植酸酶植物基因工程载体的构建

通过PCR方法从植酸酶基因克隆载体PUC18／phyAI中扩增出Aspergillus.ficuumAS3.324植酸酶（phyA）基因,经酶切连接后克隆到植物中间载体pBI121,获得含AS3.324植酸酶基因的质粒pBI121/phyAⅡ。用冻融法将pBI121/phyAⅡ导入表达载体根 农杆菌LBA4404中。经过抗生素筛选、PCR检测,证明得到了正确表达载体－－LBA4404／pBI121/phyAⅡ,此表达载体可用于植酸酶基因转化烟草的研究。     

人热激蛋白27基因的克隆表达及鉴定

用PCR技术扩增了人热激蛋白27(Hsp27)基因,构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Hsp27。经IPTG诱导表达了带有GST标签的重组人Hsp27,SDS-PAGE鉴定显示该重组蛋白的分子量为44 kD。利用谷胱甘肽-琼脂糖树脂亲和层析纯化了该重组蛋白,经串联质谱检测证明了该重组蛋白为人Hsp27。本研究为制备Hsp27抗体及进行Hsp27的功能研究奠定了基础。     

果实特异性启动子驱动丙型肝炎病毒E2基因植物表达载体的构建

构建了果实特异性启动子驱动的含编码丙型肝炎病毒包膜蛋白E2基因的植物表达载体,为研制有效的转基因植物丙肝疫苗打下基础。以载体pCAMBIA2300为骨架引入pBIl21中的GUS基因,用目的片段E2基因替换其中的GUS基因构建了pCAM-BIA2300G-E2载体,将番茄的果实特异性启动子E8引入pCAMBIA2300G-E2载体中构建了pE8-E2植物表达载体。用限制性内切酶消化重组载体,结果表明重组载体都含有所插入的目的片段。果实特异性启动子驱动的含E2基因的植物表达载体的成功构建,为抗丙型肝炎病毒的口服疫苗研究提供了试验基础。     

TALEN表达载体构建技术研究进展

转录激活因子样效应蛋白核酸酶(TALEN) 是最新出现的基因组定点修饰技术之一。该技术在应用过程中为保证靶点序列的特异性, 编码转录激活因子样效应物(TALE)结构域的序列一般较长,这使得TALEN表达载体的构建成为该技术的一个关键步骤和应用中的主要瓶颈,为此发展了多种TALEN表达载体构建方法。本文主要对其中常见的Golden Gate法、REAL法、单元组装法、FLASH法、ICA法、LIC法等方法及其研究进展进行了总结。随着TALEN表达载体构建方法的进一步丰富和普及,该技术必将在生物基因功能研究、农作物和家畜性状改良、人类遗传疾病治疗方面展现出广阔的应用前景。       

番茄果实特异性启动子驱动下的乙肝表面抗原S基因的植物表达载体的构建

将番茄果实特异性启动子通过PCR的方法扩增出来,然后将其替代了pBIN438的CaMV35S启动子,并将乙肝表面抗原的S基因连接到载体上,以获得番茄果实特异性表达乙肝表面抗原的高效植物表达载体。     

人参3-O-UGT1基因RNAi表达载体工程菌的构建

人参3-O-UGT1基因(Pg3-O-UGT1)是控制人参中二醇型单体皂苷合成的关键酶基因,而二醇型皂苷和三醇型皂苷具有相反的药理活性。本文利用RT-PCR技术和酶切连接技术成功构建人参3-O-UGT1基因RNAi(RNA interference)植物表达载体,通过热转化法将重组表达载体转化进发根农杆菌A4中,得到含有人参3-O-UGT1基因RNAi植物表达载体的工程菌,为诱导人参外植体转化和人参皂苷合成机理奠定了基础。     

Lrrcl0蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET～Lrrcl0和Lrrcl0蛋白表达,利用NcoI和BamHI双酶切载体pMDl8-T-Lrrcl0,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a（＋）,转入E．colistrainDH5d．茵落PCR筛选阳性茵落,提取阳性茵质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E．colistrainB121（DE3）,于37℃振荡培养,用1mmol／LIPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrcl0。转入E．colistrainBL21（DE3）进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrcl0;Lrrcl0蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。     

人参β-AS基因RNAi表达载体工程菌的构建

利用重组PCR和酶切连接技术构建了人参β-香树素合成酶(β-AS)基因RNAi(RNAinterference,RNAi)植物表达载体,再经热转化法转化到发根农杆菌A4菌株中,得到含有人参β-AS基因RNAi植物表达载体的工程菌,为诱导转化人参外植体奠定了基础。     

家蚕小热休克蛋白22.6基因的生物信息学分析及其原核表达

小热休克蛋白家族成员在结构上变化很大,是细胞或生物体被多种类型的胁迫所诱导新合成的或含量增加的一类蛋白质,目前研究相对较少。从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条序列,经过Blast比对和保守结构域分析后发现该蛋白属于家蚕小热休克蛋白,将其命名为BmHSP22.6;通过PCR扩增该基因的ORF序列,将其克隆到pET28a(+)表达载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,获得重组质粒pET-28a-BmHSP22.6。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得工程菌,用终浓度为1 mM的IPTG诱导目的基因表达。用镍柱分离上清裂解液,获得纯化的目的蛋白。     

sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

为获得腺病毒受体sCAR与掌叶半夏蛋白(PPA)的亚基B(PPAb)的融合蛋白,将PPAb基因克隆入已构建的原核表达载体pQE30-sCAR中,经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pQE30-sCAR-PPAb,转化大肠杆菌M15后获得工程菌。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-PPAb。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在42 kD左右有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-PPAb能提高Ad-EGFP对Kasumi-1的感染效率。     

Antioxidant properties of wheat germ protein hydrolysates evaluated in vitro

Wheat germ protein hydrolysates were prepared by protease hydrolysis, ultrafiltration and dynamical adsorption of resin. The total amount of amino acids in 100 g wheat germ protein hydrolysates is 93.95 g. Wheat germ protein hydrolysates are primarily composed of 4 fractions： 17.78% in the relative molecular mass range of 11 563 - 1 512, 17.50% in 1512 -842, 27.38% in 842 -372 and 30.65% in 372 -76, respectively. The antioxidant properties of wheat germ protein hydrolysates were evaluated by using different antioxidant tests in vitro. 1.20 g/L wheat germ protein hydrolysates exhibit 78.75% inhibition of peroxidation in linolei acid system; and 1.6 g/L wheat germ protein hydrolysates show 81.11＆ scavenging effect on the 1,1-diphenyl-2-picrylhrazyl radical. The reducing power of 2.50 g/L wheat germ protein hydrolysates is 0.84. Furthermore, the scavenging activity of 0. 60 g/L wheat germ protein hydrolysates against superoxide radical is 75. 40%; 0. 50 g/L wheat germ protein hydrolysates exhibit 63.35% chelating effect on ferrous ion. These antioxidant activities of wheat germ protein hydrolsates increase with the increase of its concentration. Experimental results suggest that wheat germ protein hydrolysate is a suitable natural antioxidant rich in nutrition and nontoxic.     

基于支持向量机回归的减振器非参数模型

利用减振器的示功试验数据,尝试了基于支持向量机回归算法构造减振器非参数模型的方法。分别建立了一支普通减振器和一支位移相关减振器的模型,并利用样本数据之外的试验数据进行了验证。由普通减振器的验证结果可以看出,利用减振器力与速度和位移相关的模型辨识精度要高于力与速度相关的模型。由位移相关减振器的验证结果可以看出,此方法可以有效地辨识出此减振器的非线性特征。     

热泵循环技术在热电厂的应用

介绍了热泵技术的原理,并结合某发电厂应用实例,说明了在电厂中可以采用热泵技术,循环水不再全部依靠冷却塔降温,而是部分作为各级热泵的低温热源,提高热电厂额定供热能力,减少了汽轮机的抽汽量,增加汽轮机的发电能力,提高系统整体能效。经过实际运行,各项指标达到了设计要求。热泵循环技术在热电厂中应用前景良好,具有推广价值。     

基于支持向量区间回归的供热负荷概率预报

提出了一种基于支持向量区间回归(SVIR)的概率预报方法,克服了点预报法无法确定预报结果波动范围的缺点。该方法利用支持向量回归确定SVIR模型的初始参数,再利用两个径向基网络分别辨识SVIR的上限和下限,可以同时给出置信区间和点预报。最后,以某热力站实际供热负荷数据与BP神经网络点预报方法进行比较,验证了该方法的有效性和实用性。     

论与当量燃料性能系数有关的热电厂供热效率

通过建立一种比较准确实用的热电厂供热效率计算式,解决了当量燃料性能系数中u值不易计算的问题,并根据算例分析得出了以汽车抽气为热源的吸收式制冷机一次能耗并不总比压缩式制冷机低的结论。     

火电厂锅炉补充水软化系统的改进研究

针对火电厂原设计为氢钠串联软化水系统 ,由于地下水质较差 ,致使锅炉经常发生腐蚀爆管　　　　事故 ,造成汽机调速系统卡死 ,极大地威胁生产安全。研究改进软化水为一级除盐系统 ,不仅　　　　消除了安全生产的隐患 ,同时还改变了外水水质 ,取得了良好的经济效益和环境效益。     

复叠热泵冷冻干燥系统制冷剂的选择

提出一种新型的复叠式热泵冷冻干燥系统。针对新型复叠式热泵干燥系统,以常规热泵工质计算了复叠式热泵的循环性能,对各种工质匹配和组合特性进行了计算和分析,结果表明:对于高温级循环,可选择R142b,R600a和R600作为工质;对于低温级循环,可选择R290,R134a和R152a作为工质。复叠式热泵的整体性能系数主要取决于高温级工质的循环性能,高温级工质的循环性能高,则复叠式热泵的整体性能好。     

利用凝汽器循环水废热的热泵站用能分析

为了研究热泵回收电站凝汽器冷却水废热的用能情况,采用能流图分析了不同驱动能源的热泵站回收循环水废热的一次能源利用系数．结果表明：电动热泵供能系统总效率虽然仅比汽轮机热泵站总效率低2％,与燃气轮机热泵站持平,但电动热泵站牺牲了45．79％的发电量,若发电效率或热泵机组制热性能系数降低,可能出现本电站发电不够用的情形．而汽...     

通信机房用空气换热器经济效益分析

为解决通信机房内空调设备的能耗问题,对通信机房采用空气换热器间歇代替空调运行进行了分析,认为此空气换热器的应用可减少空调机的工作时间,延长其使用寿命,从而降低空调机的运行费用以及通信系统的投资成本。结合工程实例,采用逐月分析法对该技术实施后的节电率、回收期进行了计算。结果表明,此技术的节能效益是显著的,年节电率达30%,回收期约3年,是值得推广的节能技术。