有机磷农药检测用酶生物传感器的制备方法研究

目的：蔬菜、茶叶、水果等食品中农药残留问题依然严重,农药残留超标现象突出。有机磷农药是用于防治植物害虫的有机磷化合物,对人畜具有较高的急性毒性。然而,由于杀虫活性高,许多剧毒品种也被广泛使用。快速检测方法可以有效地检测物质中的农药残留。基于生物传感器的农药残留检测技术具有选择性强、快速、灵敏度高等优点。农药残留的快速检测是目前国内外研究的热点,本文利用酶传感器检测食品中的有机磷农药残留。方法：本文进行了酶生物传感器的制备,包括电极和酶片的制备。为了找到制备电极的最佳条件,研究了银镜反应时间、温度和pH值。对传感器的参数进行了优化,并研究了传感器的一致性和稳定性。结果：制备电极的最佳条件是银镜反应次数为10,温度至少为25℃,pH值为5.7-8.2。60 s的反应时间、60℃的酶降解温度和纯酶制剂是传感器检测的最佳参数,且单个酶传感器性能具有良好的一致性。结论：本文中自制的酶片为一次性酶片,检测到氧化信号时,响应信号是规律性的,适用于食品中多种有机磷农药残留的检测。     

蔬菜农药残留检测中酶抑制法的应用分析

目的:探讨酶抑制法在蔬菜农药残留检测中的作用。方法:完成样品与对照溶液的制备后,采用乙酰胆碱酯酶对样品与对照溶液内残留的有机磷和氨基甲酸酯类农药进行检测。结果:白菜样品中对酶抑制率为71.2%;番茄样品对酶抑制率为89.2%;甘兰样品对酶抑制率为90.1%。根据酶抑制程度,表明3种样品中皆含有一定的农药残留。结论:运用酶抑制法能够快速测定蔬菜农药残留含量,但为了保障测定结果的准确性,应结合定性定量方式一同进行检测。     

常见农药残留检测技术的应用分析

食品中的农药残留会损害人体健康,危害人们的生命安全.因此,做好食品中的农药残留检测工作非常重要.本文基于文献法、调查法阐述了酶抑制法、生物传感器法和气相色谱分析法等常见的农药残留检测技术,分析了农药残留检测技术存在的问题,提出了农药残留检测技术的应用策略与发展建议,为农药残留检测技术的进一步发展提供参考.     

产酸克雷伯菌中水解酶的表达及其在果蔬表面多菌灵去除中的应用

为研究酶法清除果蔬表面多菌灵残留效果,从多菌灵污染的土壤中筛选多菌灵降解细菌,并从中克隆多菌灵水解酶,表达纯化后制备为酶制剂,催化果蔬表面多菌灵降解。实验结果表明:通过筛选,从土壤中得到了一株可利用多菌灵为唯一碳源的产酸克雷伯菌Klebsiella oxytoca KO-1。以基因组为模板使用简并引物PCR扩增,得到了一段837 bp的水解酶编码基因。将该基因连接至pET-28a并转化至大肠杆菌BL21中,重组菌成功表达出了28 kDa的水解酶KY-1。使用镍柱蛋白纯化法,成功实现了KY-1的纯化并制备了KY-1酶水剂。经液质检测,KY-1将多菌灵催化为2-氨基苯并咪唑,其纯化蛋白酶活达到36.8 U/mg。将KY-1酶水剂喷洒至果蔬表面后,成功提高了黄瓜、草莓、西红柿和土豆表面多菌灵残留的降解率,最高可达37.3%。本研究成功筛选了一株多菌灵降解菌,并制备了可用于果蔬表面多菌灵降解的酶制剂,为酶法清除农药残留奠定了基础。     

植物酯酶法检测有机磷农药的敏感性和检测限的研究

采用本室自制的植物酯酶,对19种有机磷农药进行了敏感性试验,并测定了该酶对这19种有机磷农药的最低检测限(LOD)。研究表明,所制备植物酯酶对受试的18种有机磷农药均有良好的敏感性,且最低检测限远低于国家规定的最大残留限量(MRL),因此,该酶可作为有机磷农药残留检测用酶。     

分子印迹技术及其在农药残留检测中的应用

分子印迹技术是指制备可选择性识别目标分子的高分子聚合物的技术。该技术具有识别特异性、高效选择性、可重复利用性等优点,可以有效去除基质干扰,适用于基质复杂样品中痕量水平物质的检测分析。分子印迹聚合物是具有特异性识别功能的选择性吸附材料,通过其识别功能可有效将目标成分从样品中分离出来,在目标分子的分离富集方面有着独特的优势。分子印迹技术的选择性和实用性等优点,使其具有广泛的应用前景。近年来,分子印迹技术在农药残留检测方面受到越来越多的关注,在有机磷、氨基甲酸酯类等农药残留检测分析中取得良好效果。本文在介绍分子印迹技术的基础上,总结了近年该方法在农药残留检测中的重要应用,并展望了分子印迹技术在农药残留检测中的发展前景,为农药残留检测的完善和发展提供参考。     

酶抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留

对酶抑制法快速检测有机磷农药残留进行研究.以鲫鱼脑、肝脏和肌肉乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)为检测用酶,对5种蔬菜中有机磷农药残留进行检测.根据AChE酶活抑制率和农药抑制方程,判断农药残留情况.当AChE酶活抑制率大于35%时,可判断该样品中农药残留超标.结果表明,试验中5种蔬菜样品农药残留均未超标.除豆角外,该方法的回收率均在80%～120%之间,表明该方法的检测结果准确可靠.     

一种制备高纯果胶酯酶的方法研究

采用温度控制结合抑制剂的方法对高纯果胶酯酶酶制剂的制备方法进行研究。通过正交试验,得到制备高纯果胶酯酶制剂的最优工艺条件是:温度55℃,七水合硫酸亚铁(FeSO.47H2O)浓度1 mol/L,时间10 min。在此条件下,果胶酯酶酶活残余为80.57%,而聚半乳糖醛酸酶的活力仅仅残留了8.29%。     

提高酶抑制率法进行果蔬农药残留快速检测准确性的建议

随着生活水平的不断提高,人们对于农产品质量安全问题的关注程度越来越高,随之而来的农药残留问题也日益突显。酶抑制率法是发展较为成熟的农药残留快速检测方法,本文分析了酶抑制率法的特点,探讨了提高酶抑制率法进行果蔬农药残留快速检测准确性的建议。     

茶叶中甲胺磷农药快速测定研究

利用有机磷农药能抑制植物酯酶酶促反应的机理,建立了快速测定茶叶中甲胺磷农药残留的方法。用70%饱和硫酸铵对面粉中植物酯酶进行纯化,在45℃、pH4.5～5.5时制备的酶催化反应活性最大,酶催化反应动力学显示10min内反应呈线性关系。测定甲胺磷农药残留反应体系最大吸收峰是在480nm之间,最适乙酸-β-萘酯用量为1.0ml;在甲胺磷浓度在0.1～1.0mg/kg之间时,反应体系的吸光值与甲胺磷浓度呈线性相关;在茶叶汁提取液回收率为84%。     

酶工程研究和酶工程产业的新进展(Ⅰ)——国际酶工程研究领域的若干“热点”和前沿课题

概要介绍了国际上酶工程研究和酶工程产业的新进展。第一部分着重介绍国际酶工程研究领域的若干“热点”和前沿课题 ,包括基因工程和蛋白质工程 ,人工合成酶和模拟酶 ,核酸酶和抗体酶 ,酶的定向固定化技术 ,酶化学技术 ,非水酶学 ,糖生物学和糖基转移酶 ,酶标药物 ,极端环境微生物和不可培养微生物的新酶种 ,酶在环境保护方面的应用等。     

果蔬农药残留检测的预处理和检测条件优化研究

本文对果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的样品预处理方法和检测条件进行了优化研究。首次采用亚临界水萃取技术进行样品预处理,大大提高了农药残留的提取率。进一步优化了检测条件,通过温度校正公式的使用和试剂用量的调整使农药残留检测的操作更简单、费用更低廉。     

用于农残快速检测的离心式微流控芯片研制

基于酶抑制原理结合光度分析方法,研制一种预存储生化试剂的离心式微流控芯片。设计制作的一次性微流控CD芯片集成进样、酶抑制反应、显色反应及检测单元,结合自行研制的便携式分析装置,可以同时检测12个样品,能够实现对大批量农产品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行现场、快速、高通量检测。结果表明:与传统农残快速测定仪比较,微流控芯片农残速测系统操作单元集成度高,可以实现农残检测流程的自动化,样品及试剂消耗量降至传统速测方法的约1/20,同时检测灵敏度、重复性和准确性整体优于传统农残快速测定仪,可以满足基层非专业人员针对大批量样品农药残留的筛查需求。     

酶学技术在食品加工与食品质量检测中的应用

本文从谷物加工、果蔬加工、肉类加工、乳制品加工四个研究领域对酶学技术在食品加工中的应用及其进展,从酶联免疫分析法(ELISA)与酶生物传感器法两个研究领域对酶学技术在食品质量检测中的应用及其进展进行了归纳和评述。糖苷酶类可应用于生产以抗性糊精、低聚果糖为代表的新型谷物营养食品,果胶酶及其复合酶制剂可以提高果汁的产量和质量,纤维素酶辅助提取技术提取果蔬中功能性成分,蛋白酶、脂肪酶应用于改良传统的肉制品、乳制品,以及制造更加营养均衡,符合保健需求的功能性肉制品、乳制品。酶联免疫分析法可以用于果蔬中农药残留以及食品中毒素的检测,可靠性更好、灵敏度更高的酶联免疫试剂盒是今后研究的重点。以酶电极为代表的酶生物传感器在食品中的有毒物、致癌物检测中也已经初步取得成功。同时,针对酶学技术在食品加工与食品质量检测中的应用存在的不足,本文也提出了相应的建议,比如通过固定化酶来降低酶制剂的使用成本,保证酶联免疫分析法的准确性,提高酶生物传感器的稳定性。     

In-vitro and in-vivo studies on digestion of dietary fibre components in a broiler chicken diet based on rye

In an in-vitro system, endogenous enzymes, as well as an added enzyme preparation, degraded both soluble and insoluble dietary fibre components in a diet based on rye endosperm, insoluble arabinose and xylose residues were not as efficiently degraded in vitro by the endogenous enzymes as the insoluble glucose residues. Broiler chickens were fed on the diet with or without the supplementary enzyme. Enzyme supplementation generally improved the apparent ileal digestibility of the insoluble dietary fibre components while soluble dietary fibres, especially arabinoxylans, were enriched in the ileal digesta leading to negative digestibility values. ¹H-NMR spectra of arabinoxylans in digesta from chickens in combination with sugar analyses corroborated the results from the in-vitro study which indicated that the enzyme preparation preferentially degraded the soluble mono-substituted xylose residues while un- and disubstituted xylose residues were enriched.     

5 种基质中19 种有机磷农药残留的基质固相分散- 气相色谱法测定

采用基质固相分散法从5 种基质中(白菜、梨、鸡肉、玉米、紫甘蓝)提取、净化常见的19 种有机磷农药,用气相色谱- 火焰光度检测器(GC-FPD)进行检测。通过对基质固相分散的条件--吸附剂、吸附剂与样品的用量比、洗脱剂、洗脱体积进行优化,建立5 种基质中19 种有机磷农药残留分析的基质固相分散- 气相色谱(MSPD-GC)方法。利用所建立的方法进行3 个水平(0.01、0.02、0.05mg/kg)的加标回收实验。结果表明,除了添加水平为0.01mg/kg 时,乙拌磷、杀螟腈、水胺硫磷、硫线磷、三唑磷的回收率较差,其余有机磷农药中的回收率在75.0%～109.2% 之间,相对标准偏差小于16%,方法的回收率和相对标准差满足农药残留检测中准确度和精密度的要求。     

鸭血清胆碱酯酶抑制法检测果蔬农药残留的研究

对农药残留快速检测方法——胆碱酯酶抑制法进行了研究。以二次盐析后的鸭血清丁酰胆碱酯酶(BChE)为农药残留的检测用酶,碘化硫代丁酰胆碱(BTChI)为底物,5-5'-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,410nm比色测定吸光值变化,计算胆碱酯酶的抑制率,从而推算农药残留情况。当抑制率大于35%时,表明农药含量超标。检测过程只需20～40min,可同时检测多个样品,与气相色谱检测结果的符合率大于85%。     

固相微萃取在食品农药残留检测中的应用

固相微萃取（SPME）是近年来国际上兴起的一项样品分析前处理技术。与传统的液—液萃取和固相萃取相比较具有操作时间短，样品量小、无需萃取溶剂、适于分析挥发与非挥发性物质、重现性好等优点。由于食品中残留农药成分复杂，含量低，要求检测方法具有相当的灵敏度和选择性。SPME在食品农药残留检测中的应用取得了可喜进展．越来越显示其广阔的前景。     

鲜切生菜加工过程对5种农药残留的影响

本文旨在研究鲜切生菜制备过程中不同处理过程对五种农药残留的影响,并评估农药残留对人体的健康风险。通过开展田间试验研究三种杀虫剂(吡虫啉、虫酰肼、氯氰菊酯)和两种杀菌剂(戊唑醇、嘧菌酯)在模拟商用鲜切生菜处理条件下的耗散情况,采用基于乙腈的乙二胺-N-丙基硅烷(Primary secondary amine,PSA)填料分散固相萃取净化,气相色谱-串联质谱和液相色谱-串联质谱分析验证5种农药残留分析方法的可靠性并对农药残留进行检测。结果表明,5种农药残留在用次氯酸钠洗涤后均出现显著性下降(P<0.05),在切、清洗、离心脱水、冷藏保存时鲜切生菜中5种农药的加工因子均低于1,整个处理过程大大降低了农药残留水平。体外模拟胃肠环境下5种农药的生物可给性均未达到50%。不同添加水平下,生物可给性依次为:氯氰菊酯 > 嘧菌酯 > 戊唑醇 > 吡虫啉 > 虫酰肼,结合供试农药的每日容许摄入量(Allowable Daily Intake,ADI)值发现,对人体的健康风险而言,3种杀虫剂中虫酰肼最安全,吡虫啉比氯氰菊酯安全,而杀菌剂嘧菌酯比戊唑醇更安全。通过加工可去除生菜中的农药残留,降低膳食暴露量,对保障消费者的膳食安全具有积极意义。     

固相微萃取在食品农药残留检测中应用

该文综述食品农药残留分析样品前处理技术—固相微萃取技术,对固相微萃取方法在食品农药残留检测中应用进行总结,并对固相微萃取在食品农药残留分析中发展进行讨论。