产亚油酸异构酶的乳酸菌的筛选

对16株乳酸菌产亚油酸异构酶(linoleate isomerase)的能力进行分析,紫外分光光度法和气相色谱法分析发酵液中的共轭亚油酸(CLA),筛选出产亚油酸异构酶的乳酸菌,PCR扩增筛选出菌株的亚油酸异构酶基因,并对其进行序列分析.结果显示,通过紫外分光光度法检测16株乳酸菌中有9株菌可将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA);气相检测6株乳酸菌的发酵液中存在cis-9,trans-11 CLA和trans-10,cis-12 CLA两种同分异构体(各占CLA总产量的50％);成功扩增出鼠李糖乳杆菌与亚油酸异构酶密切相关的肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)基因片段.     

嗜酸乳杆菌亚酸异构酶提取方式的研究

共轭亚油酸是一种具有多种生理活性的天然脂肪酸,亚油酸异构酶能特异性地转化合成CLA,克服了化学合成法的诸多缺点,但系统全面地研究胞内亚油酸异构酶破壁提取方式的很少.通过正交试验、方差分析等方法研究了嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的提取方式,确定了超声波法、化学法和溶茵酶法等的最佳提取条件和各影响因素的显著性,并对3种方法及复合法进行了比较.结果表明,溶茵酶法 超声波法破壁提取亚油酸异构酶效果最佳,酶活力最高可达82.6U.     

保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的研究

对保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的提取和性质进行了研究.利用超声波对乳酸杆菌细胞进行破碎,以提取细胞中的亚油酸异构酶,并就超声波破碎条件对亚油酸异构酶释放的影响进行了研究.通过单因素试验和正交试验得出保加利亚乳杆菌的最佳超声破碎条件为：间歇破碎次数80次（每次破碎3s,中间间隔4s）,破碎菌液体积60mL,菌悬液浓度15g/50mL,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.8,NaCl浓度0.3mol/L.保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的粗酶液经硫酸铵盐析、超滤、凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后,酶的纯化倍数为23.00.经SDS-PAGE后只显示一条谱带,分子量约为33000D.对保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的部分酶学性质也进行了研究,结果表明：能专一性地将亚油酸转化为共轭亚油酸,转化产物中活性异构体的比例达到93.626%.     

保加利亚乳杆菌诱导产亚油酸异构酶条件研究

亚油酸异构酶可由保加利亚乳杆菌经诱导产生,可以将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA)。本实验对诱导保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶的条件进行研究,利用紫外和气质联用仪(GC-MS)检测所生成的CLA。结果表明：在培养基中添加1.5‰(V/V) LA 时所产酶的共轭亚油酸转化率最高;温度为36℃,培养36h 为较适的培养条件;单独添加0.1%(m/V)的乳糖或0.1%(m/V)的氯化钠有利于诱导产酶;在培养基中直接添加LA 的效果优于培养3至12h 后再进行添加。诱导所产酶可将LA 转化为CLA,且含有9c,11t-CLA 异构体。     

共轭亚油酸的生理功效及其在乳品中的强化途径

综述了共轭亚油酸(CLA)在抗癌、降低血清胆固醇、强化免疫、促生长、抑制脂肪沉积等的方面的生理作用；阐述了乳及其制品中共轭亚油酸产生的特点；讨论了发酵乳制品中影响共轭亚油酸产生的各种因素以及菌株产生亚油酸异构酶的条件，比较了不同来源的乳酸菌产共轭亚油酸的能力和在乳中的强化模式；最后比较了常用的共轭亚油酸检测分析方法及其效果。     

透性化处理对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶表观活力的影响

来源嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶是胞内酶,完整的细胞呈现较低的酶活。研究了乙醇、乙醚、甲苯、溴化十六烷三甲基铵(CTAB)等透性剂对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶活力的影响。结果表明,经过透性化处理的细胞亚油酸异构酶活力显著提高,其中最好的透性剂为CTAB。当CTAB的浓度为1%,30℃保温20～30min,酶活高达405.6U/g,是超声波破碎的细胞表观酶活的5.4倍。透性化细胞中亚油酸异构酶热稳定性提高,60℃保温2h,残余酶活为80%。透性化细胞生物转化共轭亚油酸转化率达84.5%,用透性化细胞可有效转化亚油酸为共轭亚油酸。     

优化乳杆菌高产共轭亚油酸的研究进展

共轭亚油酸(CLA)是亚油酸(LA)的一组位置和空间异构体的总称,其中具有生理活性的异构体是c9,t11-CLA和t10,c12-CLA,它们具有丰富的营养价值和医药价值。在乳球菌属和链球菌属等乳酸菌、丙酸杆菌、瘤胃细菌以及其它菌属中,分离纯化得到的亚油酸异构酶,可催化LA异构化为CLA,利用酶法合成CLA可以有效弥补传统化学合成法的缺陷。本文概述了近年来国内外利用紫外、微波、等离子体诱变、离子注入等物理或化学方法诱变、改造亚油酸异构酶,优化产酶条件和酶学特性,还阐述利用定点突变、基因敲除等基因工程方法,对生产菌株进行改造和培养条件优化,提高CLA产量的相关研究,为进一步筛选出高产共轭亚油酸菌株和CLA的产业化应用提供理论依据。     

超临界CO2体系中固定化亚油酸异构酶催化合成共轭亚油酸

以固定化亚油酸异构酶和亚油酸(LA)为原料,在考察超临界CO2(SC-CO2)处理对酶稳定性影响的基础上,采用单因素试验和响应面法研究SC-CO2中LA质量浓度、反应温度、压力、反应时间对共轭亚油酸(CLA)合成的影响。结果表明:固定化亚油酸异构酶在SC-CO2压力小于30MPa,处理温度低于40℃,处理时间小于2 h时,相对酶活较高,具有较好的稳定性;响应面法优化CLA合成条件为LA质量浓度0.05 g/mL,反应温度36℃,压力30 MPa,反应时间1.5 h;在此条件下,CLA的含量为60.58 mg/g;固定化亚油酸异构酶重复使用3次,CLA保持较高的含量。     

植物乳杆菌ZS2058中亚油酸异构酶的定位研究

植物乳杆菌ZS2058是本实验室从泡菜中筛选到的一株具有亚油酸异构酶活性的乳酸茵.本文对植物乳杆茵ZS2058中亚油酸异构酶的部分粗酶性质进行了考察,建立了初酶活性检测方法,在此基础上对此亚油酸异构酶在细胞中的定位进行了研究,这将为后续分离纯化此亚油酸异构酶提供理论依据与指导.考察的结果是超声波破碎获得亚油酸异构酶初酶液的最佳条件为破碎功率400W,破碎时间7.5min(破碎5s,间歇9s).初酶活性测定时的最适亚油酸底物浓度为0.08 mg/mL;EGTA等金属螯合剂及Ca2+对亚油酸异构酶活性的影响均不显著;粗酶液经超高速离心分级沉淀和加入去垢剂Triton X-100提取的实验结果表明,该亚油酸异构酶为细胞膜结合酶.     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究

亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考。通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-802.00ml,反应温度37℃,反应时间3h。     

固定化亚油酸异构酶制备及其性质

以海藻酸钠、壳聚糖为载体,分别采用直接包埋、交联-包埋法制备固定化亚油酸异构酶;研究酶的固定化条件和固定化酶的部分性质。结果表明：以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋法以戊二醛为交联剂时固定化效果较好;最佳固定化条件为：海藻酸钠质量浓度为3g/100mL,戊二醛质量浓度为0.3g/100mL,CaCl2质量浓度为2g/100mL;固定化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.0;与游离酶相比,固定化酶的热稳定性显著提高,温度在20～60℃之间较稳定,pH值在2～8之间表现出较好的酸碱耐受性;固定化亚油酸异构酶的Km为0.36mg/mL。连续操作6次固定化相对酶活力仍保持70.6%,与游离酶相比,固定化亚油酸异构酶催化效率约提高了50%。     

影响植物乳杆菌A6-1F产亚油酸异构酶条件的研究

诱变选育的高产菌株A6-1F的适宜产酶条件为:种子液中添加0.4mg/mL的LA进行诱导,种子液的菌龄20h,底物浓度0.75mg/mL,接种量4%,pH7.0,培养时间32h。在适宜的条件下,亚油酸异构酶的活性为337.4U/mL。     

Seasonal influences on stratum corneum ceramide 1 fatty acids and the influence of topical essential fatty acids

Ceramide 1 is the main repository of stratum corneum linoleic acid, and changes in the levels of ceramide 1 linoleate are associated with cutaneous abnormalities: essential fatty acid deficiency, atopic dermatitis and acne. We have previously reported seasonal variation in stratum corneum lipids where lipids, particularly ceramides, are very much reduced in winter which probably influences the appearance of skin xerosis in this season. However, investigations into the seasonal variation in ceramide 1 fatty acid levels and the effects of topical essential fatty acids on the composition of these lipid species have not been conducted in healthy subjects. We determined the composition of stratum corneum ceramide 1 esterified fatty acids in leg skin from Caucasian women in winter and summer and also investigated the effects of topical triglycerides rich in linoleic acid on stratum corneum ceramide 1 fatty acid levels in winter. A dramatic seasonal variation was observed. Whereas decreased levels of linoleic acid and some saturated fatty acids (C-15 and C-24) were observed in the winter months, increased levels of oleic acid were found. Nevertheless, it was possible to normalize the levels of stratum corneum ceramide 1 linoleate following topical application of formulations containing linoleic acid-rich triglycerides for 4 weeks. The reduction in ceramide 1 linoleate may lead to impaired stratum corneum function and increased susceptibility to skin xerosis in winter. However, by using formulations containing linoleic acid esters it is possible to correct these changes and possibly improve barrier resilience.     

植物乳杆菌p-8转化亚油酸为共轭亚油酸的分析

研究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）p-8的菌体、菌体破碎液和重组亚油酸异构酶系转化亚油酸（linoleic acid,LA）为共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA）的能力和机制。结果表明：L. plantarum p-8在含有LA的MRS上清液和菌体破碎液体外催化LA时,都可以低效产生cis9,trans11-CLA（c9,t11-CLA）、trans10,cis12-CLA（t10,c12-CLA）和trans9,trans11-CLA（t9,t11-CLA）,但菌体中只有很少的t10,c12-CLA。实时聚合酶链式反应结果表明,亚油酸异构酶系的表达水平较低可能是CLA产量较低的原因。独立表达的重组亚油酸异构酶系成员、黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin denine dinucleotide,FAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸都存在才可完成LA转化为c9,t11-CLA、t10,c12-CLA和t9,t11-CLA,转化途径与L. plantarum AUK1009一致。L. plantarum p-8的亚油酸水合酶经同源建模后有3 个结构域,底物结合位点与FAD位点位于3 个结构域连接处的疏水空腔中,M76和Y180是2 个必需基团。     

植物乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化及其性质研究

经硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤,由植物乳杆菌(LactobacillusplantarumL 2 9)分离纯化得到亚油酸异构酶,分子量为4 3ku。对其酶学性质进行研究,结果表明,温度37℃、pH 6 0时酶活性较高;Co2 + 、Fe2 + 可提高酶的活性,Cu2 + 、Zn2 + 则对酶活力有抑制作用;该酶作用于亚油酸的Km=2 5 3×10 -5mol/L ,Vmax=2 5 7×10 -8mol/ (min·mg)。     

Bacterial Production of Conjugated Linoleic and Linolenic Acid in Foods: A Technological Challenge

Conjugated linoleic acid (CLA) and conjugated linolenic acid (CLNA) isomers are present in foods derived from ruminants as a result of the respective linoleic acid (LA) and α-linolenic acid (LNA) metabolism by ruminal microorganisms and in animals’ tissues. CLA and CLNA have isomer-specific, health-promoting properties, including anticarcinogenic, antiatherogenic, anti-inflammatory, and antidiabetic activity, as well as the ability to reduce body fat. Besides ruminal microorganisms, such as Butyrivibrio fibrisolvens, many food-grade bacteria, such as bifidobacteria, lactic acid bacteria (LAB), and propionibacteria, are able to convert LA and LNA to CLA and CLNA, respectively. Linoleate isomerase activity, responsible for this conversion, is strain-dependent and probably related to the ability of the producer strain to tolerate the toxic effects of LA and LNA. Since natural concentrations of CLA and CLNA in ruminal food products are relatively low to exert their health benefits, food-grade bacteria with linoleate isomerase activity could be used as starter or adjunct cultures to develop functional fermented dairy and meat products with increased levels of CLA and CLNA or included in fermented products as probiotic cultures. However, results obtained so far are below expectations due to technological bottlenecks. More research is needed to assess if bacterial production kinetics can be increased and can match food processing requirements.     

瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒p UCm-T-LAI,将重组质粒p UCm-T-LAI和表达质粒p ET-Dsb A同时进行双酶切,连接得到重组表达载体p ET-Dsb A-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。