗带状疱疹的疗效。方法将122名带状疱疹病人随机分成2组:联合组62名,将重组人干扰素α2b凝胶直接涂在患处,每日4次,同时口服阿昔洛韦片,0.2g/次,每日5次,疗程10d;单一组60名,只使用重组人干扰素α2b凝胶,用法、疗程同上。观察重组人干扰素α2b凝胶单独使用及联合阿昔洛韦对带状疱疹的疗效。结果联合组和单一组的总有效率分别为88.71%和73.33%,两组间比较,差异有显著意义;联合组平均起效时间(止疱时间、水疱干涸时间、疼痛缓解时间和痊愈时间)均较单一组短,差异有极显著意义;联合组用药后不良反应轻微。结论重组人干扰素α2b凝胶联合阿昔洛韦对带状疱疹有明显的疗效。     

复方干扰素合剂抗鼻病毒的研究

为了进一步确定黄芪、干扰素对防治感冒的效果,用人α2b型基因工程干扰素和黄芪组成复方干扰素合剂,以14、39型鼻病毒为模型,在不同人二倍体细胞培养上研究复方干扰素合剂的抗鼻病毒作用。结果表明,0.3％的黄菌注射液对人α2b型基因工程干扰素抗14型和39型鼻病毒确有协同作用,可以提高干扰素抗鼻病毒感染的能力达1．5倍左右。经与VSV病毒对比试验,证明鼻病毒对人α2b型基因工程干扰素的抗病毒作用是很敏感的。复方干扰素合剂在4、22和37℃存放18个月后．抗病毒滴度未见明显下降。如采用10万单位干扰素与黄芪组成合剂,可以产生25万单位干扰素治疗感冒的效果,这与志愿者攻击试验的所用剂量相当。     

聚乙二醇修饰重组人IFNα_(2b)体外理化性质的初步研究

目的 分析聚乙二醇（PEG）化学修饰重组人IFNα2b（PEC-IFNα2b）的体外理化性质,并与修饰前IFNα2b进行比较。方法 将IFNα2b与PEG-IFNα2b进行胰酶消化和56℃保温实验,不同时间取样测其抗病毒活性。IFNα2b的抗体与IFNα2b和PEG-IFNα2b做双相琼脂扩散。结果 修饰后的IFNα2b的抗胰蛋白酶降解及抗热能力均明显优于未修饰的IFNα2b,抗原性亦明显下降。结论 对PEG-IFNα2b的体外理化性质进行初步分析,为研究和开发长效干扰素提供理论依据。     

干扰素α2b基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建干扰素α2b(IFNα2b)基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达。方法从DH5α-pbv220-IFNα2b工程菌中扩增IFNα2b基因片段,克隆入psv-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒psv2-dhfr-IFNα2b,转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的单克隆细胞株。采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFNα2b的抗病毒活性;提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定。结果重组真核表达质粒psv2-dhfr--IFNα2b经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;转染后的重组细胞表达的IFNα2b具有抗病毒活性,且活性较强;以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFNα2b基因条带。结论已成功构建IFNα2b基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达了具有生物学活性的IFNα2b蛋白,为进一步对IFNα2b进行真核表达的研究奠定了基础。     

首批重组人干扰素α2b活性测定国家标准品的研制

目的研制首批重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)活性测定国家标准品。方法按《中国药典》三部(2010版)相关要求,进行rhIFNα2b活性测定标准品的制备、检验,以rhIFNα2b国际标准品为标准进行协作标定,并使用热加速试验进行稳定性考察。结果制备的rhIFNα2b活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为0.6%,分装精度为0.3%;经5个实验室协作标定共25次,几何平均生物学活性为4.27×105 IU/支,平均生物学活性的95%置信区间为4.13×105~4.42×105 IU/支,单次测定的95%参考值范围为3.65×105~5.00×105 IU/支,平均可信限率为3.32%;在-20℃下,生物学活性降低10%需19.6年,稳定性较高。结论该批rhIFNα2b活性测定标准品各项指标均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求,已被批准为国家标准品,规格为:4.27×105 IU/支。     

α2b—基因工程干扰素发酵培养基的优化

以LB和M9培养基为基本成分，运用均匀设计方法对α2b—基因工程干扰素发酵培养基的组成和配比进行了优化。所得适宜工程菌PBV321／BMH—71—18生长和rIFN—α2b表达的发酵培养基，经摇床培养，rIFN－α2b表达水平为5．0×105IU／ml培养液，分别是LB和LB＋M9培养基表达量的6倍和3倍。     

应用pET系统表达rhIFN-α2b基因的研究

目的 以构建的pET28a为表达载体,探讨人 IFN-α2b基因在pET系统中的表达。方法 合成引物,通过PCR扩增人 IFN-α2b基因并引入点突变,在不改变天然 IFN-α2b氨基酸序列的前提下,使原 IFN-α2b基因4个大肠杆菌稀有密码子改变为偏爱密码子,在起始密码子后,编码前16个氨基酸的碱基序列均成为大肠杆菌的偏爱密码子。将PCR产物次级克隆人pET28a载体,构建重组表达载pET28a-IFN-α2b。筛选正确的重组表达质粒pET28a-IFN-α2b转入感受态表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,粗提并检测 IFN-α2b活性。结果 重组质粒pET28a-IFN-α2b在宿主菌 BL21(DE3)中表达出的rhIFN-α2b以可溶性蛋白形式存在于粗提上清液中,与原来 pBV889系统表达的干扰素相比,具有更高的生物学活性。结论 应用pET表达系统可表达出具有更高生物学活性的rhIFN-α2b蛋白。     

医药信息

我国最大基因工程生产基地投产 拥有年产重组人干扰衰3 000万支能力的中国最大基因工程生产基地,日前在长春投产。该基地是长春生物制品研究所生物制药开发的一部分,旨在建设国内品种最全的基因工程产品生产中心。初期投放市场的产品包括重组人干扰素α2a、重组人干扰素α2b、重组人干扰素α1b滴眼液、重组人干扰素α2a栓剂、白细胞介素-2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子6个品种共11个剂型。