牦牛乳酪蛋白肽分离组分对DPP-4活性的抑制作用

以牦牛乳酪蛋白为原料,研究牦牛乳酪蛋白水解产物及其分离组分对二肽基肽酶-4(DPP-4)活性的抑制作用。以木瓜蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白,水解产物采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱进行分离,以DPP-4抑制率为指标,分析水解产物和分离组分对DPP-4活性的抑制作用。结果表明,木瓜蛋白酶水解0.5 h获得的水解产物表现出最强的DPP-4抑制活性,抑制率可达(59.57±0.23)%,半抑制浓度(IC50)为0.67 mg/m L。经Sephadex G-25凝胶过滤分离将木瓜蛋白酶水解产物分成4个组分,其中第3个组分对DPP-4抑制作用最强,IC50值为0.583 mg/m L。研究结果表明,与牦牛乳酪蛋白相比,其水解产物的DPP-4抑制活性显著增强,经凝胶过滤色谱分离后的水解产物分离组分具有更强的DPP-4抑制活性。     

κ-酪蛋白酶解物对双歧杆菌的促生长效果研究

研究了κ-酪蛋白的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝乳酶酶解产物以及商业化酪蛋白糖巨肽(GMP)对双歧杆菌(BBMN68和Bb12)的体外促生长作用。结果表明,κ-酪蛋白的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝乳酶酶解产物以及GMP对两株双歧杆菌均有促生长作用,其中作用最强的是碱性蛋白酶酶解产物,显著高于木瓜蛋白酶酶解产物、凝乳酶酶解产物和GMP的作用效果(P<0.05),并且GMP与κ-酪蛋白凝乳酶酶解产物的促生长作用无显著性差异(P>0.05)。     

乳酸菌代谢物中二肽基肽酶-4抑制剂的分离纯化及鉴定

筛选出具有抑制二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)活性的植物乳杆菌BLP12,将其代谢物通过有机溶剂萃取、超滤膜、凝胶色谱和高效液相色谱等一系列方法进行分离纯化,利用底物N-甘氨酰脯氨酰-对硝基苯胺盐酸盐与DPP-4在波长405 nm左右强烈的光吸收测定DPP-4活性,选择抑制活性强的部分用液相色谱-质谱联用仪鉴定样品中的物质,质谱共鉴定出61种物质,其中十二烷基硫酸盐是已有报道的DPP-4抑制剂。     

响应面法优化酶法制备驴血红蛋白源二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽

食源性二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制活性肽成为近年来健康产品研究的方向之一.本研究以驴血红蛋白为原料,采用计算机模拟蛋白水解方法筛选最佳蛋白酶,研究酶解时间、温度和加酶量对蛋白水解度(degree of hydrolysis,DH)和酶解产物DPP-Ⅳ抑制率的影响,响应面优...     

芹菜素对二肽基肽酶Ⅳ的抑制作用及其机制

目的：探究芹菜素降血糖作用的机制。方法：考察不同浓度的芹菜素对糖尿病治疗靶点二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)的抑制活性，并进一步利用酶动力学、荧光光谱、分子对接等实验手段明确了芹菜素对DPP-4的抑制类型以及作用机制。结果：芹菜素对DPP-4具有可逆的非竞争性抑制作用，其半数抑制浓度为(62.45±1.22)μg/mL;芹菜素主要通过氢键和范德华力作用与DPP-4形成基态复合物，造成DPP-4内在荧光的猝灭；芹菜素可与DPP-4分子中VAL-207、ARG-358、TYR-662残基形成较强的氢键，并与周围众多的疏水残基存在疏水作用，共同维持该复合物的结构。结论：本试验结果可为芹菜及芹菜素类降血糖产品的开发提供科学依据。     

以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ的酶活力分析体系的建立

葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase 4,DPP-4)是Ⅱ型糖尿病治疗中2种重要的靶向酶。这两种商品化酶价格昂贵且主要来源于微生物,难以有效用于两种酶抑制剂的筛选,而这两种酶均普遍存在哺乳动物的小肠中。为了获得经济有效、来源于哺乳动物体内的α-葡萄糖苷酶和DPP-4,本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,对比分析了猪小肠不同部位黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4的活力。以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶反应体系,并且利用这两种酶的阳性药(阿卡波糖和抑二肽素A(diprotin A,IPI))分别进行了抑制率验证和评价。阿卡波糖对商品和猪回肠源α-葡萄糖苷酶的半数有效抑制质量浓度(median inhibition concentration,IC50)分别是1.102 4、0.244 7 mg/mL;IPI对商品和猪回肠源DPP-4的IC_(50)分别为19.119 7、41.268 4 μg/mL。通过比较发现,猪回肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4比活力分别为0.084 1、0.053 4 U/mg,在3种黏膜提取物中均为最高,因此选择猪回肠黏膜提取物作为商品化α-葡萄糖苷酶和DPP-4的替代物进行抑制剂的筛选。     

仿刺参胶原蛋白源二肽基肽酶抑制肽虚拟筛选及分子对接研究

目的 采用生物信息学和分子对接方法筛选仿刺参胶原蛋白来源的二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制肽。方法 以仿刺参胶原蛋白序列为对象,进行生物信息学分析和计算机辅助虚拟酶解,基于生物毒性、致敏性、水溶性及吸收、分配、代谢、排泄及毒性(absorption,distribution,metabolism,excretion,toxicity,ADMET)预测,筛选得到6条具有潜在生物活性的寡肽,氨基酸序列分别为CD、CQ、CS、GR、SM、MDG,进一步通过分子对接分析肽段与DPP-Ⅳ的结合活性,并分析其结合位点及方式。结果 生物信息学分析表明仿刺参胶原蛋白是生物活性肽的潜在优良来源,经木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及模拟胃肠道虚拟水解后能够释放出DPP-Ⅳ抑制肽;分子对接表明俩条新肽段CS、SM通过氢键、疏水相互作用分别与DPP-Ⅳ的S1、S2活性口袋结合。结论 本研究提供了一种快速筛选刺参胶原蛋白中DPP-Ⅳ抑制肽的方法。     

二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的筛选研究进展

二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ;EC3.4.14.5/CD26)属于丝氨酸肽酶中脯氨酸寡肽酶家族成员之一,是目前糖尿病新药研发的热点之一。体内外研究显示胰高血糖素样肽-1(GLP-1)具有较好的抗糖尿病效应,但是由于其体内被以DPP-Ⅳ为主的酶降解,半衰期仅2min,因而限制了其在临床上的应用。研究表明DPP-Ⅳ抑制剂能延长GLP-1在体内的半衰期,从而有效地降低血糖。     

三种乳源生物活性肽的二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性研究

通过从分化成熟的人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中提取二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)建立体外筛选DPP-Ⅳ抑制剂的模型,用Ile-Pro-Ile(IPI)作为阳性对照测定其半抑制质量浓度(IC_(50))评价该模型,并测定3种来源于酪蛋白的四肽Leu-Pro-Leu-Pro(LPLP)、Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)和Asp-Gln-Leu-Gln(DELQ)的抑制率,研究了DPP-Ⅳ抑制肽的抑制类型和复合抑制作用。实验结果表明:IPI的IC_(50)为(31.51±1.51)μg/m L,与文献报道的相近,证明该模型可以应用于DPP-Ⅳ抑制剂的筛选;LPLP的IC_(50)为(0.84±0.06)mg/m L,QEPV的IC_(50)为(14.45±1.07)mg/m L而DELQ的IC_(50)大于100 mg/m L,即LPLP和QEPV具有一定的抑制作用;LPLP和QEPV的作用均为非竞争性机制,并且两种多肽联合对DPP-Ⅳ抑制作用为协同抑制作用。     

具有α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ抑制作用降糖益生菌的筛选

以实验室保藏的13株乳酸杆菌为研究对象,研究其细胞代谢物(cell-free,excretory,supernatants,CFS)和细胞内容物(cell-free,extracts,CFE)对α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ)的抑制活性;然后对酶抑制率较高的菌株进行益生特性评价,以期筛选出具有潜在降糖作用的益生菌。结果表明,13株乳酸杆菌的CFS对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,抑制率为0%～12.13%;CFE对α-葡萄糖苷酶无抑制作用。13株乳酸杆菌CFS和CFE对DPP-Ⅳ均表现出一定的抑制作用,抑制率分别为0%～7.13%和0%～55.42%。选取酶抑制率较高的嗜酸乳杆菌KLDS1.1003、KLDS1.0901和KLDS1.0902进行益生特性的研究。其中嗜酸乳杆菌KLDS1.0901表现出较高的酸耐受性,嗜酸乳杆菌KLDS1.1003表现出较高的胆盐耐受性和疏水性。主成分分析表明嗜酸乳杆菌KLDS1.1003的综合性能最佳:其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性可达10.29%;对DPP-Ⅳ的抑制率为CFS,7.13%,CFE,50.14%;于pH,2.0的条件下孵育1,h后,存活率达到51.55%;在0.3%的胆盐条件下孵育,滞后时间为2.26,h;在二甲苯、乙酸乙酯和氯仿溶剂中的疏水率分别为134.33%、20.51%和344.08%,总体上嗜酸乳杆菌KLDS1.1003具有较高的酶抑制活性和良好的益生特性。     

海参二肽基肽酶Ⅳ抑制肽的酶解制备及结构鉴定

通过抑制二肽基肽酶IV(Dipeptidyl-peptidase IV, DPP-IV)的活性,从而减少GLP-1的降解,提高血液中胰岛素的水平,是控制血糖水平的一种重要手段。本文以海参(Holothariatubulosa)为原料,通过探究蛋白酶种类、加酶量和酶解时间对酶解产物DPP-IV抑制活性、蛋白回收率和水解度的影响,确定了海参DPP-IV抑制肽的制备条件,并进一步测定了其分子量分布和总氨基酸组成,最后通过UPLC-MS/MS鉴定了其潜在的活性肽序列。结果发现,木瓜蛋白酶与复合蛋白酶1:1的复配酶解具有最佳的酶解效果,其产物的得率和DPP-IV抑制活性均最高,且在加酶量为干海参质量的1%,酶解时间为4 h时,海参酶解产物在终浓度为2 mg/mL时的DPP-IV抑制率为66.97%,蛋白回收率为76.25%,水解度为6.10%。酶解产物的分子量大都小于5000 u,且富含脯氨酸(Pro)和丙氨酸(Ala)等与抑制DPP-IV活性有关的氨基酸。将获得的酶解物中的肽段进行液质联用检测,并通过Mascot分析筛选得到28条具DPP-IV抑制肽的肽序列,分子量在500～1936 u。本实验结果为以海参为原料进行降血糖产品的开发奠定了基础。     

以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV的酶活力分析体系的建立

α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidase 4,DPP-4）是II型糖尿病治疗中2 种重要的靶向酶。这两种商品化酶价格昂贵且主要来源于微生物,难以有效用于两种酶抑制剂的筛选,而这两种酶均普遍存在哺乳动物的小肠中。为了获得经济有效、来源于哺乳动物体内的α-葡萄糖苷酶和DPP-4,本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,对比分析了猪小肠不同部位黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4的活力。以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶反应体系,并且利用这两种酶的阳性药（阿卡波糖和抑二肽素A（diprotin A,IPI））分别进行了抑制率验证和评价。阿卡波糖对商品和猪回肠源α-葡萄糖苷酶的半数有效抑制质量浓度（median inhibition concentration,IC50）分别是1.102 4、0.244 7 mg/mL;IPI对商品和猪回肠源DPP-4的IC50分别为19.119 7、41.268 4 μg/mL。通过比较发现,猪回肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4比活力分别为0.084 1、0.053 4 U/mg,在3 种黏膜提取物中均为最高,因此选择猪回肠黏膜提取物作为商品化α-葡萄糖苷酶和DPP-4的替代物进行抑制剂的筛选。     

牦牛骨免疫活性肽的酶解制备研究

本文以脾淋巴细胞增殖率作为评价指标,比较了碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶对利用牦牛骨制备免疫活性肽的酶解效果。在单因素实验的基础上,采用正交实验优化免疫活性肽酶解制备条件。结果表明,木瓜蛋白酶适合酶解牦牛骨制备免疫活性肽,其最佳酶解工艺参数为:酶解时间4 h,p H6.5,酶解温度60℃,酶与底物比5000 U/g,底物质量浓度6 g/100 m L,对应的活性肽浓度为1.92 g/100 m L,此条件下脾淋巴细胞增殖率达72.09%。     

鸡骨蛋白肽酶解工艺参数优化研究

为探索鸡骨利用的新途径,以鸡骨渣为原料,开展了鸡骨蛋白肽酶解技术研究。研究了6种酶的酶解效果以及最适蛋白酶的酶用量、底物浓度、温度、pH和酶解时间对鸡骨蛋白水解度和短肽得率的影响,结果表明,Alcalase为最佳用酶,Alcalase水解鸡骨的最佳工艺参数为:酶用量为每克原料0.099 mkat、底物浓度4%、反应温度55℃、pH8.5、反应时间为120 min,在此条件下,鸡骨蛋白水解度为15.9%,短肽得率为61.81%。     

双酶法制备玉米肽酶解条件研究

利用双酶法水解玉米蛋白粉制备玉米肽,探讨各因素对水解度(DH)的影响,旨在确定玉米肽制备的最佳酶解条件。结果表明：最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度5g/100mL、pH8.5,按4% 的酶与底物比加碱性蛋白酶水解1.5h 后,调整pH 值至7.5,之后再按3.5% 的酶与底物比加木瓜蛋白酶水解1.5h。在此条件下,水解液中DH 为80.97%。与单酶法相比,DH 明显提高。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

带鱼蛋白水解液抑制二肽基肽酶IV活性的研究

本文首次报道酶解带鱼蛋白获得具有抑制二肽基肽酶IV活性的水解液。探讨Flavourzyme风味蛋白酶水解带鱼蛋白以及水解液抑制二肽基肽酶IV的活性,获得优化的酶解工艺。采用单因素试验研究酶解时间、加酶量、温度和鱼水比对DPP-IV抑制的影响,并在此基础上进行正交试验,得出优化的酶解条件。采用底物发色法测定DPP-IV抑制率,结果表明:在优化的酶解条件下:温度45℃,加酶量1.6%,酶解时间4.5 h,鱼水比1∶3,带鱼蛋白水解液对DPP-IV的抑制率达96.97%。     

富硒糙米抗氧化肽酶法制备工艺优化

以富硒糙米蛋白为原料,优化富硒糙米蛋白抗氧化肽酶法制备工艺。以酶解产物抗氧化能力指数(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)和水解度为评价指标,考察酶种类、酶解时间、pH值、底物浓度、加酶量及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素试验基础上,采用三因素三水平响应面法确定富硒糙米抗氧化肽的制备工艺。结果表明:中性蛋白酶较适宜制备富硒糙米抗氧化肽,其最佳酶解工艺条件为:pH 8.0,底物浓度3%,酶解时间69 min,酶解温度55℃,加酶量12 000 U/g。在此条件下,富硒糙米蛋白酶解产物的抗氧化能力为(1 232.57±62.34)μmol TE/g,显著高于同等条件下非富硒糙米蛋白酶解物的抗氧化能力。     

肽酶制备及活力测定

就肽酶制备及对植物性蛋白的消化作用进行研究,选择植物性蛋白含量较高的黄豆作为酶作用底物.通过研究表明该酶消化的最适pH值在7.0附近,该酶对蛋白蛋的最适消化温度在50℃左右,还研究了不同酶与底物配比下的消化效果,该酶对蛋白质消化的效果可高达69%(10g:100g).     

蚕蛹蛋白肽酶水解条件优化

为了降低蚕蛹过敏风险,提高蚕蛹优质蛋白利用价值并制备免疫活性肽,对蚕蛹蛋白进行了酶解优化。本文选用菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶这5种酶对脱脂蚕蛹蛋白进行酶解。通过对小鼠脾细胞增殖和水解度的检测,选取最佳蛋白酶。在此基础上对最佳蛋白酶的四个单因素(酶和底物量,初始p H,水解温度和底物浓度)进行优化,从而确定最佳的酶解条件。结果表明,5种蛋白酶中碱性蛋白酶对脱脂蚕蛹蛋白的酶解效果最好。对碱性蛋白酶进一步优化,通过Box-Behnken实验和回归分析获得碱性蛋白酶酶解脱脂蚕蛹蛋白的最佳条件为加酶量=6.0%,温度=55℃,酶解时间=2.00 h,p H=8.0,水∶底物=20∶1,测得的水解度为19.96%±1.02%,免疫活性OD490 nm为0.2512±0.0125。