交联壳聚糖载体固定化柚苷酶工艺

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体,采用交联-吸附偶联法固定柚苷酶,通过单因素和正交试验优化确定最佳固定化工艺。结果表明,柚苷酶的最佳固定化条件为：以质量浓度为3.5g/100mL的壳聚糖制备的凝胶微球为载体,凝结剂NaOH质量浓度1.0g/100mL、戊二醛体积分数7.0%、交联时间2.0h、pH 4.0、酶液质量浓度2.0mg/mL、25℃时吸附交联3.0h,得到固定化酶最高酶比活力为7.37U/g;与游离酶相比而言,固定化酶最适pH值与最适反应温度均无明显变化;固定化酶在不同温度(40、50、60℃)条件下重复使用7次,相对酶活力仍能保持在70%、60%和50%以上。     

交联海藻酸钠固定化柚(皮)苷酶

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-包埋-交联法对柚（皮）苷酶进行了固定化。在单因素实验基础上,通过正交实验得到海藻酸钠固定化柚（皮）苷酶的最优工艺条件:海藻酸钠质量浓度3.0%,给酶量为0.01mg/g载体,前交联戊二醛体积分数2.0%,前交联时间1.5h,后交联戊二醛体积分数0.025%,后交联时间2h,制备的固定化酶最高活力5.07U/g。同时,对固定化柚（皮）苷酶的稳定性进行了研究,结果表明:固定化酶的温度耐受性与存储稳定性较游离酶有较大幅度的提高;固定化酶重复使用7次（60℃,pH4.0）后,活力仍然保持在60%。      

交联海藻酸钠固定化柚(皮)苷酶

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-包埋-交联法对柚(皮)苷酶进行了固定化。在单因素实验基础上,通过正交实验得到海藻酸钠固定化柚(皮)苷酶的最优工艺条件:海藻酸钠质量浓度3.0%,给酶量为0.01mg/g载体,前交联戊二醛体积分数2.0%,前交联时间1.5h,后交联戊二醛体积分数0.025%,后交联时间2h,制备的固定化酶最高活力5.07U/g。同时,对固定化柚(皮)苷酶的稳定性进行了研究,结果表明:固定化酶的温度耐受性与存储稳定性较游离酶有较大幅度的提高;固定化酶重复使用7次(60℃,pH4.0)后,活力仍然保持在60%。     

聚乙烯醇和海藻酸钠固定化柚苷酶的制备及其性质

以聚乙烯醇、海藻酸钠为载体,固定化柚苷酶;以戊二醛为交联剂,考察固定化工艺条件对酶活的影响,研究固定化酶的部分酶学性质。用高效液相色谱法分析柚苷酶的α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶活力,结果表明:最佳载体组合为11%聚乙烯醇与0.5%海藻酸钠;当缓冲液p H 4、戊二醛含量1%、交联时间0.5 h、吸附时间3 h、加酶量141 U/m L、硼酸4%、Ca Cl21%时,固定化酶活力达到最大值。柚苷酶固定化后,α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶活力的最适温度提高5℃,最佳活性p H值提高1.0,p H稳定性基本不变,温度稳定性下降5℃。α-L-鼠李糖苷酶、柚苷酶的米氏常数(Km)固定化后都增大;α-L-鼠李糖苷酶的最大反应初速度(Vmax)经固定化后减小,柚苷酶的Vmax增大。将固定化柚苷酶重复使用7次后,它的α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶残余活力分别保持71%与80%。     

聚乙烯醇-海藻酸钙固定化柚苷酶

利用聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钙为载体,通过戊二醛交联,制备水不溶性的固定化柚苷酶凝胶颗粒.结果显示:添加戊二醛和延时包埋法制备的固定化酶凝珠活力较高.固定化酶的优化工艺为:以9.0g/100mL PVA与1.0g/lOOmL海藻酸钠为载体,固化剂CaCl2的质量浓度为1.0g/100mL,酶液质量浓度2.0mg/mL...     

环氧基树脂固定化青霉菌柚苷酶的工艺条件

采用国产Seplite LX-1000EP树脂对青霉菌柚苷酶进行固定化,以期提高其稳定性和利用效率。将单因素试验和Box-Behnken试验设计结合对影响Seplite LX-1000EP树脂固定化柚苷酶的主要影响因素进行分析、优化。结果显示,最佳固定化条件为:酶液pH 6.5、固定化温度为26.6℃、载体投放量为0.79 g、固定化时间为24 h,此时固定化柚苷酶酶活达到3 949.32 U/g,酶活回收率提高至44.79%,蛋白固定率为98.43%,说明将Seplite LX-1000EP树脂用于柚苷酶的固定化是切实可行的。     

MCM-41固定化柚苷酶脱苦葡萄柚汁

以介孔分子筛MCM-41为载体,戊二醛为交联剂,采用吸附-交联法进行了柚苷酶的固定化。研究了酶液浓度、戊二醛浓度、吸附交联时间和固定化pH对固定化效果的影响,对影响固定化效果的因素进行了分析。确定最佳的固定化条件为:酶液浓度为0.4mg/mL,戊二醛浓度2.0%,吸附交联时间为6h,固定化pH为4.0(醋酸缓冲液)。采用海藻酸钠和聚乙烯醇对制备的固定化酶进行二次包埋处理,并应用于葡萄柚汁的脱苦。结果显示,游离酶和MCM-41固定化酶对果汁的脱苦率分别为96.65%和92.90%,海藻酸钠和聚乙烯醇二次固定化的柚苷酶脱苦率分别为72.64%和70.90%。脱苦后的果汁营养成分与理化指标均有一定程度降低。为柚苷酶的固定化提供了一种新型的载体材料,为固定化柚苷酶在果汁脱苦中的工业化应用提供了理论基础。     

MCM-41固定化柚苷酶脱苦葡萄柚汁

以介孔分子筛MCM-41为载体,戊二醛为交联剂,采用吸附-交联法进行了柚苷酶的固定化。研究了酶液浓度、戊二醛浓度、吸附交联时间和固定化pH对固定化效果的影响,对影响固定化效果的因素进行了分析。确定最佳的固定化条件为:酶液浓度为0.4mg/mL,戊二醛浓度2.0%,吸附交联时间为6h,固定化pH为4.0（醋酸缓冲液）。采用海藻酸钠和聚乙烯醇对制备的固定化酶进行二次包埋处理,并应用于葡萄柚汁的脱苦。结果显示,游离酶和MCM-41固定化酶对果汁的脱苦率分别为96.65%和92.90%,海藻酸钠和聚乙烯醇二次固定化的柚苷酶脱苦率分别为72.64%和70.90%。脱苦后的果汁营养成分与理化指标均有一定程度降低。为柚苷酶的固定化提供了一种新型的载体材料,为固定化柚苷酶在果汁脱苦中的工业化应用提供了理论基础。      

黑曲霉TC-01产柚苷酶对柚皮苷酶解作用的研究

柚皮苷是一类主要的类黄酮物质,它是引起柚类和葡萄果实苦味的主要来源,去除柚皮苷会使果汁苦味减轻,而柚皮苷酶能在不影响柑橘果汁品质的前提下较好地去除苦味。但是由于不同来源的柚苷酶的结构不同,其催化特性也不尽相同,本文通过利用前期筛选的黑曲霉(Aspergillus.niger TC-01)产柚苷酶对柚皮苷酶解作用进行研究,实验采用高效液相色谱法测定柚皮苷、普鲁宁和柚皮素的三者之间含量变化,确定酶解最适温度、时间、pH及酶用量,并测定TC-01产柚苷酶的米氏常数以确定酶解反应的最佳条件。结果表明,TC-01产柚苷酶酶解最适温度为60℃、酶解最适时间为30-40min,最适pH4.0,酶最佳用量为24u/mL。米氏方程为Y=0.0018X-3.0×10-6,其中Km值为598.8ug/mL,Vmax=2.06g/(min.mL)。此研究结果为柚苷酶的应用提供了理论依据。     

海藻酸钠固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

本文研究了以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋方式固定β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化工艺。分别考察海藻酸钠浓度、戊二醛体积分数、氯化钙浓度、交联时间和固化时间对固定化酶相对酶活力的影响,并以正交试验确定β-葡萄糖醛酸苷酶最佳的固定化条件:海藻酸钠质量浓度35g/L、给酶量1600U/g载体、戊二醛体积分数0.2%、氯化钙质量浓度20g/L、交联时间2h、固化时间2h。研究表明此时固定化酶的回收率较高,可达到71.66%,本文使用的固定化工艺简单易行,具有广阔的工业前景。     

海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球固定化柚苷酶的研究

柚苷酶可对柑橘类水果中的柚皮苷等苦味物质进行水解,从而实现果汁的脱苦或普鲁宁等医药中间体的制备。作者采用滴入法制备具有环境友好且易获得特性的海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球,以此作为载体,用于柚苷酶的固定化研究。结果表明,在硅胶/羧甲基壳聚糖质量比1.0∶1.5、交联时间2.0 h、固定化温度25℃、偶联时间4 h、给酶量465.6 U/mL的实验条件下,复合微球固定化柚苷酶的比活力、载酶率和酶活力回收率分别可达203.33 U/g、36.80%和62.15%。同时,相比游离柚苷酶,该复合微球固定化柚苷酶对pH和温度变化均显示出更好的稳定性,且更易操作和储藏。此外,海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球固定化柚苷酶的应用能够进一步拓宽柚苷酶在食品、医药等领域的深入发展。     

柚苷酶在柑桔果醋加工中的应用

在柑桔果醋加工中,利用柚苷酶进行脱苦实验,结果表明：发酵温度在25℃-28℃,酸度控制在0．5－0．8 /100mL,柚苷酶加量在15μ/mL,柚苷酶有较佳的活性;酒精度为6．0％－8．0％（V）时,有利于醋酸发酵,制得的果醋清亮透明,酸甜可口,果香明显,基本无苦味。     

壳聚糖固定化β-半乳糖苷酶的研究

以壳聚糖-戊二醛吸附交联法对β-半乳糖苷酶进行固定化方法的研究，获得了最优固定化条件：采用先固定化后交联的顺序，4℃固定化6h，pH值为6.0，质量分数为1%戊二醛室温交联30min，最适加酶量为0.4mg/g干壳聚糖珠，结果酶活力回收率达到26.43%。     

黑曲霉HZG-7菌株产柚苷酶的研究

柚皮苷是柑桔汁及其加工制品中的主要苦味物质。通过筛选得到一株能向胞外分泌柚苷酶的黑曲霉菌株 HZG- 7。实验结果表明 :在 30℃ ,1 50 r/min,p H=5.0的条件下培养 1 0 8h,菌株分泌的柚苷酶活力可达到 635U/ml。利用此酶在 40℃ ,p H=4.0的条件下对柑桔汁进行脱苦处理 ,其柚皮苷含量大幅度下降 ,达 71 %以上 ,苦味基本消失。      

鳞杯伞α-半乳糖苷酶的固定化及其对豆浆中低聚糖的水解作用

采用海藻酸钠包埋法和壳聚糖交联法固定化鳞杯伞产生的α-半乳糖苷酶,通过比较固定化酶和游离酶的最适pH、pH稳定性、最适温度、温度稳定性、保存时间及两种固定化酶对豆浆中低聚糖的水解作用及操作稳定性等,探究较适宜于鳞杯伞α-半乳糖苷酶的固定化载体。结果表明：鳞杯伞α-半乳糖苷酶最佳硫酸铵饱和度为80%;两种固定化方法酶活性保持率都达到了50%以上,且固定化酶的温度稳定性、pH稳定性、保存时间相比游离酶都有提升;比较两种固定化酶,壳聚糖固定化酶的温度、酸度稳定性及操作稳定性要优于海藻酸钠固定化酶,但保存时间和对豆浆中低聚糖的水解效率要低于后者,两种固定化酶重复使用3次后低聚糖水解率在85%以上,相比于海藻酸钠,壳聚糖更适宜作为鳞杯伞α-半乳糖苷酶的固定化载体。     

柑橘果渣发酵产柚苷酶的工艺优化及固定化研究

柑橘果渣废弃物中含有丰富的生物活性成分、膳食纤维、维生素和微量元素等,对其进行资源化利用具有重要意义。该研究以柑橘果渣为底物,进行柚苷酶的发酵生产工艺优化。结果表明,当果渣与水以质量比1∶8、以5. 5 g/L麸皮粉为碳源、(NH₄)₂SO₄与酵母浸粉(质量比为7∶3)为氮源时,柚苷酶发酵酶活力可达1 180. 15 U/mL,是未优化条件下柚苷酶酶活力的15. 3倍。进一步以叔丁醇为沉淀剂、戊二醛为双功能交联剂,在4℃条件下交联1. 5 h,制备出无载体固定化酶——交联柚苷酶聚集体,其不但具有较好的pH和温度稳定性,且酶活回收率可达73. 0%以上。     

黑曲霉HZG-7菌株产柚苷酶的研究

柚皮苷是柑桔汁及其加工制品中的主要苦味物质。通过筛选得到一株能向胞外分泌柚苷酶的黑曲霉菌株 HZG- 7。实验结果表明 :在 30℃ ,1 50 r/min,p H=5.0的条件下培养 1 0 8h,菌株分泌的柚苷酶活力可达到 635U/ml。利用此酶在 40℃ ,p H=4.0的条件下对柑桔汁进行脱苦处理 ,其柚皮苷含量大幅度下降 ,达 71 %以上 ,苦味基本消失。     

壳聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化β-半乳糖苷酶,通过单因素和正交实验探讨了固定化载体和固定化条件对酶固定化的影响。结果表明,固定化载体壳聚糖(脱乙酰度90%以上)的最适分子质量和体积分数分别为3×105和2%,制备的壳聚糖载体具有良好的成球性和机械强度。采用交联方式将β-半乳糖苷酶固定在壳聚糖微球上,在单因素试验的基础上,进行正交试验确定固定化条件为:交联剂戊二醛浓度和交联时间分别为10 g/L和1.0 h,酶浓度和固定化时间分别为1.5 mg/m L和12 h,最终制备的固定化酶的活力回收率达到70.5%。同时该固定化酶具有良好的储存稳定性和操作稳定性,具有一定的应用价值。     

单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化

比较了海藻酸钠和壳聚糖两种栽体及不同固定化方法对单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化效果，结果表明以海藻酸钠为载体，采用交联-包埋-交联固定化方法的效果最佳。对共固定化条件进行了优化，可使单宁酶和β-葡萄糖苷酶的活力回收率分别达67．3％和46．0％。     

壳聚糖/海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以壳聚糖、海藻酸钠为包埋材料,戊二醛为交联剂,固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化条件与固定化酶的活力回收的关系。通过单因素和正交实验确定了最佳的固定化方法,即:壳聚糖（脱乙酰度=85%）浓度为1.5%、海藻酸钠浓度为2%、戊二醛浓度为1.0%、钙离子浓度为0.7mol/L、pH为5,固定化酶的活力回收达到83.8%。固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为5,该固定化酶重复使用5次后,其活力仍能保持70%。由于β-葡萄糖苷酶比较昂贵,采用固定化技术将其固定在载体上反复使用,可以达到简化工艺、降低成本的目的,作用于大豆异黄酮的水解方面具有潜在的应用前景。