小红豆抗菌蛋白的分离纯化及其功能活性

研究旨在从小红豆中分离纯化得到一种具有抗菌活性的蛋白,对其部分生物活性进行表征和研究。通过缓冲液抽提（NaAc-HAc,20 mmol/L,pH5.4）、硫酸铵分级沉降、Affi-gel blue gel亲和色谱、Sephadex SP C-25离子交换色谱及Sephadex G-50凝胶过滤色谱进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定其相对分子质量,并对其抗真菌活性进行表征。结果表明,从小红豆中分离纯化出的一种抗菌蛋白,经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,且其相对分子质量约为4 kDa,通过纯化的抗菌蛋白对来自茄子、甜瓜及苦瓜的尖孢镰刀菌的抑制实验,证明此抗菌蛋白具有较强的抗真菌活性。从小红豆中分离纯化出的一种分子质量约为4 kDa的抗菌蛋白,其对真菌具有抑制作用,且其抑制率对浓度的依赖性较高。      

活性玉米醇溶蛋白肽的分离纯化及其还原活性研究

碱性蛋白酶水解玉米醇溶蛋白,精制后的水解产物为玉米醇溶蛋白肽。根据玉米醇溶蛋白肽对邻苯三酚自氧化的抑制活性,采用葡聚糖凝胶层析法及高效液相层析(HPLC)法分离纯化得到活性蛋白肽的几种组分,探讨了几种组分对超氧阴离子自由基的清除活性。同时,以α-生育酚为阳性对照,探讨了活性蛋白肽及其各组分的还原力。结果表明,经SephedaxG-10葡聚糖凝胶层析分离所得组分4的抗氧化活性最强,具有较高的还原力;组分4富含谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、组氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸。     

鲜马奶乳清蛋白抗氧化肽分离纯化及其活性研究

分离纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性。以胰蛋白酶为酶源酶解鲜马奶乳清蛋白,采用3KDa、10KDa、30KDa不同分子量范围超滤膜对水解液进行分离,分子量在3~10KDa段的酶解液还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力,超氧阴离子清除能力均较高,分别为0.8949、63.19%、77.13%、70.08%。用SephadexG-50葡聚糖凝胶色谱纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性,得到A、B两个组分,B组分的还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力均高于A,分别为0.9814、55.28%、74.25%、56.67%。说明鲜马奶乳清蛋白酶解液具有一定的抗氧化活性,为鲜马奶抗氧化肽进一步纯化、结构鉴定及其生物活性研究提供基础。     

酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰产物的分离纯化及其抗氧化活性研究

本文采用木瓜蛋白酶在pH 6.5的条件下对酪蛋白进行水解2 h,水解产物测得DPPH 35.89%±0.13%,超氧阴离子清除能力为21.39%±0.33%,还原能力为53.00%±2.00%。分别导入Tyr、Phe和Try对水解产物进行修饰,结果表明类蛋白反应时间为6 h时,三种产物的抗氧化性最高,其中Try修饰产物抗氧化性最好,测得DPPH、超氧阴离子清除能力、还原能力分别46.84%±1.16%、34.10%±0.32%、70.00%±2%(p0.05)。随后,将Try修饰下的产物进行分离纯化,使用装有G-15葡聚糖凝胶的色谱柱,水为洗脱液,上样浓度为20 mg/mL,流速为0.5 mL/min,洗脱效果最佳,得到三个峰,分别测定其抗氧化性,结果表明峰二的抗氧化性最好,测得DPPH、超氧阴离子清除能力、还原能力分别为58.46%±0.57%、38.42%±0.47%和80.00%±0.02%(p0.05)。将峰二产物通过液相色谱进一步分离鉴定,得到单一峰,证明蛋白纯化下的产物纯度较高。最后,得到了高纯度的抗氧化肽。     

银杏种仁蛋白分离纯化及其抑菌活性

从银杏种仁中分离纯化具有抑菌活性的蛋白质,并分析其抑菌活性。结合抑菌活性分析,采用硫酸铵分级盐析、透析、纤维素DE-52阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤柱层析对银杏种仁蛋白（Ginkgo bilobaseed protein,GBSP）进行分离纯化,得到一种抑菌蛋白GBSPⅠ-A。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）检测结果显示,该蛋白呈单一条带,其分子质量约为42.80 kD;Superdex G-75柱层析结果显示GBSPⅠ-A呈单一对称峰,高效凝胶渗透色谱测定其分子质量为39.32 kD;该蛋白对肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、戴尔有孢圆酵母及黑曲霉的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）分别为20、20、20、12 mg/mL。     

菜籽蛋白水解物的分离纯化及抗肿瘤活性研究

本研究将菜籽蛋白通过碱性蛋白酶-风味蛋白酶分步酶解制备得到菜籽蛋白水解物(RPH),在经过超滤、葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-15)以及半制备液相(RP-HPLC)分离纯化得到各级分离组分。采用MTT比色法分析菜籽蛋白水解物各组分RPHs(MW1 ku)对人体肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MBA-MD-231及人体结肠癌细胞Caco-2的体外抗增殖活性。当RPHs质量浓度为50～1 000μg/mL时,RPHs对HepG2细胞、MBA-MD-231细胞及Caco-2细胞均有一定的抑制作用,且抑制效果与样品浓度之间呈现出剂量依赖性;其中,HepG2细胞对RPHs的作用最为敏感。经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到2个洗脱峰,收集并测定其活性,发现组分RPHs-F2具有更强的抗肿瘤细胞增殖活性;再进一步对其经半制备液相分离得到的组分进行体外抗增殖活性分析发现,除组分RPHs-F2-4外,其他3个分离组分都具有显著的抑制作用,而组分RPHs-F2-3对HepG2细胞具有最高的体外增殖抑制率,当作用质量浓度为1 000μg/mL时,抑制率为(51.53±5.59)%。因此认为菜籽蛋白酶解物分离组分RPHs-F2-3具有较好的抗肿瘤活性,可以作为功能性成分用于抗肿瘤相关的功能食品及保健品的开发。     

谷物蛋白分离纯化方法的研究进展

谷物蛋白由于具有高度异质性、低溶解度和容易聚集等因素,导致其非常难以分离纯化和鉴定。为充分了解谷物蛋白的结构与功能,实现对谷物蛋白的分离纯化,阐述了几种常见谷物蛋白的组成及特点,对近年来国内外有关谷物蛋白的分离纯化原理与模式的研究进展进行了综合评述,同时展望今后谷物蛋白分离纯化的研究方向。     

冰核活性细菌中冰核活性蛋白质的分离与纯化的研究

解决生物冰核应用中的安全问题,从产冰核活性的细菌中分离纯化天然冰核活性蛋白质是一条重要途径,对其应用具有重要价值。本研究以冰核活性细菌(Erwinia herbicola 10025A)为实验菌种,经培养获得高浓度发酵液,离心处理后,采用超声波破碎、凝胶层析的方法,分离纯化得到了Erwiniaherbicola10025A的I型冰核活性蛋白质。该蛋白质经SDS-PAGE的分析鉴定,证实了该冰核活性蛋白质的分子量为150kD左右。     

芝麻菜种子抗菌蛋白的纯化及其抗菌活性

本文旨在从芝麻菜种子中分离纯化得到一种具有抗菌活性的蛋白,并对其抗菌活性进行研究。通过SP-Sepharose离子交换色谱、Mono S^TM 5/50GL和Superdex^TM 75 10/300GL快速蛋白液相色谱进行分离纯化,经Tricine-SDS-PAGE电泳分析;采用纸片扩散法、荧光染色法,对其抗菌活性和稳定性进行研究。结果表明,从芝麻菜种子中纯化一种抗菌蛋白ZSU2,经Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定达到电泳纯,相对分子质量约为12 kDa;ZSU2蛋白对小白菜炭疽病菌等12种真菌具有较强的抑制作用,抗菌活性在pH1~13、温度0~100℃稳定,且具有较强的金属阳离子耐受能力;此外,ZSU2蛋白能引起菌丝尖端几丁质积累和细胞膜选择透过性的改变。     

鳕鱼多肽的抗氧化活性及其分离纯化

研究了鳕鱼多肽的抗氧化活性及分离纯化.为获得高纯度的抗氧化肽,将鳕鱼多肽依次通过超滤、凝胶过滤层析、阴离子交换层析(Q-FF)和反相高效液相色谱层析(RP-HPLC)进行分离纯化.结果表明:鳕鱼多肽具有很强的清除羟自由基的能力、清除DPPH的能力和还原能力;经Q-FF柱层析分离得到了B1、B2和B3 3个组分,B2经RP-HPLC检测显示为单一峰,获得了纯度较高的鳕鱼多肽,这为鳕鱼多肽的开发利用提供了科学理论依据.     

大豆蛋白质的构造和功能特性(上)

介绍了大豆蛋白质的组成，氨基酸成分、分子结构、溶解性，着重分析了大豆蛋白的食品功能特性中的乳化性，起泡性、水化性和胶凝性，及其相关关系和与组成结构的关系。     

番茄籽蛋白的功能和结构

蛋白经加水溶解（5％W／V）和加热至50℃，氮溶指数NSI最高为30．02％。对可溶性番茄籽蛋白功能性质的测定表明，当乳化温度由30℃上升至50℃时，其乳化能力和乳化稳定性均随之上升，而当乳化温度上升至60℃时，乳化能力和乳化稳定性均显著下降；其起泡性略优于大豆分离蛋白，而泡沫稳定性不如大豆分离蛋白。对番茄籽蛋白的氨基酸组成分析表明，番茄籽蛋白氨基酸种类齐全，可以作为强化赖氨酸的蛋白源。SDS—PAGE电泳图显示，可溶性番茄籽蛋白中70％为盐溶性蛋白，水溶性蛋白相对分了质量分别为39．2、30．1和15．8kDa：盐溶性蛋白相对分子质量分别为66．1、28．1和16．8kDa；醇溶性蛋白相对分子质量分别为30．3和17．8kDa。     

茶多酚-肌原纤维蛋白结构和功能特性的研究进展

茶多酚独特的化学结构使其具有抗氧化、抑菌、调节免疫功能等活性.茶多酚与肌原纤维蛋白的相互作用会导致2种化合物的结构和功能特性发生变化,造成肌原纤维蛋白凝胶特性的改变.文章介绍了茶多酚-肌原纤维蛋白的相互作用对凝胶微观结构的影响、蛋白质功能基团含量的影响、功能特性的影响以及多酚和蛋白质相互作用方式的研究进展,以期为茶多酚...     

核桃粕蛋白提取纯化工艺优化及其功能性质分析

为获得优质的核桃粕蛋白,本研究通过单因素实验和响应面法分别对碱溶酸沉法提取核桃粕蛋白工艺和糖化酶纯化核桃粕蛋白工艺条件进行优化,并对其溶解性、吸水性、乳化性等功能性质进行了分析。结果表明,最佳提取工艺条件为：pH12,温度55℃,时间90 min,料液比1:40 g/mL。在此条件下,核桃粕蛋白的提取率可达到81.89%±1.64%,其沉降点是pH4.5。最佳纯化工艺条件为：pH4.5,料液比1:40 g/mL,酶解时间129 min,酶解温度53℃,加酶量0.4%。经此条件纯化的核桃粕蛋白的纯度可达到94.48%±1.83%。核桃蛋白的功能性质结果表明,中性条件下其溶解度为24.82%,吸水性3.06 g/g,吸油性3.15 g/g,乳化性16.10 m2/g,乳化稳定性为38.87 min,起泡性为30.53%,起泡稳定性为75.44%,在同一pH条件下,纯化后的核桃蛋白具有较好的功能性质。     

盐提和碱提酸沉两种方法提取腰果蛋白的结构及其功能性质分析

使用盐提和碱提酸沉两种提取方法从腰果脱脂粉中提取分离蛋白,并对比研究盐提腰果蛋白(CNSPI)和碱提酸沉腰果蛋白(CNPI)的结构和功能性质。结果表明CNPI和CNSPI在结构、微观形态、功能性质和营养价值等方面有明显差异,CNSPI蛋白含量较高,溶解性和乳化性也优于CNPI,CNPI表现出较好的起泡性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明两种提取方法对分离蛋白的亚基组成没有显著影响;本研究使用氨基酸分析仪来测定分离蛋白的营养价值,结果表明两种方法提取的腰果蛋白氨基酸含量无明显差异,其营养价值都远高于腰果脱脂粉。表面疏水性测定结果表明CNPI的表面疏水性显著高于CNSPI。扫描电子显微镜结果表明CNSPI呈现出大量的片状微观结构,而CNPI呈现出少量球状和薄片结合成的不规则形状。圆二色光谱结果显示CNSPI和CNPI中主要二级结构是β-折叠,CNPI中有较多的无规卷曲,约占29.3%,CNSPI有较多的α-螺旋(27.0%)。在中性条件下,CNPI的起泡性为119.00%,CNSPI的乳化性达到30.14 m2/g。     

亚麻籽蛋白及其活性肽的研究进展

亚麻籽蛋白含有人体所必需的八种氨基酸,其氨基酸模式与大豆蛋白相当,是一种优质的植物蛋白。本文综述了亚麻籽蛋白及其活性肽的研究进展,详细阐述了亚麻籽蛋白的功能特性以及活性肽的生理活性,并对亚麻籽蛋白及其活性肽的提取制备方法进行了综述。     

水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

目的 探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构.方法 比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法.用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定.结果 PST色谱介质性能最好.在流速2.0 mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%.测得该蛋白质的精确Mr为41 473,与其理论Mr相符.肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%.结论 确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确.     

苦荞麦抗肿瘤蛋白的分离纯化及结构分析

本研究采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换色谱、Sephadex G-100凝胶过滤色谱和SephacrylS-200凝胶过滤色谱对苦荞麦水溶性蛋白质(TBWSP)逐步分离纯化,并结合细胞实验,筛选出苦荞麦水溶性蛋白质中体外抗肿瘤活性的有效组分TBWSP31。体外抗肿瘤活性实验表明,TBWSP31对人乳腺癌细胞株Bcap37细胞有明显的增殖抑制作用,并且存在时间效应和剂量效应。SDS-PAGE表明,TBWSP31为单一组分,其亚基的相对分子质量为57000。CD分析表明,TBWSP31的α-螺旋的含量为33.9%,β-折叠的含量为22.8%,β-转角的含量为11.3%,无规卷曲的含量为32.0%。     

重组融合蛋白MBP-BSH 在大肠杆菌中的表达及其纯化、功能鉴定

选择IF2融合标签,另选择含SUMO、GST、NusA和MBP融合标签的质粒构建表达载体。SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Escherichia Rosetta(DE3) (pLS932-BSH)的诱导表达细胞提取液上清出现了明显的融合蛋白MBP-BSH条带,经诱导表达条件优化后,MBP-BSH可溶性大幅度提高。用Ni-NTA Resin和Amylose Resin分别进行目标蛋白纯化,结果显示前者效果更好,并且C端融合His-Tag更有利于其与Ni离子结合,MBP-BSH蛋白纯化量更大,杂带更少。茚三酮显色反应测定酶活力,结果显示纯化后的MBP-BSH的酶比活力为2.4282U/mg。     

食用菜籽蛋白的提取和纯化研究进展

详细介绍了菜籽蛋白的组成与结构、营养价值及提取和纯化的研究进展,阐述食用菜籽蛋白开发的可行性,以期引起人们对菜籽蛋白开发的重视.