两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

两种人参皂苷糖苷酶的酶性质比较

利用DEAE-Cellulose DE52离子交换柱层析法及电泳法对由菌株Absidia sp.G8r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc8)和Absidia sp.G4r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc4)进行了分离纯化,并采用TLC法和分光光度计法对其酶反应条件和酶反应特性进行了比较.结果显示,两种酶的分子质量均在71～72 ku,最适酶反应pH是5.0,最适酶反应温度30 ℃,金属离子K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,Cu2+对人参皂苷糖苷酶有很明显的抑制作用.两种酶均具有专一性水解母环侧链末端的α-Gal、β-Glc键的特异性.实验结果表明,两种菌种产的两种人参皂苷糖苷酶是同一种人参皂苷糖苷酶.     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

转化人参二醇类皂苷为C-K的特异人参皂苷糖苷酶的纯化及性质

研究了真菌sp.g848p发酵产生的把人参二醇类皂苷PPD转化为人参皂苷C-K的特异的人参皂苷糖苷酶,及该酶的分离提纯。该酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,其酶的分子质量约为74 ku。这种特异的人参皂苷糖苷酶能水解人参二醇类皂PPD生成稀有人参皂苷C-K,该酶最适反应时间为24 h,最适反应温度为45℃,最适pH为5.0。     

转化人参二醇类皂苷为C-K的特异人参皂苷糖苷酶的纯化及性质

研究了真菌sp.g848p发酵产生的把人参二醇类皂苷PPD转化为人参皂苷C-K的特异的人参皂苷糖苷酶,及该酶的分离提纯。该酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,其酶的分子质量约为74 ku。这种特异的人参皂苷糖苷酶能水解人参二醇类皂PPD生成稀有人参皂苷C-K,该酶最适反应时间为24 h,最适反应温度为45℃,最适pH为5.0。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

黄芪皂苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从Absida sp．A3r、A84r、A9r、A8r、A38r、ARr6株菌中筛选出了黄芪皂苷糖苷酶高产菌株，该酶能将多糖基的黄芪皂苷水解成低糖基的皂苷。通过实验确定了该黄芪皂苷糖苷酶的最适反应条件：反应温度，30℃；底物浓度，20mg／mL；反应时间，24h；pH，6．0。     

黄芪皂苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从Absidasp.A3r、A84r、A9r、A8r、A38r、ARr6株菌中筛选出了黄芪皂苷糖苷酶高产菌株,该酶能将多糖基的黄芪皂苷水解成低糖基的皂苷。通过实验确定了该黄芪皂苷糖苷酶的最适反应条件:反应温度,30℃;底物浓度,20mg/mL;反应时间,24h;pH,6.0。     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究.结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉 5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28 ℃;酶反应的最适条件为25 ℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL.     

新细菌转化生产人参皂苷Rg_3的条件研究

研究了新筛选的细菌Phycicoccus sp.BXN5-13转化人参二醇类皂苷生成Rd和Rg3皂苷酶反应条件。结果表明,该细菌产生的人参皂苷酶为胞内酶,最佳产酶发酵条件为在含胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、NaCl 10 g/L的培养基中加入产酶诱导物,即人参茎叶总皂苷,在35℃培养72 h。其粗酶反应最佳条件:底物质量浓度为1 mg/mL,最适pH为6,在45℃反应24 h。其发酵液与人参二醇类皂苷反应后,用薄层层析法与高效液相色谱法检测结果;其酶液将Rb1等人参二醇类皂苷,转化为人参皂苷Rd,将Rd进一步转化为人参皂苷Rg3;转化率为44%。     

Arthrobacter sp.No.3细菌酶转化三醇类人参皂苷Rg1生成Rh1的反应条件

为了提高Arthrobacter sp.No.3 GS 0202新细菌所产人参皂苷糖苷酶水解人参三醇类皂苷Rg1生成人参三醇类皂苷Rh1的能力,采用薄层层析法和高效液相色谱法,对该菌的发酵条件及所产糖苷酶的反应条件进行了研究.结果表明,在30 ℃发酵条件下,人参皂苷酶的诱导物人参茎叶总皂苷存在下,该细菌产生较好.其粗酶...     

酶解产物人参稀有皂苷Rh3的制备与分离

人参二醇类皂苷经酶转化等方法处理,得到Rh2 和Rh3为主的混合物.经常压硅胶柱分离,得到纯Rh2,也得到Rh3粗品;Rh3粗品再经高压硅胶柱分离,成功地得到了Rh3单体.其纯度达到95%以上.     

酶解产物人参稀有皂苷Rh_3的制备与分离

人参二醇类皂苷经酶转化等方法处理,得到Rh2和Rh3为主的混合物。经常压硅胶柱分离,得到纯Rh2,也得到Rh3粗品;Rh3粗品再经高压硅胶柱分离,成功地得到了Rh3单体。其纯度达到95%以上。     

Aeromonas sp.F3胶原酶性质的研究

海洋污泥中筛选得到的Aeromonas sp.F3所产的胞外酶对胶原蛋白有水解作用.以海洋微生物Aeromonas sp.F3为酶源,采用单因素试验法对其所产的胶原酶性质进行了研究,包括该胶原酶的酶解条件及热稳定性,并对该胶原酶水解鱼皮的效果进行了分析.结果表明,微生物Aeromonas sp.F3源胶原酶在50℃热处...     

Arthrobacter sp.3胞外酶转化人参二醇类皂苷生成Rg_3的反应条件

人参稀有皂苷Rg3是具有较高抗癌活性的人参皂苷单体,但在人参中的含量极低。采用新筛选的细菌Arthrobacter sp.3产胞外酶转化人参二醇类皂苷(PPD)生成人参皂苷Rg3,为大量制备人参皂苷Rg3提供了方法。实验结果表明,该细菌产生的人参皂苷酶为胞外酶,通过薄层层析法(TLC)分析得到,最佳发酵诱导物为0.1 mg/mL的PPD,最适反应条件为反应温度40℃、反应时间24 h、底物质量浓度0.1 mg/mL。经HPLC检测,在此条件下反应,产物中Rg3的质量分数为21%。     

Aeromonas sp.F3胶原酶性质的研究

海洋污泥中筛选得到的Aeromonas sp.F3所产的胞外酶对胶原蛋白有水解作用。以海洋微生物Aeromonas sp.F3为酶源,采用单因素试验法对其所产的胶原酶性质进行了研究,包括该胶原酶的酶解条件及热稳定性,并对该胶原酶水解鱼皮的效果进行了分析。结果表明,微生物Aeromonas sp.F3源胶原酶在50℃热处理40min之后明显失活,该胶原酶的最适反应温度为40℃,最适pH为8.6,金属离子Ca2+在0.5mmol/L时对酶有激活作用。该酶在其最适条件下,对鱼皮胶原有显著水解效能,其水解产物的分子质量在30ku以下。     

STP磷酸化处理对小麦面筋蛋白酶解特性的影响

以复合蛋白酶为水解酶,研究了小麦面筋蛋白酶解前STP磷酸化处理对其酶解特性的影响.通过单因素试验和正交试验确定磷酸化处理的最佳工艺条件为:STP添加量为小麦面筋蛋白的9%,温度25℃,pH8.5,处理时间30 m in.同时研究了STP磷酸化处理后小麦面筋蛋白在酶解过程中的水解度和蛋白提取率的变化规律.