酒曲根霉F34菌株凝乳酶的初步纯化及部分酶学性质的研究

采用50%和75%乙醇分级沉淀的方法,对凝乳酶进行粗提,得率为43.9%。然后采用Sephadex G75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力达到13008SU/g。F34菌株凝乳酶的最适反应温度为50℃,在40℃保持60min凝乳酶活力保持稳定,在60℃保持5min则完全失活。在pH为5.5⁷.2的范围内,随着pH的降低,凝乳酶活力逐渐升高,F34菌株凝乳酶活力保持稳定的pH在3.5左右。Ca2+、Zn2+、Fe3+、Fe2+对凝乳酶活力表现明显的促进作用,K+、Mg2+对凝乳酶活力表现微弱的促进作用,Na+、Cu2+、Co2+、Li2+对凝乳酶活力表现明显的抑制作用。      

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

米黑毛霉凝乳酶酶学性质研究

研究了米黑毛霉凝乳酶的最适温度、最适pH、热稳定性,探讨了金属离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力和酶的K^m与V^m值。结果显示：酶的最适温度为70℃;最适pH6;酶液在65℃保温10min,酶活损失达96％;Na^＋和K^＋对酶稍有抑制作用,Fe^2＋对酶有促进作用,Cu^2＋对酶有强烈的抑制作用;减少酶的添加量,在规定时间内凝乳会导致凝乳酶酶活测定结果偏大;凝乳酶蛋白水解活力为1048U／g;Km为190．84g／L,Vmax=7．8678g／s。     

微小毛霉凝乳酶的酶学性质研究

目的：研究微小毛霉(HL-1)凝乳酶的酶学性质。方法：研究了酶的最适温度,酶的pH值稳定性和热稳定性,探讨了金属离子、化学物质和钙离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力、相对分子量和酶的Km与Vm值。结果：酶的最适温度为60℃; 最适pH值为5.5;酶在65℃保温5min活力损失95%;钙离子是酶的激活剂,其含量与酶活力正相关,而钾离子则对酶有抑制作用;氯化钠对酶活力的影响不大,但是SDS可导致酶严重失活;加酶量与反应时间成反比;酶的蛋白水解活力为485.3U/g;相对分子质量是42000,Km为0.02380mol/L,Vm为1.1227mg/min。结论：得出了微小毛霉(HL-1)凝乳酶的酶学性质。     

Rhizopus sp.052凝乳酶的部分酶学性质

Rhizopus sp.052在pH1~7范围内,4℃条件下稳定。凝乳酶的最适作用温度为40℃,55℃保持20min完全失去活性,与小牛凝乳酶性质相似,而热失活的温度低于小牛凝乳酶。Rhizopussp.052凝乳酶对热不稳定的特性有利于干酪副产品乳清的加工处理。Rhizopussp.052凝乳酶对酪蛋白的水解能力比蛋白酶低,比小牛凝乳酶高,可以用于干酪的生产。对N-末段15个氨基酸序列GTGSVPVTDYQNDVE进行检索,结果表明,Rhizopus sp.052凝乳酶与其他菌株相比不完全相同,尚未见有研究者对其进行研究和报道。     

根霉碱性果胶酶的酶学性质研究

采用本实验室分离保藏的根霉菌GZ-11进行液体发酵,生产碱性果胶酶。确定了发酵周期,并研究了该酶的酶学性质。结果表明:PG酶活可达186.7万U/mL,PGL酶活可达21.3U/mL。PG的最适温度是50℃,pH稳定范围是7.0～9.0,最适pH是8.6;PGL的最适温度是45℃,pH稳定范围是8.8～10.6,最适pH是9.4。      

重组微小毛霉凝乳酶的发酵条件及其酶学性质

通过对重组微小毛霉凝乳酶(recombinant Mucor pusillus rennet,RMPR)发酵条件的研究,确定甲醇诱导体积分数1%、初始OD600nm 0.5、装瓶量100mL/500mL 摇瓶、诱导时间96h 为发酵最适条件。培养液离心取上清用硫酸铵分级沉淀获得粗酶液,并对其酶学性质进行研究,经测定该酶的最适反应温度为60℃,30～45℃酶较稳定,保温90min,剩余凝乳酶活力达86.5%;酶在pH5.5～7.0 范围内,随pH 值升高,凝乳酶活力逐渐降低,pH5.5时凝乳酶活力最高。当Ca2+ 浓度为0.03mol/L 时凝乳酶活力最高,Na+ 浓度对凝乳酶活力没有明显影响,Ni2+ 和Fe2+对酶有抑制作用,Mn2+、K+、Mg2+ 对酶有一定的促进作用。     

根霉ZM-10脂肪酶部分纯化及酶学性质研究

本实验室以合成己酸乙酯的转化率为指标,从酒厂筛选到一株合成己酸乙酯活性较高的根霉ZM-10,本实验以该菌株为出发菌种,将其脂肪酶进行部分纯化后,研究了酶学性质.结果表明,根霉脂肪酶的最适反应温度为25℃;在20℃时具有较好的稳定性,该酶在30℃80min后,残活还有31.9%;脂肪酶在pH7.0和8.0有较好的稳定性:2mmol/L金属盐离子浓度时,Na 、Cu2 、Fe3 、EDTA对脂肪酶的活力有一定的促进作用,在5mmol/L时,除Cu2 外,其他金属离子均表现出不同程度的抑制作用;表面活性剂CTAB和Tween-80对脂肪酶活性有一定的抑制作用,SDS改善作用比较大;在最适反应条件下的动力学常数Km和Vmax分别为18.2mmol/L和625U/L.     

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩,硫酸铵盐析,Sephacryl S-200 High Resolution凝胶柱层析,HiTrap Desalting凝胶柱脱盐,HiTrapTMSP(HP)离子柱层析对里氏木霉EIM-30的发酵液进行分离纯化,获得两个纯化的木聚糖酶组分,分别命名为Xylanase A和Xylanase B。纯化倍数分别为3.58和3.29,回收率分别为7.02%和28.29%。SDS-PAGE结果均为单一条带,分子质量分别为29.6 ku和20.9 ku。酶学性质研究结果表明:Xylanase A和Xylanase B的最适反应温度分别为55℃和60℃;温度低于50℃,两种酶的稳定性都很好;最适pH一样,都为5.0;pH稳定范围也一样,都为3.5⁷.0;Mn2+、Tris对Xylanase A有激活作用,Fe2+、Cu2+、SDS则对该酶有抑制作用;Mn2+对Xylanase B有激活作用,Zn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Ba2+、Mg2+及SDS则对该酶有抑制作用。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

发酵豆酱中蛋白酶高产细菌的筛选及所产蛋白酶的酶学特性研究

从发酵豆酱中分离出四种产蛋白酶细菌,采用Folin-phenol法测定其蛋白酶活力,筛选出产酶活力最强的菌株,并进行酶学特性的研究。结果表明:该酶的最适反应温度为55℃;最适作用pH为8.5;该酶具有较好的稳定性;在pH6.0～8.5条件下稳定;NH+4对该蛋白酶有明显的激活作用,Pb2+、Fe3+则对其表现出强烈的抑制作用;在55℃、pH8.0条件下,该酶解反应的表观米氏常数为0.056%。     

果胶内切酶的分离纯化和酶学特性研究

由黑曲霉发酵的商品果胶酶经SephacrylS-300柱层析分离纯化后得到电泳纯的果胶内切酶PG2,该酶的分子量为37.4ku,最适pH值为4.5,最适温度为35℃,Ca2 和Al3 对其酶活有明显的激活作用,Pb2 有明显的抑制作用,Km为1.26%,pI为3.12,对其氨基酸分析结果表明该酶中酸性氨基酸含量大于碱性氨基酸。     

鲜食葡萄来源酵母菌的鉴定及其酿造学特性分析

为分析一株鲜食葡萄来源酵母菌YM7的类别及酿造学特性,采用形态学与分子生物学方法鉴定其种属,以商业化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）X16为对照,采用光密度法分析其生长特性和生理耐受性,对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷显色法检测其β-葡萄糖苷酶合成能力,亚硫酸铋培养法检测其硫化氢产生能力,并与S. cerevisiae X16混合发酵葡萄汁,评价其对葡萄酒理化指标和香气特性的影响。结果表明,菌株YM7被鉴定为克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）,其生长性能、二氧化硫、柠檬酸耐受性与S. cerevisiae X16接近,葡萄糖耐受性低于S. cerevisiae X16,可耐受体积分数3%的乙醇,β-葡萄糖苷酶和硫化氢生产能力分别低于、高于S. cerevisiae X16。此外,与S. cerevisiae X16单独发酵葡萄酒相比,该菌株与S. cerevisiae X16混合发酵的葡萄酒挥发酸含量降低,香气化合物中酸类、醇类物质含量降低,酯类物质含量增加。     

发酵条件对根霉产脂肪酶的影响

通过单因素实验和正交实验,对MHL4.07菌摇瓶发酵产脂肪酶的培养基组成和培养条件进行了研究,结果表明:最佳发酵培养基配方为橄榄油15.0g/L、玉米浆40.0g/L、NH4Cl20.0g/L、豆饼粉20.0g/L、MgSO40.5g/L、KH2PO410.0g/L、KCl1.0g/L。最佳发酵条件为种子培养84h、接种量7%、初始pH6.5、装液量50mL/250mL三角瓶,培养温度28℃,摇床转速160r/min,发酵培养96h。在此条件下,最高脂肪酶产量达到60.54U/mL,比优化前提高了44.5%。     

柿中分离酿酒酵母菌Hss-7生长特性研究

对从柿子中筛选得到的酿酒酵母hss-7菌株生长特性进行研究,实验结果表明:接种后发酵液的含菌数为3×107 cfu/mL,菌株生长的适宜温度为35℃、pH值为4.5,此时hss-7菌株生长特性良好.温度和接种量对生长影响较大,而pH值的影响较小.     

泰国优质甜酒曲中根霉发酵特性的研究

以优良根霉菌株Q303为对照,研究分离纯化培养所得泰国优质甜酒曲中的根霉菌株R1、R2的液化力及其影响因素,同时,比较3者的发酵产品。结果表明:根霉菌株R1、R2和Q303在pH5.2～6.4、温度55～65℃、培养时间3d的条件下,液化力达到最大值;在所分析的条件下,根霉菌株R1、R2的液化力不及根霉菌株Q303的液化力;与根霉菌株Q303相比较,根霉菌株R1、R2的发酵产品色泽更好,在风味方面稍差。     

黄原胶降解酶酶学性质的初步研究

利用黄原胶降解菌(Paenibacillus lautus)XD2-8制备黄原胶降解酶,并对其酶学特性做了初步的研究。结果显示,该酶的最优酶促反应条件为:温度35℃、pH6.0、底物浓度5g/L;葡萄糖对该酶促反应具有抑制作用,且葡萄糖浓度越大抑制作用越强。     

Evaluation of enzymes produced from yeast

Pichia pinus was found to be capable of growing on mango wastes, producing pectinase (pectin lyase, EC-4.2.2.10) and lactase (beta-galactosidase, EC-3.2.1.23) enzymes. The two enzymes were successively purified by precipitation with ammonium sulfate followed by chromatography on Sephadex G-120. The purification procedure provided 1,846 and 929 fold purification with 20.6 and 24% yield recovery of pectinase and lactase, respectively. the km value of pectinase was 0.33% for pectin at pH 4.5 and that for lactase was 0.166% for lactose at pH 7.0. The purified enzymes, pectinase and lactase are stable up to 50 degrees C for 60 and 45 min, respectively, with 20 and 35% loss of their activity. Gel filtration on Sephadex G-200 indicated that the molecular weights of the purified pectinase was 90 x 10(3) Dalton and of lactase 115 x 10(3) Dalton. On the basis of the evaluation tests done, the enzymes were considered to have a potential technological interest as treating mango pastes (residues left after mango juice preparation) with the two prepared enzymes resulted in an increase of the colour intensity, total carbohydrate content and juice yield. Treating milk with the purified lactase also showed an increase in the total carbohydrate and reducing sugar produced.     

重组凝乳酶的酶学特性研究

对重组毕氏酵母菌分泌表达的凝乳酶进行酶学特性研究.结果表明,该酶最适凝乳温度为45℃;最适pH值为5.0;在45℃以下可以保持相对稳定的活力,55℃(6 min)丧失全部活性;酶在4.0～7.0之间凝乳活性稳定;该酶在押肽酶、亮抑酶肽、苯甲基磺酰氟、1,10-菲咯啉等蛋白酶抑制剂的作用下均保持了大部分的活性,浓度为1μmol/L胃蛋白酶抑制剂Pepstain A可以明显抑制重组凝乳酶的活性.研究结果证明了重组凝乳酶与商品凝乳酶酶学特性相近,可以应用于干酪生产.