双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

酶解核桃蛋白制备降血压肽的工艺优化

以蛋白质含量为88%的核桃蛋白为试验原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用酶解产物血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为检测指标。考察酶解温度、p H值、加酶量以及底物浓度这4个因素对酶解产物ACE抑制率的影响,通过响应面优化试验,重复3次验证性试验,最后确定酶解的最佳工艺条件酶解温度、p H值、加酶量、底物浓度分别为:55℃、9.0、7 300 U/g、2.7%,酶解物的ACE抑制率平均可达60.23%。经超滤分离,得到小于3 k Da分子量的核桃降压肽,IC50值最低为0.389 3 mg/m L,其ACE抑制活性最高。     

超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用

为了探索超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用,分别以超声波和微波对芝麻饼粕预处理,超声波辅助酶解,研究了超声波功率、超声波时间、微波功率、微波时间和加酶量对ACE抑制率的影响。结果表明:超声波预处理功率为4 W/m L、预处理10 min、添加1 300 U/g碱性蛋白酶时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。超声波辅助酶解过程中超声功率选择0.5 W/m L、添加1 700 U/g碱性蛋白酶、酶解15 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.96 mg/m L。微波预处理功率为1.33W/m L、微波预处理5 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。     

基于BP神经网络的牡蛎α葡萄糖苷酶抑制剂活性肽制备工艺优化

为获得α-葡萄糖苷酶抑制率活性较好的活性肽,采用牡蛎为原料,选取中性蛋白酶和动物蛋白水解酶进行酶解。以牡蛎酶解活性肽的α-葡萄糖苷酶抑制率为评判指标,进行均匀设计实验,获得了酶解温度、加酶量和底物浓度三者与牡蛎活性肽α-葡萄糖苷酶抑制率之间的关系。将前三者作为BP神经网络的输入,后者作为输出设计神经网络,对牡蛎酶解过程进行模拟以及对牡蛎活性肽的活性进行预测,并得出最优酶解工艺参数。结果表明:酶解温度为55℃,酶解时间为5 h,加酶量为600 U/g,底物浓度为0.25 g/m L时,酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率最大为89.22%。因此,利用BP神经网络可对牡蛎酶解非线性过程进行较好的模拟,并且对酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率可进行较好预测,有利于牡蛎酶解活性肽的产业化制备。     

大豆肽功能饮料加工工艺研究

以大豆为主要原料研究含肽功能饮料的加工工艺。以大豆肽含量为指标,通过单因素试验和正交试验L9(33)研究了蛋白酶的种类、酶解时间和蛋白酶浓度等因素对大豆肽含量的影响。试验结果表明:影响大豆肽含量因素的主次顺序依次是酶的种类酶解时间酶的浓度,显著性分析表明,酶的种类差异显著(P0.05),说明酶的种类对大豆肽含量影响较大。蛋白酶酶解豆浆的最佳工艺条件为:碱性蛋白酶,加酶量为0.2%(质量分数),50℃,pH7.5,酶解时间5 h。在最佳工艺条件的基础上调配大豆肽功能饮料,最佳配方为:白砂糖35 g/L,葡萄糖16 g/L,碘盐0.6 g/L,氯化钾0.1 g/L,单甘酯0.8 g/L,CMC 0.8 g/L,香精适量。     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

酶解玉米胚芽粕制备ACE抑制肽的条件优化

采用碱性蛋白酶酶解玉米胚芽粕制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并以ACE抑制率为指标,在单因素的基础上,通过L9(34)正交试验来确定酶解的最佳工艺条件。最佳酶解条件为:底物浓度5%(w/v)、加酶量3%(w/w)、温度60℃、pH 8.5、水解时间2.5 h,在此条件下,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率可以达到86.38%(此时水解度为22.76%)。以截留分子量为6KDa的超滤膜分离该水解物,测定两组分的ACE抑制活性。酶解液经超滤后组分Ⅱ(M6 kDa)的IC50值达到1.38 mg/mL,优于未超滤的酶解液的IC50值(3.16 mg/mL)。     

响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽工艺

利用响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的工艺条件。采用不同蛋白酶水解花椒籽蛋白,以酶解物对血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率为指标,筛选出制备花椒籽蛋白降血压肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,考察酶解时间、加酶量、酶解温度和pH值对血管紧张素转换酶抑制率的影响。结果表明：回归模型能较好地反映各因素水平与响应值之间的关系,并获得酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的最佳工艺条件为：底物质量浓度3 g/100 mL、酶解时间4.9 h、加酶量10 200 U/g、酶解温度37.4 ℃、pH 6.9,在此条件下,所得酶解产物的ACE抑制率为68.00%。     

响应面法优化麦胚清蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺

选择合适的蛋白质水解酶是制备高活性抗氧化肽的关键。以小麦胚芽清蛋白为原料,酶解产物的DPPH自由基清除率以及ORAC值为指标,从4种蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)中,筛选得出中性蛋白酶为最佳用酶。然后通过响应面法对中性蛋白酶酶解工艺条件进行了优化。结果表明,中性蛋白酶酶解麦胚清蛋白的最佳酶解参数为:底物浓度2.4%、加酶量5 900 U/g、酶解p H 7.04、酶解温度55℃、酶解时间4 h。此酶解条件下,其1 mg/m L酶解产物的DPPH自由基清除率为65.93%,100μg/m L酶解产物的ORAC值为1 291.32μmol Trolox当量/g多肽。     

具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的苦杏仁醇溶蛋白酶解物制备及稳定性表征

以苦杏仁醇溶蛋白（BAKG）为原料,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率及水解度为指标,筛选出酶解苦杏仁醇溶蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制酶解物（AGIH）的最佳蛋白酶,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为指标,采用单因素和响应面设计实验选定制备AGIH所需的底物浓度、加酶量、pH值、最佳温度、酶解时间。并对该最佳酶解条件下制备活性酶解物的物理（pH、温度）稳定性和胃肠道稳定性进行研究。结果表明,木瓜蛋白酶为最佳蛋白酶,酶解最优工艺条件为底物浓度4.0% (m/V)、加酶量6000 U/g、pH 7.0、温度55 ℃、酶解时间6 h。根据上述条件下制备的AGIH抑制率为18.10%,IC50为17.66 mg/mL。制得的AGIH在高温、低pH、高pH条件下,或者经胃肠道模拟消化后,都具有较好的稳定性。研究结果为苦杏仁醇溶蛋白功能活性酶解物的开发利用提供了新的思路。     

响应面法优化超声辅助酶解制备大豆降血糖肽的研究

超声预处理大豆蛋白,响应面分析(RSA)试验优化酶法制备新型降血糖肽。以酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为评价指标,筛选蛋白酶;在单因素试验的基础上,对超声预处理工艺及酶解过程进行RSA试验。实验结果表明,最佳蛋白水解酶为胰蛋白酶;经过RSA优化得到最佳条件为:酶解时间22.0min,加酶量6 416.61 U/g,酶解底物浓度2.10%;超声预处理时间20.9 min,超声功率245.9 W,超声底物浓度6.27%,在此条件下大豆蛋白源多肽的抑制率64.79%,多肽质量浓度4.15 mg/m L。RSA试验优化后,多肽的α-葡萄糖苷酶抑制率比相同条件未使用超声预处理的提高了19.01%。     

菠萝蛋白酶水解泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的研究

为了探讨利用泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用高效液相色谱法测定泥鳅肉水解物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制作用,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、复合风味蛋白酶、复合蛋白酶5种酶中筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有降血压活性水解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计对该酶的酶解条件进行优化。结果表明最佳水解条件为：温度55℃,固液比1:3,pH6.5,加酶量1000U/g pro,水解时间90min。在该条件下,水解物的ACE抑制率IC50值为0.0184mg/mL,ACE抑制肽的相对分子质量主要集中在924左右。     

响应面法优化西藏核桃蛋白酶解工艺

目的研究西藏核桃蛋白酶解的最佳蛋白酶及酶解条件。方法以水解度为指标,筛选最佳蛋白酶,并在单因素试验基础上,通过Box-Benhnken试验设计及响应面分析法确定西藏核桃蛋白酶解最佳条件。结果碱性蛋白酶为最佳蛋白酶,最佳酶解条件为:加酶量3.09%,酶解温度50.48℃,pH为7.46,液料比为4.88:1(m L/g),酶解时间为3 h。测得西藏核桃蛋白水解度为20.40%。结论经响应面分析法优化酶解条件后,实际值水解值与理论值间相对误差较小,本研究为西藏核桃酶解生物活性肽的功能性研究提供基础。     

响应面法优化制备南瓜籽抗氧化肽的工艺

以南瓜籽分离蛋白为原料,采用酸性蛋白酶酶解制备南瓜籽抗氧化肽。选用加酶量、酶解温度、pH值、底物质量浓度、酶解时间作为研究对象,以酶解液对DPPH自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman筛选试验确定显著因素,然后通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化制备南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明：酸性蛋白酶酶解南瓜籽蛋白质的最佳工艺条件为：酶解温度50℃、pH2.5、酶解时间5h、底物质量浓度0.05g/mL、加酶量6000U/g pro,在此条件下,DPPH自由基清除率可达到92.82%。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

响应面法优化酶解制备绿豆蛋白ACE抑制肽的研究

以绿豆蛋白粉为原料制备绿豆ACE抑制肽,研究酶解时间、酶解温度、酶解pH、底物浓度、加酶量对ACE抑制率和水解度的影响,通过单因素实验得到最佳条件为:酶解温度55℃,酶解pH8,底物浓度2%,加酶量6000u/g。随后选取对ACE抑制率有显著影响的四个因素:酶解温度(X1)、加酶量(X2)、酶解pH(X3)和酶解时间(X4)进行四因素三水平的响应面分析实验,经过优化得到最优条件为:酶解温度55℃,酶解pH8.25,底物浓度1.75%,加酶量6200u/g。在此条件下,绿豆ACE抑制肽的抑制率为84.83%。     

利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化

运用正交试验和响应面法优化牡蛎血管紧张素转换酶(angiotensin-Ⅰconverting enzyme,ACE)抑制肽的分步酶解制备工艺。采用复合蛋白酶和碱性蛋白酶对牡蛎进行分步酶解,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析和ACE抑制率为考核指标优化工艺参数。结果表明,第1步复合蛋白酶最佳工艺参数为:料液比1∶4、加酶量1.2%、pH 7.0、反应温度50℃、酶解时间1 h;第2步碱性蛋白酶最佳工艺参数为:加酶量0.42%、pH 8.3、反应温度53℃、酶解时间73 min。凝胶过滤色谱法测得牡蛎酶解液分子质量在3 000 D以下小肽所占比例为99.72%,其ACE抑制活性IC50为0.8 mg/mL。同时,氨基酸组成分析表明,牡蛎肽中Glu含量最高,Cys含量最低;必需氨基酸和疏水性氨基酸含量分别占总氨基酸的36.6%和37.2%。本研究制备的低分子质量、高ACE抑制活性牡蛎肽,可为牡蛎资源的开发利用提供理论参考。     

酶解海产低值鱼制备抗氧化肽的研究

酶解海产低值鱼制备抗氧化肽,分别研究底物浓度、pH、温度、酶浓度及时间对酶解产物清除DPPH·的影响。在单因素试验基础上,通过正交试验对酶解制备抗氧化肽工艺进行优化,确定最佳工艺为:中性蛋白酶添加量3%,底物浓度6%,温度55℃,反应时间3 h,反应pH 7.0。在最佳条件下,所得多肽的质量浓度为164.64μg/m L,DPPH·清除率为68.633%。     

酶解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的工艺研究

建立胰蛋白酶水解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的工艺.以酶解物对血管紧张素转换酶抑制率、苦味值和蛋白水解度为指标,对pH、温度、底物浓度、加酶量和酶解时间等酶解条件进行单因素实验,并在此基础上,选择酶解时间、pH、温度等参数通过正交实验,确定了酶解葵花籽粕蛋白制备降血压肽的最优参数组合为:底物浓度为3.5%,加酶量2.85%.pH7.5、温度45℃和酶解时间5min,所得葵花籽粕降血压肽产品的IC50值为6.06mg/mL.     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。