聚合酶链式反应技术检测化妆品中的铜绿假单胞菌

利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有铜绿假单胞菌基因组的样品中得到条带;对染菌样品的扩增结果显示,可以在原样品的活菌浓度为6 cfu.mL-1时通过增菌12 h后检出。     

铜绿假单胞菌RhlR抗血清制备

目的在原核系统中表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1的调控蛋白RhlR,制备兔抗RhlR抗血清。方法构建重组表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR并转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达GST-RhlR和His-RhlR蛋白,经GST或Ni~(2+)亲和层析纯化重组蛋白。将His-RhlR蛋白免疫新西兰大白兔,制备RhlR抗血清,GST-RhlR蛋白包被ELISA板,检测效价。结果构建的表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;构建的工程菌表达的目的蛋白His-RhlR和GST-RhlR相对分子质量分别为29 000和54 000,表达量均约占菌体总蛋白的85%,纯度大于90%。制备的RhlR抗血清效价可达1∶80 000。结论获得高效价的RhlR抗血清,为PA中rhl调控系统的研究奠定基础。     

铜绿假单胞菌降解异丁醛的分析研究

随着微生物技术的发展,通过微生物技术治理工业生产中的“三废”已经成为未来行业发展的主流趋势。本文就微生物降解异丁醛过程开展了合理的分析,并对微生物体系进行了16-SrDNA检测,结果表明该体系中含有大量铜绿假单胞菌,可以利用碳源形成多糖类生物膜。综上所述,本文对铜绿假单胞菌在挥发性有机化合物降解中起到的作用进行合理的分析与研究。     

铜绿假单胞菌次生代谢产物的研究进展

铜绿假单胞菌可产生多种具有活性的次生代谢产物。综述了铜绿假单胞菌次生代谢产物的种类、提取方法、合成方法、作用机制及用途,指出了研究中存在的问题,展望了未来的发展方向,拟为铜绿假单胞菌次生代谢产物的科学研究提供参考。     

1株鸵鸟铜绿假单胞菌的分离鉴定与进化树分析

目的对内蒙古自治区通辽市某养殖场幼龄鸵鸟致死的致病菌进行分离鉴定与进化树分析。方法无菌采集幼龄病死鸵鸟的内脏,进行细菌分离培养。将分离菌株进行小鼠致病性试验、生化鉴定及药物敏感性试验,并对其进行16S r RNA基因测序,选取比对结果同源性相近的20条序列进行系统进化树分析;PCR扩增ExoT、ExoU、ExoY、ExoS 4个毒力基因,分析分离菌株毒力基因携带情况。结果经细菌形态学鉴定、16S rRNA基因序列Blast比对、BD PhoenixTM100全自动微生物鉴定和药敏系统及部分毒力基因PCR检测得出,该致病菌为铜绿假单胞菌。3种毒力基因ExoT、ExoY、ExoS在该致病菌中被检测,未携带ExoU基因;该菌对环丙沙星、庆大霉素和莫西沙星等13种药物敏感,对头孢唑啉和氯霉素等7种药物耐药。系统进化树分析表明,分离菌株与铜绿假单胞菌中国湖南株(EU915713.1)和中国四川株(KY962357.1)遗传距离最近,并命名为TLTL1。结论该致病菌经鉴定为铜绿假单胞菌,为一种条件致病菌。本研究对铜绿假单胞菌的鉴定及用药提供了参考。     

铜绿假单胞菌外毒素A在生物制药中应用的研究进展

铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)是该菌分泌的外毒素之一,通过催化细胞延伸因子2(elongation factor-2,EF-2)的ADP核糖基化,抑制蛋白合成,从而导致细胞死亡,在铜绿假单胞菌导致的感染性疾病中发挥重要作用。PEA强烈的细胞毒性特点使得该毒素成为免疫毒素的重要成分之一,已广泛应用于肿瘤的靶向治疗中。此外,由于PEA可与抗原提呈细胞表面的α₂巨球蛋白受体结合,通过胞饮作用进入胞内,辅助抗原的处理和提呈,可作为分子佐剂应用于各种疫苗的研发。本文对PEA在免疫毒素及疫苗佐剂方面应用的研究进展作一综述。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A含量SDS-PAGE检测方法的建立及验证

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA)含量的SDSPAGE法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋白在待测样品中的含量。对建立的方法进行专属性、准确性和重复性验证,确定检测范围,并用建立的方法检测r EPA宿主湿菌体中r EPA发酵产量及r EPA宿主菌休克液柱层析纯化样品中r EPA含量。结果 r EPA含量在100~600μg/ml范围内与其对应条带的光密度值具有良好的相关性,决定系数在0.97以上。大肠埃希菌固有组分及纯化过程中常用的添加物对r EPA含量检测均未产生明显影响,专属性较好;用建立的方法检测500、300、150μg/ml r EPA样品10次的回收率分别为(102.32±4.18)%、(102.77±4.94)%和(95.04±16.41)%,CV值分别为4.08%、4.81%和17.27%。各批r EPA发酵产量为250~500 mg/L,三步柱层析纯化后,r EPA总回收率约为50%。结论建立了测定r EPA含量的SDS-PAGE法,该方法专属性、准确性和重复性良好,为r EPA生产工艺的优化奠定了基础。     

铜绿假单胞菌norB基因的克隆及表达

为使norB基因得到有效表达,利用分子生物学技术将铜绿假单胞菌B136-33的norB基因克隆至表达载体pET-28a上。首先,根据GenBank公布的norB基因序列及表达载体pET-28a上的多克隆位点进行引物(含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点)设计;然后以B136-33基因组为模板,扩增目的片段norB;产物经双酶切克隆至pET-28a后,化学转化至克隆菌DH5α,得到含有重组质粒的转化子DH5α-pET-28a-norB;再经双酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pET-28a-norB转化至表达菌BL21;最后,用SDS-PAGE鉴定norB基因表达产物的分子量。结果表明,norB能在BL21中得到正确有效的表达。     

铜绿假单胞菌WJ-1降解原油特性

从蒙古林油藏地层水中筛选和驯化得到一株兼性厌氧烃降解菌WJ-1,经生理生化测试和16S rDNA鉴定该菌株为铜绿假单胞菌。为了研究菌株WJ-1降解原油的性质,利用该菌株对新疆、中岔口、大庆江桥、蒙古林等油田的不同黏度的原油进行了微生物降解实验,分析了微生物降解作用对原油饱和烃、芳烃、非烃以及胶质和沥青质等组分在原油中相对含量、组成和结构的影响。原油棒薄层分析结果表明：微生物作用引起原油性质发生明显变化,各原油中胶质、沥青质、非烃类含量均降低10%以上;气相色谱分析结果表明：原油饱和烃中轻组分含量相对增加,重组分含量相对减少;芳香烃中的菲组分相对减少。黏度和凝固点分别平均降低45%和6℃,原油的流动性增强。多孔介质中的物理模拟实验表明：在不同黏度原油(新疆、中岔口、大庆江桥、蒙古林)的驱油实验中,菌株WJ-1能在空白水驱的基础上分别提高原油采油率4.78%、5.15%、7.39%、相似文献   

包装饮用水中铜绿假单胞菌检测方法的比较分析

近几年随着生活节奏的加快,包装饮用水的消费量逐年增高,但其中铜绿假单胞菌的检出率较高,且危害性较大,因此包装饮用水中的铜绿假单胞菌检测至关重要.本文基于现阶段实验室所采用的细菌检测手段,阐述了生化水平、基因序列、蛋白指纹图谱等6类铜绿假单胞菌的检测方法,旨在对铜绿假单胞菌的快速分离及准确鉴定提供参考,从而更好地保障饮水...     

菌落PCR技术检测化妆品中金黄色葡萄球菌

利用菌落PCR技术,以金黄色葡萄球菌的特有基因femA为靶基因,选择特异引物．进行扩增,鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有金黄色葡萄球菌基因组的样品中得到条带。     

铜绿假单胞菌与秀丽隐杆线虫互作研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于革兰氏阴性杆菌,对人和动物具有潜在致病性。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）是一种以大肠杆菌为食的微小模式生物。铜绿假单胞菌与秀丽隐杆线虫互作模型常用于研究铜绿假单胞菌对宿主损害机制及宿主应对铜绿假单胞菌侵染的策略。本文从铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫侵染和宿主应对策略这两个角度进行综述,以期为研究铜绿假单胞菌致病机制及筛选治疗其引发疾病的治疗思路提供参考。     

铜绿假单胞菌对映选择性降解制备R-扁桃酸

以外消旋扁桃酸为唯一碳源,从土壤中筛选得到一株选择性降解S-扁桃酸的铜绿假单胞菌,可用于选择性降解S-扁桃酸制备R-扁桃酸。考察了温度、pH值、底物浓度等因素对S-扁桃酸降解的影响,并对发酵培养基成分及转化条件进行了优化。结果表明,在35℃、pH值8.0、底物浓度131.4 mmol.L-1的优化条件下,68 h发酵完成,R-扁桃酸收率为48.2%、光学纯度为99.2%。     

脑外科重症病房铜绿假单胞菌感染暴发原因分析及控制

2008年12月19日在对检验科病原体登记本上发现,自2008年12月6日至2008年12月19日脑外科痰培养中有5例患者均报告铜绿假单胞菌培养阳性,并且这5例患者均在脑外科设置的重症患者统一管理的重症病房,流行病学调查结果如下。     

铜绿假单胞菌分泌鼠李糖脂能力对原油降解影响的研究

研究了铜绿假单胞菌分泌鼠李糖脂能力对原油生物降解的作用.将保存在原油中的铜绿假单胞菌转接至甘油培养基进行继代培养,观察到各继代培养下鼠李糖脂分泌量越高则该发酵液对原油的乳化降解能力就越强,推测该菌产鼠李糖脂能力决定了该培养液对原油的乳化与降解程度.鉴于此,分别将鼠李糖脂提取液、发酵液加入到原油培养基中,观察其各自的原油乳化程度的变化趋势,发现鼠李糖脂本身可以乳化原油但不能降解原油,且其乳化能力不如去菌体的发酵液.去菌体发酵液能很快地乳化原油而同样不能降解原油.只有含菌体的发酵液既能乳化又能降解原油.因此,可以认为鼠李糖脂本身具有乳化原油的能力,但是由铜绿假单胞菌同时分泌的其它表面活性物质可能协同鼠李糖脂更好地乳化原油以促进微生物对原油的利用与降解.     

石榴皮与诃子联合制剂对铜绿假单胞菌抑菌作用的研究

目的:探讨石榴皮与诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的体外抑菌作用,为中药联合治疗临床上铜绿假单胞菌感染提供参考数据及实验依据。方法:采用杯碟法、常量稀释法和微量棋盘法,测量抑菌圈直径和石榴皮和诃子水煎剂单独的最小抑菌浓度(MIC),计算二者连用时的抑菌指数(FIC),分析石榴皮和诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的抑菌作用。结果:石榴皮与诃子单独制剂及联合制剂对铜绿假单胞菌有一定的抑菌作用。杯碟法结果显示,牛津杯周围可见明显的抑菌环,且抑菌环直径大小与药物浓度呈正比,其抑菌效果依次为:二者联合诃子石榴皮;常量稀释法和微量棋盘法结果显示,石榴皮水煎剂MIC为250 mg/mL;诃子水煎剂MIC为62.5 mg/mL,FIC为0.25。结论:石榴皮与诃子单独水煎剂对铜绿假单胞菌均有一定的抑菌作用,且抑菌效果强度与药物浓度呈正比;二者联合后彼此为协同效应,提示二者联合后可提高对铜绿假单胞菌的抑菌效果。     

铜离子和土壤腐植酸对铜绿假单胞菌生物降解十溴联苯醚的影响

正铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是具有降解十溴联苯醚(BDE-209)能力的良好的环境微生物,本文研究了Cu~(2+)和从被电子垃圾污染的土壤提取的腐植酸对铜绿假单胞菌生物降解BDE-209的影响,同时研究了腐植酸对Cu~(2+)的吸附等温线、天然酶活性、细胞的表面形态、生物     

长江下游某地区饮用水中铜绿假单胞菌的赋存特征

针对长江下游某地区饮用水中铜绿假单胞菌的含量进行排摸,比较2020年1月—2022年12月铜绿假单胞菌的检测平均值,水源地Q取水与输水中铜绿假单胞菌的含量明显高于水源地C。水源地Q取水中铜绿假单胞菌平均含量达420.5MPN/(100 mL),输水中达242.0 MPN/(100 mL);水源地C取水中铜绿假单胞菌平均含量达201.4 MPN/(100 mL),输水中达82.5MPN/(100 mL)。水源地Q相关联水厂N进水铜绿假单胞菌均值含量远高于水源地C相关联水厂T进水的含量,其检测结果分别为232.1、2.1 MPN/(100 mL);水厂N进水铜绿假单胞菌的检出率达58.3%(7/12)、水厂T进水铜绿假单胞菌的检出率达50%(6/12),与水源地输水铜绿假单胞菌含量和检出率相比,显著降低。进水经给水厂处理后,水厂N、水厂T出水铜绿假单胞菌均未检出。与其他季节相比,在气温较高时(每年7月—10月),水源地铜绿假单胞菌含量显著增高,并有逐年最高值递增的趋势,当气温较高时,进水中铜绿假单胞菌含量也存在高值,建议在高温时期对铜绿假单胞菌进行持续监测。