蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性研究

目的:通过蜜环菌水溶性多糖对·OH、O2-·和DPPH·三种自由基清除作用,评价其抗氧化性能,为蜜环菌药物制剂的活性研究及其产品的质量检测标准提供重要参考。方法:经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,以抗坏血酸和TBHQ为对照,采用分光光度法评定其抗氧化特性。结果:蜜环菌水溶性多糖对三种自由基均有不同程度的清除活性,对三种自由基的清除能力是DPPH·>·OH>O2-·,当清除率达到90%以上时,清除DPPH·、·OH和O2-·的所需的多糖浓度分别为1.0、5.0、6.0mg·mL-1,蜜环菌多糖的清除能力显著。结论:蜜环菌水溶性多糖在体外具有较明显的抗氧化活性,在实验浓度范围内,抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。作为一种重要的天然活性物质,蜜环菌多糖的抗氧化活性和抗衰老作用将具有较高的应用价值。     

蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性研究

目的:通过蜜环菌水溶性多糖对·OH、O2-·和DPPH·三种自由基清除作用,评价其抗氧化性能,为蜜环菌药物制剂的活性研究及其产品的质量检测标准提供重要参考。方法:经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,以抗坏血酸和TBHQ为对照,采用分光光度法评定其抗氧化特性。结果:蜜环菌水溶性多糖对三种自由基均有不同程度的清除活性,对三种自由基的清除能力是DPPH·>·OH>O2-·,当清除率达到90%以上时,清除DPPH·、·OH和O2-·的所需的多糖浓度分别为1.0、5.0、6.0mg·mL-1,蜜环菌多糖的清除能力显著。结论:蜜环菌水溶性多糖在体外具有较明显的抗氧化活性,在实验浓度范围内,抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。作为一种重要的天然活性物质,蜜环菌多糖的抗氧化活性和抗衰老作用将具有较高的应用价值。      

固体发酵蜜环菌多糖提取工艺的研究

研究了从固体发酵蜜环菌菌丝体中提取水溶性多糖的工艺。通过比较,证明了冷冻能提高多糖的提取效率;通过单因素实验,确定水溶性多糖的提取工艺;正交试验进一步优化提取工艺：即浸提时间2．5h、浸提90℃、固液比1：5为最佳提取条件。     

蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究

进行了蜜环菌胞外多糖分离纯化及性质的研究，得到如下结果：发酵液浓缩，三们体积乙醇沉积，75％乙醇洗涤、Sevage法除蛋白、20％H2O2脱色，得到的多粗多糖上DEAE－纤维素（OH^-）柱层析，用蒸馏水、0．05－0．5mol/l的NaCl梯度洗脱，可以得到中性多糖和几种酸性多糖，中性多糖上SephadexG-150柱层析，用蒸馏水洗脱得到一种多糖A，多糖A显纯多糖，400－4000cm^-1范围内摄得多糖A的红外光谱表明其含有β－糖苷健。多糖A的完全酸水解液用硅胶GF254薄层层析，氯仿－甲醇（60：40）与丙酮－水（96：4）展层，以及纸层析，丙酮－水（96：4）展层，苯胺－二胺显色，证明其组成单糖为葡萄糖，考马斯亮兰G－250反应阴性，茚三酮反应阴性，双缩脲反应阴性，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，考马斯亮兰R－250染色无蛋白质带，都证明其不含蛋白质。     

假蜜环菌胞内多糖的发酵研究

对假蜜环菌进行发酵条件的优化,确定其最适培养基为葡萄糖3g/L,蔗糖7g/L,蛋白胨5g/L,酵母膏3g/L,K2HPO40.1g/L,KH2PO4 0.5g/L,MgSO4 0.5g/L,pH6.4。最适培养条件为27℃培养5d,通气量为(200mL培养基/500mL三角瓶),160r/min。在最适培养基及培养条件下,假蜜环菌胞内多糖的产量可达298.35mg/L,菌体生物量可达314.3g/L。     

蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究

进行了蜜环菌胞外糖分离纯化及性质的研究，得到如下结果：发酵液浓缩，三倍体积乙醇沉淀、75%乙醇洗涤、Sevage法除蛋白、20%H2O2脱色，得到的粗多糖上DEAE-纤维素（OH^-）柱层析，用蒸馏水、0.05-0.5mol/L的NaCl梯度洗脱，可以得到中性多糖和几咱酸性多糖。中性多糖上SephadexG-150柱层析，用蒸馏水洗脱，得到一种多糖A，多糖A为纯多糖。在400-4000cm^-1范围内摄得多糖A的红外光谱清明其含有β-糖苷键。多糖A的完全酸水解液用硅胶GF254薄层层析，氯仿-甲醇（60：40）与丙酮-水（96：4）展层，以及纸层析，丙酮-水（96：4）展层，苯胺-二苯胺显色，证明其组成单糖为葡萄糖。考马斯亮兰G-250反应阴性、茚三酮反应阴性、双缩脲反应阴性，聚丙烯酰胺凝胶电泳后、考马斯亮兰R-250染色无蛋白质带，都证明其不含蛋白质。     

蜜环菌多糖提取工艺的优选

探讨采用热水浸提法和超声波提取法提取蜜环菌多糖的工艺条件。研究结果表明:水提法的最佳工艺参数为:料液比1:50,温度40℃,提取时间6h。此条件下,得率为5.96%;超声波提取法的最佳工艺参数为:料液比为1:30,功率为360W,超声35min,超声提取的得率为5.38%。由此可知,热水浸提法优于超声波提取法。     

蜜环菌多糖生产培养基的研究

进行了蜜环菌深层发酵产胞外多糖的培养基的研究,研究结果表明：以豆粕粉作氮源时,菌丝得率最高,以麸皮作氮源时,多糖产量最高;红薯粉为蜜环菌菌丝生长和多糖产量的最适碳源,最适培养基配方为：红薯粉3%,葡萄糖1%,豆粕粉1.5%,KH2PO40.15%,机械搅拌对菌丝的生长和多糖的产生都不利;接种后当即上摇床比接种后静置一段时间再上摇床的菌丝干重及多糖含量都多;培养基中加1%的乙醇对菌丝的生长和多糖的产生都不利;600ml发酵试验中,发酵液多糖含量可达0.485mg/ml,菌丝干重可达20.8g/L。当发酵液pH降为5.0左右,颜色开始变为棕褐色,菌丝亮光由强变弱时,即可终止发酵。     

固态发酵生产蜜环菌饮料

以蜜环菌固态发酵物为原料制得一种蜜环菌饮料。以蜜环菌固态发酵物为原料,提取其中的多糖等营养和药效成分,进行风味调配,通过正交试验和感官评价的方法确定蜜环菌饮料的配方。该发酵饮料的培养基配方为:白砂糖1.5%,大米80%,黄豆1%,麸皮10%,红薯7.5%;饮料配方为:蜜环菌发酵液添加比例为30%、白砂糖为20 g/L、柠檬酸0.6 g/L、黄原胶0.2 g/L,测得成品饮料中各成分的含量为:多糖0.049 mg/mL,还原糖0.042 mg/mL,蛋白质53.0 mg/mL,氨基酸1.226 mg/mL。饮料的感官指标、理化指标和微生物指标均达国家标准。     

蜜环菌对硒的富集及多糖中硒的分布

采用不同的硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了蜜环菌对硒的积累和存胞内外多糖中的分布.结果表明:菌丝体硒含量与多糖硒含量随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量达到20mg/L后趋于稳定,胞内多糖的硒积累量达到10mg/L后趋于稳定,而胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势.     

灵芝菌液体发酵玉竹产水溶性多糖的工艺优化和抗氧化性研究

为探究灵芝菌发酵玉竹产水溶性多糖工艺及多糖的抗氧化能力,该研究利用灵芝菌液体发酵玉竹,以多糖提高率为评价指标,通过单因素试验及响应面试验对其发酵工艺进行优化,并测定发酵前后多糖的抗氧化能力。结果表明,最佳发酵条件为玉竹添加量6%、豆粕添加量为2%、KH₂PO₄添加量0.15%、Mg SO₄·7H₂O添加量0.15%、接种量8.7%、发酵时间4 d及发酵温度30℃。在此优化条件下,发酵液多糖含量达到5.91 mg/m L,较未发酵的培养基(3.41 mg/m L)提高了73.48%。抗氧化试验表明,在相同浓度下,发酵后多糖(PAF)对比发酵前多糖(PBF)的ABTS+·、DPPH·、OH·清除率均有所提高。其中,PAF对DPPH和OH·的半抑制浓度(IC50)值分别为2.77 mg/m L、0.54 mg/m L,PBF对DPPH·和OH·的IC₅₀值分别为7.94 mg/m L、1.57 mg/m L。结果表明,PAF具有更强的体外抗氧化能力。     

高温大曲中高产四甲基吡嗪芽孢杆菌的分离鉴定及发酵条件优化

该研究从高温大曲中分离筛选产四甲基吡嗪（TTMP）芽孢杆菌,采用细胞形态学观察、生理生化试验及分子生物学技术对高产四甲基吡嗪菌株进行鉴定,并优化四甲基吡嗪产量最高菌株的发酵条件。结果表明,经初筛从高温大曲中分离出20株产四甲基吡嗪芽孢杆菌（编号为WH1～WH20）,经过复筛得到四甲基吡嗪产量较高的菌株WH7、WH10和WH20。其中菌株WH7和WH20被鉴定为副淀粉芽孢杆菌（Bacillus paramycoides）,菌株WH10被鉴定贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。菌株WH10的最佳发酵条件为：前发酵温度37℃、前发酵时间72 h,后发酵温度60℃,后发酵时间20 h,初始pH值6.5,铵盐添加量4 g/L。在此优化条件下,四甲基吡嗪产量为728.38 mg/L,比优化前提高了167%。     

发酵法制备鳕鱼皮胶原多肽菌种的筛选及工艺优化

从纳豆、酒曲、醋曲和海鱼胃肠道中共分离得到253株具有蛋白酶、脂肪酶等酶活力和产乳酸能力的菌株,从中选出7株具有较高酶活力和产乳酸能力的菌株,分别为2株细菌、1株霉菌、2株酵母、2株乳酸菌。通过单因素实验对发酵鳕鱼鱼皮的工艺条件进行了优化。发酵的最佳条件为:发酵温度为30℃,发酵培养基中鳕鱼皮:水的比例为1:0.5,接种量为6%,细菌:霉菌:酵母菌:乳酸菌的比例为3:1:1:2。     

产普鲁兰酶海单胞菌的分离鉴定及发酵条件优化

以普鲁兰糖为唯一碳源,利用平板涂布法从盐湖中分离到1株产普鲁兰酶的细菌YH-6,结合菌株形态特征和16S rRNA基因序列分析,确定该菌株为海单胞菌(Oceanimonas sp.)。通过单因素试验对发酵培养基以及发酵条件进行优化,优化后的培养基组分(g/L)为:玉米淀粉15.0,酵母膏10.0,KH_2PO_41.0,FeSO_4·7H_2O0.01,NaCl 26.5,MgCl_2·7H_O 2.1,KCl 0.9,CaCl_·H_2O 1.2,MgSO_4·7H_2O 4.2,pH 7.0;最佳培养条件为:发酵温度30℃,转速200 r/min,发酵时间为36 h。优化后的普鲁兰酶的活力可达1.85 U/mL,比优化前的1.28 U/mL提高了44.53%。     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

超声波辅助酶法提取榛蘑多糖

目的:为了研究榛蘑中多糖的提取条件,以榛蘑多糖得率为指标,采用超声波辅助复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶)法进行实验。方法:通过单因素实验研究了酶解温度、超声功率、超声时间、液料比、酶解时间、复合酶比例以及加酶量对榛蘑多糖得率的影响,在此基础上进行响应面优化实验。结果:通过单因素实验,确定了酶解温度50℃、超声功率360 W、超声时间20 min;通过响应面优化实验,确定了最佳提取条件:加酶量1.9%、复合酶比例2:1、酶解时间138 min、液料比30:1(mL/g)。结论:在此条件下,榛蘑多糖得率为40.56%。      

灵芝多糖液体发酵条件的优化和pH控制策略的研究

以韩国灵芝为发酵菌种,以灵芝多糖、菌丝干重为指标,研究了非营养因子对灵芝发酵的影响。通过单因素实验确立了摇瓶培养灵芝的最佳pH为6.0、装液量100mL/250mL、接种量10%和培养时间5d。在10L发酵罐中,恒定pH为4.19比恒定pH为5.0和分段控制pH为5.0和4.19灵芝多糖产量更高,达1.64g/L,菌丝干重为7.13g/L。     

一株醋酸菌的分离鉴定及冬枣醋发酵条件的优化

通过选择性培养方法从柿子醋醋醅中分离醋酸菌,筛选产酸能力优异的醋酸菌,进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学鉴定,并将菌株应用于冬枣醋的研制,采用单因素及正交试验优化其醋酸发酵条件。结果表明,筛选得到一株醋酸菌A1,其培养9 d产酸量为5.89 g/100 mL。菌株A1被鉴定为木醋杆菌（Acetobacter xylinum）。菌株A1制备冬枣醋最佳醋酸发酵条件为：初始酒精度9%vol,木醋杆菌A1接种量8%,发酵温度30 ℃。在此优化条件下,冬枣醋感官评分为91分,总酸含量（以醋酸计）4.76 g/100 mL,可溶性固形物含量1.5%,产品呈淡琥珀色,口味酸甜爽口,具有冬枣特有的果香,理化及微生物指标均符合国家相关标准。     

大秃马勃菌丝体多糖的发酵条件优化及其抑菌作用

采用单因素试验及正交试验对大秃马勃菌丝体多糖的液态发酵条件进行了优化。以细菌作为供试菌种,采用滤纸片法对提取的大秃马勃菌丝体多糖进行了抑菌实验。结果表明,大马勃液态发酵培养的最佳条件为发酵温度28 ℃,转速150 r/min,发酵时间8 d。在此最佳发酵条件下,菌体干质量为（7.08±0.51） g/L。抑菌实验结果显示,大秃马勃菌丝体多糖对革兰氏阳性菌有明显地抑制作用,并且随着多糖质量浓度的增大,抑菌作用越强。     

猪苓胞外多糖发酵条件的优化

以胞外多糖为评价指标,研究不同发酵条件对猪苓胞外多糖的影响。本试验采用了液体摇瓶培养的方法,在不同的温度、pH值、装液量和培养时间的条件下,测定猪苓发酵液中的胞外多糖,确定各单因素条件下猪苓胞外多糖的最佳发酵条件,再采用L9（34）正交试验设计优化其胞外多糖发酵条件,结果表明,猪苓胞外多糖发酵的最优条件为pH 5.0,装液量100mL,置于28℃的恒温培养箱培养9d,猪苓胞外多糖含量达到0.532g/100mL,说明通过优化发酵条件,可以有效提高猪苓菌丝体胞外多糖的分泌。