1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略

目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定,并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者,用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原;A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体;吸收放散试验检测红细胞弱抗原;中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果,选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征,输入O型少白细胞红细胞6U,A型单采血小板1治疗量后,均能达到预期疗效,无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型,可避免将Am亚型误定为O型,对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。     

Bel亚型的血型血清学特征及其遗传背景分析

目的分析Bel亚型的血型血清学特征及其遗传背景。方法采用红细胞凝集试验检测先证者及其家庭成员红细胞上的A、B、H抗原和血清中的抗-A、抗-B抗体;凝集抑制试验检测唾液中的A、B、H血型物质;吸收放散试验检测红细胞表面是否存在B抗原。用序列特异性引物多聚酶链式反应技术(PCR-SSP)进行ABO血型基因分型。结果先证者与其父确定为Bel亚型;先证者的两个妹妹分别为ABel亚型和A型;先证者的母亲、配偶、女儿、儿子分别为A、AB、A和B型。结论Bel亚型有家族遗传性。     

一例稀有CisAB血型血清学及遗传机理分析

目的对1例献血者血型血清学鉴定为A2B血样进行基因型分析。方法应用常规血型血清学方法进行血型鉴定;采用PCR-SSP法进行ABO初步基因分型的检测,并对ABO基因第6和第7外显子的核苷酸序列进行扩增、测序和分析。结果血型血清学鉴定为A2B亚型,基因分型为BB型,初步判定为B(A)型;基因测序发现两条等位基因第6外显子均不存在261delG及297 G/G,判定该献血者血型为B与B基因的组合,经与A101核苷酸序列比对,对第7外显子的核苷酸序列分析发现,有一条核苷酸链上有526C>G,657C>T、703G>A及803G>C点突变,另一条核苷酸链上有297A>G、526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C及930G>A点突变,确定该献血者血型基因型为CisAB02/B101。结论血型血清学对CisAB和B(A)判定有一定的局限性,通过核苷酸序列及分析能够明确本例献血者基因型为CisAB02/B101。     

CAST基因多态性与西门塔尔杂交牛胴体和肉质性状的相关性分析

目的分析钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)基因多态性与西门塔尔杂交牛胴体和肉质性状的相关性。方法选取95头西门塔尔杂交牛,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(Restriction fragment length polymor-phism-polymerase chain reaction,RFLP-PCR)对CAST基因外显子1(Exon1)和外显子5(Exon5)区域的片段的多态性进行检测,并对突变位点与西门塔尔肉牛胴体和肉质性状的相关性进行分析。结果在所分析的片段中,仅引物4扩增的片段(Exon1)存在一个G→C碱基的置换突变(E1 256 g﹥c),为同义突变;该突变位点为RasⅠ酶的自然酶切位点,酶切后存在GG、GC和CC 3种基因型,CC基因型与西门塔尔牛的净肉率性状显著相关(P﹤0.05),而对其他胴体和肉质性状无显著影响。结论 CAST基因Exon1处存在的突变位点与西门塔尔肉牛的净肉率显著相关,因此该位点将有助于筛选与牛肉质相关的辅助选择标记,该基因将为鉴定与肉质相关的功能基因提供参考。     

N+离子注入诱变筛选胸腺嘧啶缺陷型大肠杆菌

利用N+离子注入诱变大肠杆菌,经甲氧苄啶的选择性筛选,得到胸腺嘧啶营养缺陷型菌株.通过重组DNA技术将该突变株胸苷酸合成酶(TS)基因连接到载体pMD-18T质粒上,经测序发现TS基因第173个碱基由AT→CG,其相应的氨基酸由谷氨酸(E58)突变为丙氨酸(A58).该突变株的获得为后续研究嘧啶核苷酸的代谢奠定了基础.     

成骨不全症患者LEPRE1基因突变位点的筛查

目的对COL1A1和COL1A2基因突变检测为阴性的成骨不全症患者进行隐性致病基因LEPRE1的筛查。方法采集成骨不全患者外周血样,提取基因组DNA,PCR扩增LEPRE1基因,直接测序法进行突变检测;采用PolyPhen、Align GVGD和SIFT突变功能预测软件分析突变对蛋白功能的影响。结果检测到1例成骨不全症患者在LEPRE1基因第5号外显子发生碱基GGA>AGA,发现甘氨酸被精氨酸替换的1个杂合突变位点(c.1045G>A,p.Gly349Arg);其母亲和外祖父有相同杂合突变,家庭其他成员和200份健康对照样本未检测到该突变;PolyPhen、Align GVGD和SIFT软件预测结果表明,p.Gly349Arg突变很可能影响蛋白的正常功能。结论 LEPRE1基因c.1045G>A突变很可能是成骨不全症潜在的致病突变位点。     

N^＋离子注入诱变筛选胸腺嘧啶缺陷型大肠杆菌

利用N＋离子注入诱变大肠杆菌,经甲氧苄啶的选择性筛选,得到胸腺嘧啶营养缺陷型菌株。通过重组DNA技术将该突变株胸苷酸合成酶（TS）基因连接到载体pMD-18T质粒上,经测序发现TS基因第173个碱基由AT→CG,其相应的氨基酸由谷氨酸（E58）突变为丙氨酸（A58）。该突变株的获得为后续研究嘧啶核苷酸的代谢奠定了基础。     

四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析

目的调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒(HPV)33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料。方法采用PCR技术,并结合基因测序分析。结果对四川地区2003~2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6·7%;HPV33亚型1份,检出率为1·7%。对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变。结论HPV52型感染率在四川地区相对较高。与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近。     

中国部分地区甲型肝炎病毒基因型分析

目的　分析中国部分地区甲型肝炎病毒 (HepatitisAvirus,HAV)的基因型。方法　采自辽宁 (LN1、LN2、LN3 )、上海 (Lu3 8)和云南 (YN)甲型肝炎病人的粪便标本共 5份 ,从中分离纯化HAV并提取病毒RNA ,以逆转录 半嵌套聚合酶链式反应 (RT hnPCR)合成VP1 2A交接区及VP1氨基端 ,经克隆筛选后进行测序分析。结果　所分离到的 5株HAV野毒株VP1 2A交接区 168个核苷酸 (nt)的片段与IB亚型的野毒株HM175比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ;与IA亚型的日本野毒株AH1、AH2、AH3、FH1、FH2和FH3比较差异 <7.5 % ,因而均属IA基因亚型。但与IB亚型的野毒株MBB比较 ,LN1、LN3和Lu3 8在该区域的核苷酸差异 <7.5 %。进一步将LN1的VP1 2A交接区 3 3 9nt的片段、LN3和Lu3 8的VP1氨基端的核苷酸序列与MBB进行比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ,表明这 3株HAV仍属IA基因亚型。结论　所分离到的HAV野毒株LN1、LN2、LN3、Lu3 8和YN均属IA基因亚型     

东南亚地区寨卡病毒的流行及结构蛋白分子进化特征分析

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用MEGA 7. 0软件绘制系统进化树;将结构蛋白核苷酸翻译获得其相应的氨基酸序列,分析突变情况;统计不同株型间结构蛋白核苷酸突变和氨基酸替代位点;预测包膜蛋白第三结构域(envelop domainⅢ,ED-Ⅲ)的二级结构。结果 ZIKV在东南亚国家均有血清学感染或回顾性检测阳性报道,其中越南、泰国和新加坡ZIKV感染病例较多,疾病负担较为严重。系统进化树表明,东南亚ZIKV株均属于亚洲型,2016年新加坡株(序列号:KY241788)与2015年巴西株亲缘关系最近,1966年分离的马来西亚株与其他东南亚株亲缘关系较远。东南亚ZIKV各株型间衣壳蛋白(capsid protein,C)的碱基突变点为22处,突变率为6. 36%,造成非同义氨基酸突变点为19处,突变率为16. 52%。前膜蛋白(pre-membrane protein,prM)的碱基突变点为51处,突变率为10. 12%,造成非同义氨基酸突变点为37处,突变率为22. 02%。包膜蛋白(envelope protein,E)的碱基突变点为141处,突变率为9. 33%,造成非同义氨基酸突变点为101处,突变率为20. 04%。ED-Ⅲ二级结构预测结果显示,在该区域2株代表株有相同数量的蛋白结合位点,代表株2(1966 Malaysia KX377336)存在1个蛋白结合位点富集区(ED-Ⅲ:55-63),而代表株1(2014 Thailand KU681081)蛋白结合位点分布较均匀,代表株2的ED-Ⅲ存在1个二硫键,而代表株1不存在,代表株1(ED-Ⅲ:79-80)存在1个解螺旋,而代表株2不存在。结论通过病例统计分析、系统发育分析、蛋白质核苷酸及氨基酸序列比较分析、ED-Ⅲ二级结构预测,为研究东南亚地区ZIKV不同株型间的生物学和流行致病性差异提供参考。     

韶关地区人群ABO、Rh、MN、P及Jk~(a-b-)血型分布

目的了解韶关地区人群的ABO、Rh、MN、P及Jk(a-b-)血型的分布规律,为献血者招募及科学合理储存血液提供理论依据。方法采用U型96孔微量板法,对献血者血样进行ABO正反定型及Rh、MN、P血型检测,结果可疑者用试管法确认,并进行Jk(a-b-)表型筛查。结果ABO血型基因频率r>p>q,表型分布规律为O>A>B>AB;Rh(D)阴性占0.16%;A2亚型在AB型的检出率高于A型;MN血型的基因频率m>n,表型分布规律为MN>M>N;P血型的基因频率p2>p1,表型分布特征为P2>P1;Jk(a-b-)表型检出率为1∶22161.5。结论韶关地区血型分布以O型所占比例最多,且A型多于B型,A2亚型检出率高,Rh(D)阴性率低,Jk(a-b-)表型更低;应加大O型、A型献血者的招募并相应增加其库存量,特别是要加强Rh(D)阴性和Jk(a-b-)表型献血者的档案管理、Rh(D)阴性血液和Jk(a-b-)血液的冰冻保存工作及Jk(a-b-)人员的自身储血工作。     

高密度介质固相抗人球蛋白法检测孕妇ABO血型系统IgG抗体效价

目的探讨利用高密度介质固相抗人球蛋白法检测孕妇ABO血型系统IgG抗体效价的可行性。方法应用不完全抗体检测试剂盒(高密度介质固相抗人球蛋白法)检测40例O型血孕妇ABO血型系统IgG抗体效价,并与传统抗人球蛋白试管法进行对比。结果以IgG抗A(B)效价≥1:64定为阳性,两种方法的阳性检出率一致,均为50%(20/40);两种方法检测的抗体效价的几何均数差异无统计学意义(P>0.05);两种方法高度相关,r=0.9079(tr=13.36,P<0.001)。结论高密度介质固相抗人球蛋白法与传统抗人球蛋白试管法比较,操作简单,耗时短,结果准确,可应用于ABO血型系统IgG抗体效价的检测。     

我国狂犬病流行毒株JX08-45适应细胞培养后的生物学特性

目的鉴定我国狂犬病流行毒株JX08-45适应细胞培养后(命名为JX08-45CC株)的生物学特性。方法通过全基因组序列分析比对、小鼠脑内和外周攻毒试验和免疫原性试验,分别对JX08-45CC株的基因组特点、毒力和免疫原性进行鉴定。结果 JX08-45CC株的基因组序列与JX08-45株比对,共出现16个核苷酸突变点和7个氨基酸突变点,其中6个氨基酸变异发生在G蛋白(333位精氨酸未改变)编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变;在G蛋白氨基酸变异中,4个突变序列在其他细胞适应毒株CVS-11、CTN-1、Nishigahara、SAG2、Flury-LEP和SRV9中也普遍存在。JX08-45CC株培养滴度≥107TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为100%,滴度为102～106TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为20%～80%;滴度为105～108TCID50/ml时,外周肌肉接种小鼠,致死率为10%～70%;脑内和外周攻毒小鼠的潜伏期均为7～9 d,并于发病后24～48 h死亡。JX08-45CC株与狂犬病病毒CVS-11、ERA、SRV9和Flury-LEP株的中和抗体滴度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论已对JX08-45CC株的基因组序列、毒力和免疫原性等生物学特性进行了鉴定,为开发具有我国自主知识产权的兽用狂犬病灭活疫苗候选株奠定了基础。     

红细胞瞬间磁化试剂的制备与应用

目的研制用于ABO、RHD血型检测试剂的红细胞瞬间磁化试剂。方法采用共沉淀法制备磁性粒子,并检测其主要成分及粒径大小,用此磁性粒子制备红细胞瞬间磁化试剂,并分别进行各项检测。结果磁性粒子的主要成分为四氧化三铁,粒径100nm左右。该试剂的外观及特异性均合格,磁响应时间不超过30s,重复性较好,敏感性为98.20%,与试管法检测结果比较,差异无显著意义。结论红细胞瞬间磁化试剂可用于红细胞系统的血型检测。     

B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究

目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。     

ABO Blood Group System and Gastric Cancer: A Case-Control Study and Meta-Analysis

This study focuses on the association between the ABO blood group system and the risk of gastric cancer or Helicobacter pylori infection. The data for the ABO blood group was collected from 1045 cases of gastric cancer, whereby the patient underwent a gastrectomy in Ruijin Hospital, Shanghai. The information on the ABO blood group from 53,026 healthy blood donors was enrolled as control. We searched the Pubmed database on the relationship between ABO blood groups and gastric cancer risk for meta-analysis. In our case-control study, the risk of gastric cancer in blood group A was significantly higher than that in non-A groups (O, B and AB) (odd ratio, OR1.34; 95% confidential interval, CI 1.25–1.44). Compared with non-O groups (A, B and AB), individuals with blood group O demonstrated a reduced risk of gastric cancer (OR = 0.80; 95% CI 0.72–0.88). The proportion of H. pylori infection in blood group A individuals was significantly higher than that in non-A blood groups (OR = 1.42; 95% CI 1.05–1.93). We further combined our data with the published data of others, and crossreferenced the risk of gastric cancer with the blood type, finding consistent evidence that gastric cancer risk in the blood A group was higher than that in the non-A groups (OR = 1.11; 95% CI 1.07–1.15), and that blood type O individuals were consistently shown gastric cancer risk reduction (OR = 0.91; 95% CI 0.89–0.94). Our study concluded that there was a slightly increased risk of gastric cancer in blood group A individuals, and people with blood type A are more prone to be infected by H. pylori than other ABO blood type individuals, whereas, a slightly decreased risk of gastric cancer was identified in blood type O individuals.