大豆球蛋白的水解研究

采用Nagano法从豆粕中分离大豆球蛋白,利用大豆蛋白改性酶解大豆球蛋白制备水解肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析大豆球蛋白水解肽的分子量分布。结果显示:在20 g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比10 000 U/g,温度55℃,pH8.0,水解时间4 h。优组合条件下的水解度为69.6%。大豆球蛋白水解肽主要为130 u～1 000 u的短肽,占肽总量的86.5%,说明大豆球蛋白水解肽的均一性极高。     

β-伴大豆球蛋白来源生物活性肽的研究进展

β-伴大豆球蛋白是大豆中的主要贮藏蛋白质，结构分析表明它是一种糖蛋白。本文阐述了以β-伴大豆球蛋白为基质酶解得到的具有免疫调节功能的糖肽和SOYMETIDE，以及具有抗氧化、降低胆固醇、调节胃肠道功能的活性肽研究状况，并对其今后研究发展方向作了展望。     

分离β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白工艺研究

采用大容量(250×4mL)低速(5300×g)离心机分离β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白,进行碱溶条件、酸沉条件等条件的研究。结果表明:提取蛋白的碱性溶液(pH8.5的Tris-HCl溶液)离心效果较佳,沉淀大豆球蛋白pH6.4为佳,沉淀β-伴大豆球蛋白pH4.8为佳,用pH5.0沉淀杂蛋白离心分离效果较好;每一个待离心的浊液,在离心之前4℃冷藏2h以上,对离心效果的提高十分有效;采用最佳条件,从300g脱脂豆片分离大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白,收率分别为6.8%和2.2%,用SDS-PAGE电泳实验方法测定大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白样品纯度分别为89.1%和78.9%。因此该低速离心法较适合数十克级别的β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白的分离。     

大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白对酶促聚集的影响

报道了大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白对酶促聚集的影响。两组分的枯草杆菌蛋白酶水解液均有聚集现象,但对大豆蛋白酶促聚集的贡献不同,其中β-伴大豆球蛋白对大豆蛋白酶促聚集的贡献较大,而大豆球蛋白对聚集过程的贡献较小,这主要是由于酶对大豆球蛋白的水解程度较低。      

大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的富集分离研究

以低温脱脂豆粕为原料,采用优化Nagano法分离大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白。本文系统考察提取过程中多个单因素对分离大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的蛋白质含量和提取率的影响。并根据单因素试验结果设计响应面试验,对浸提温度、浸提pH、沉淀剂用量进行优化,分别确定高提取率大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的分离条件。试验结果表明:大豆球蛋白的最佳提取条件为浸提温度44.4℃,浸提pH 8.5,CaCl220 mmol/L,提取率64.14%,纯度83.6%;β-伴大豆球蛋白的最佳提取条件为浸提温度49.5℃,浸提pH 8.6,CaCl_2 0.00 mmol/L,提取率40.15%,纯度82.9%。     

碱性蛋白酶对β-伴大豆球蛋白抗原性的影响

选用碱性蛋白酶处理大豆分离蛋白,间接竞争ELISA法测定水解物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,响应面法优化降低β-伴大豆球蛋白抗原抑制率的最佳工艺条件。结果表明,碱性蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,在一定程度上,水解度与β-伴大豆球蛋白抗原抑制率呈负相关关系。碱性蛋白酶在酶解时间40 min、加酶量3 000 U/g、温度55℃、p H 8.5条件下,β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为33.48%,比大豆蛋白降低了64.16%。SDSPAGE结果显示,β-伴大豆球蛋白基本被酶解成小分子量肽段。     

大豆β-伴球蛋白的功能特性分析

从6种优质大豆中提取了大豆β-伴球蛋白,SDS-PAGE电泳后均显示出6条谱带,并对它们的功能特性进行研究。研究表明：大豆β-伴球蛋白持水性为市售大豆分离蛋白的1.15～1.48倍,乳化性和乳化稳定性分别为市售大豆分离蛋白粉的1.04～2.35倍和1.21～4.27倍,溶解性为市售大豆分离蛋白粉的1.33～2.57倍,大豆β-伴球蛋白具有较好的功能特性。     

基于动力学分析β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白抑制淀粉酶活性机制

目的 探讨β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin,7S)和大豆球蛋白(glycinin,11S)对猪胰α-淀粉酶(porcine pancreaticα-amylase,PPA)的抑制动力学特征.方法 通过测定半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),结合...     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对双歧杆菌增殖的影响

大豆种子的贮藏蛋白主要由2种球蛋白组成,伴大豆球蛋白(conglycinin)是其中一种,它由3个不同的亚基组成。文中对伴大豆球蛋白进行了分离纯化,并研究了其体外经过胃蛋白酶水解后的肽对双歧杆菌增殖的影响。结果表明,分离纯化的伴大豆球蛋白纯度为90.13％,可供生理功能的研究,经胃蛋白酶水解后的肽能够促进双歧杆菌的增殖,表现出一定的生物活性作用。     

β-伴大豆球蛋白水解产物中糖肽的分离和鉴定

本研究对大豆蛋白水解产物中含糖的肽组分进行了分离和鉴定。从大豆蛋白中分离出相对纯度为75．5％、含糖量为3．23％的B．伴大豆球蛋白后，以β-伴大豆球蛋白为底物，用Alcalase进行酶解调制大豆肽。所得大豆肽SephadexG-25凝胶过滤，得到两个组分P1和P2，分子量较大P1含糖量为8．23％。用薄板层析对这一含糖的肽组分进行了鉴定，结果表明此含糖的肽为糖结合性肽。     

大豆β-伴球蛋白多肽抗氧化活性研究

以大豆β-伴球蛋白为原料,利用枯草芽孢杆菌进行发酵制备抗氧化肽,研究发酵时间和浓度对大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活性影响。结果表明,发酵40 h时,大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活力最高,抑制自由基能力最强;在此最佳发酵时间下,当大豆β-伴球蛋白肽浓度为1.6 mg/mL时,对羟自由基清除率最大;浓度为2 mg/mL时,对超氧阴离子自由基清除能力最强。     

EGCG与β-伴大豆球蛋白/大豆球蛋白相互作用对蛋白质结构的影响

采用荧光光谱、紫外-可见光谱、傅里叶变换红外光谱和分子对接方法,研究中性条件下β-伴大豆球蛋白（β-conglycinin,7S）、大豆球蛋白（glycinin,11S）与表没食子儿茶素没食子酸酯（(–)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG）的相互作用。结果表明,在中性条件下EGCG与7S/11S蛋白之间存在相互作用,并诱导了氨基酸残基微环境发生变化。EGCG通过动态和静态方式猝灭7S/11S蛋白内源荧光。与7S蛋白相比,EGCG对11S蛋白的亲和力更高。EGCG与7S/11S蛋白的反应自发进行,两者主要通过氢键和范德华力形成物质的量比1∶1的复合物。EGCG能够降低7S/11S蛋白的表面疏水性,并随着EGCG浓度的增加,11S蛋白变化更加明显。傅里叶变换红外光谱和分子对接研究表明除氢键外,疏水相互作用也参与了复合物的形成。EGCG结合导致7S/11S蛋白二级结构发生不同变化,使蛋白质发生解折叠。     

响应面优化低敏性大豆β-伴球蛋白喷雾干燥工艺研究

应用中心组合设计,采用响应面法,以干粉的乳化活性为考核指标,对喷雾干燥工艺参数进行优化,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定喷雾干燥的最佳条件为,料液浓度2.02 g/100 mL,进口温度为167℃,出口温度84℃。在此条件下,得到乳白色、均一且乳化活性高的大豆β-伴球蛋白粉产品。     

大豆β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的研究

本文研究了大豆β-葡萄糖苷酶的提取、酶学性质以及其水解大豆异黄酮糖苷能力.该酶反应的最佳温度为45℃,最佳pH为5.00;在pH值为5.00～7.00时和低于40℃较稳定;70℃时酶活性基本全部丧失.初步纯化的大豆β-葡萄糖苷酶具有较高的水解大豆异黄酮糖苷能力.     

透明质酸-大豆β-伴球蛋白涂膜对微冻鲤鱼的保鲜效果

目的 研究不同比例透明质酸和大豆β-伴球蛋白复合膜处理对鲤鱼肉微冻贮藏品质的影响。方法 用浓度为0.9%的 HA分别和1%、2%、3%大豆β-伴球蛋白配制三种涂膜剂,涂膜分割鲤鱼肉后进行-3℃微冻贮藏,测定鲤鱼肉持水力、电导率、pH、色度,挥发性盐基氮、硫代巴比妥酸值、TCA可溶性肽以及肌原纤维蛋白、表面疏水性、羰基、巯基和Ca_²⁺-ATPase活性的变化。结果 未涂膜鲤鱼肉在微冻贮藏14 d后品质显著下降,在微冻贮藏28 d内,与未涂膜鲤鱼肉相比,HA-大豆β-伴球蛋白复合膜可有效抑制微冻鲤鱼肉持水力、肌原纤维蛋白、巯基和Ca_²⁺-ATPase活性的下降(p＜0.05),延缓TVB-N、TBARS、TCA可溶性肽、电导率和羰基的增长速率(p＜0.05)。0.9%HA-2%大豆β-伴球蛋白复合膜保鲜28 d时,与未涂膜鲤鱼肉理化指标相比,其电导率低20.2%, TVB-N低48.9%,TBARS低62.6% ,TCA可溶性肽低20.7%;肌原纤维蛋白含量和持水力分别高40.6%和27.9%。结论 0.9%HA-2%大豆β-伴球蛋白复合膜保鲜效果最好,该涂膜剂可有效延缓微冻鲤鱼肉的劣变,延长货架期。     

大豆β-伴球蛋白脱糖基化及其酶解物抗原活性变化

大豆蛋白的抗原性是影响其食用安全性的重要因素。为了探讨大豆主要抗原蛋白β-伴球蛋白中的糖基化在其抗原反应中的地位和作用,本文用N-糖苷酶PNGase F对β-伴球蛋白脱糖基化处理后,脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在相同条件下用风味蛋白酶水解, 用SDS-PAGE电泳和专用β-伴球蛋白酶联免疫试剂盒分别测定了脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在酶解过程中的蛋白质组分和抗原性变化。结果表明,β-伴球蛋白分子中不仅含有N-糖肽键连接,也有O-糖肽键连接。脱糖后β-伴球蛋白抗原活性降低到原来的60.1%;脱糖和不脱糖两种β-伴球蛋白及其酶解产物电泳谱带和抗原性变化均有显著差异。酶解180min时,β-伴球蛋白抗原活性下降为43.4%,脱糖β-伴球蛋白抗原活性仅剩25.0%。此结果揭示了糖链存在影响β-伴球蛋白抗原活性和酶解时的降解行为,为探讨有效消除大豆蛋白抗原性提供一定的理论基础。     

大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白β亚基的抗原表位分析及分段克隆

利用生物信息学软件SWISS-MODEL对大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白β亚基建立出三级结构模型,并根据Disco Tope 2.0服务器预测出该模型的构象表位相关区段,采用分段克隆方式扩增目的基因的3个片段区域,利用PCR技术扩增目的基因全长及3个互相重叠的片段（A、B、C）将其连接至p MD18-T载体,并转化到大肠杆菌感受态JM109。经蓝白斑筛选,以及对重组质粒进行PCR和双酶切验证,测序结果与设计的基因序列一致,成功得到了目的基因片段的阳性克隆子,为β-伴大豆球蛋白β亚基分段表达及抗原区域位置的筛选与鉴定提供参考。      

糖基化对β-伴大豆球蛋白热聚集行为的影响研究(I)

基于Maillard反应的机理,采用干热法分别制备出7S和不同分子量葡聚糖(67 kD,150 kD、500 kD)的三种糖基化产物,从糖基化产物的热性质分析到热聚集体的浊度、粒径,研究了糖基化对于7S在pH和离子强度诱导下的热聚集行为.结果显示,糖基化具有抑制7s热聚集行为的作用,并且葡聚糖在分子量为67 kD和150 kD时的糖基化产物抑制效果相近且优于分子量为500 kD的葡聚糖糖基化产物.     

β-伴大豆球蛋白糖基化产物的致敏性研究

为探究食品热加工过程中糖基化产物对蛋白质致敏性的影响,该文模拟3种不同加工条件,制备β-伴大豆球蛋白的糖基化产物,利用β-伴大豆球蛋白致敏模型,对糖基化产物的致敏性进行评价,并探讨β-伴大豆球蛋白结构变化与致敏性的关系.检测小鼠过敏症状评分、体重、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、组胺、类胰蛋白...     

糖基化β-伴大豆球蛋白负载提高姜黄素抗氧化及缓释特性

利用干法糖基化制备β-伴大豆球蛋白（soy β-conglycinin,7S）-葡聚糖共价接枝物包埋姜黄素,并研究姜黄素的抗氧化及缓释效果。结果表明,随着反应时间（0、24、48、72 h）延长,7S-葡聚糖共价复合物接枝度和褐变度逐渐增加,至72 h达到最高,分别为15.02%和0.24。通过pH值循环法诱导7S、7S-葡聚糖封装姜黄素,形成7S-姜黄素、7S-葡聚糖-姜黄素纳米复合物,发现反应时间为72 h时,7S-葡聚糖表现出最高的姜黄素负载量（129.61μg/mg）,显著高于7S(69.06μg/mg)。荧光光谱分析表明姜黄素主要通过疏水相互作用与7S、7S-葡聚糖-72 h结合。透射电子显微镜观察到7S-姜黄素和7S-葡聚糖-72 h-姜黄素纳米复合物为球形。姜黄素质量浓度为100μg/mL时,与游离的姜黄素相比,封装在7S-葡聚糖-72 h内的姜黄素抗氧化能力提高1.36倍,且表现出稳定的缓释性能。7S-葡聚糖-72 h负载的姜黄素生物可利用率为66.83%,而7S负载的姜黄素和游离姜黄素生物可利用率分别为48.93%和33.06%。研究结果表明7S-葡聚糖-72 h可作...