SPR技术对奶粉中维生素B12检测方法的建立

目的 利用表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)技术, 建立快速定量测定牛奶中维生素B12的方法。方法 将钴胺素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面, 并对竞争结合的维生素B12结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化, 检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的维生素B12, 利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线, 并对市售10个奶粉样品进行检测。结果 制备的芯片稳定, 50个循环相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为0.54%, 该方法的检测限为0.006 μg/100 g, 回收率为92.1%~104.1%。测得的10个牛奶产品中维生素B12含量与对应商品标签值全部在标准规定的范围内。结论 所建立的方法可以在6 h内完成样品的前处理和检测, 是一种简便、快捷的定量检测方法。     

SPR技术对奶粉中维生素B_(12)检测方法的建立

目的利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,建立快速定量测定牛奶中维生素B12的方法。方法将钴胺素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面,并对竞争结合的维生素B12结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化,检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的维生素B12,利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线,并对市售10个奶粉样品进行检测。结果制备的芯片稳定,50个循环相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为0.54%,该方法的检测限为0.006μg/100 g,回收率为92.1%~104.1%。测得的10个牛奶产品中维生素B12含量与对应商品标签值全部在标准规定的范围内。结论所建立的方法可以在6 h内完成样品的前处理和检测,是一种简便、快捷的定量检测方法。     

微孔板试剂盒检测婴幼儿配方奶粉中生物素方法探讨

研究如何提高微生物法测定生物素的准确性和稳定性。对微生物法测定生物素的关键控制点、主要影响因素进行探讨分析。采用IFP微孔板试剂盒检测婴幼儿配方奶粉中生物素含量,相对传统方法具有操作方法简便、结果准确、重复性好的特点。     

SPR生物传感器高通量检测多种食源性致病菌的研究

目的建立一种基于表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance technology,SPR)原理的生物传感器方法 ,实现11种常见致病菌的高通量检测。方法用表面自组装技术(self-assembled monolayer,SAM)在金膜表面引入羧基,然后通过氨-羧基反应将5’端标记有氨基的探针固定在芯片表面,经多重PCR扩增出的产物变性、杂交、生物素-亲和素系统信号放大等步骤完成目的片段的检测。对所建立的多重PCR-SPR检测方法的灵敏性、特异性等技术指标进行评价。结果本研究建立的多重PCR-SPR检测方法具有良好的灵敏性,该芯片检测11种常见致病菌的灵敏性均达到103~104cfu/m L,能满足现有检测要求。通过对实验室保存的14株标准菌株和沙门氏菌等90份样品分离株进行检测,结果显示该检测方法具有较好的特异性,无交叉反应。结论 本研究建立的多重PCR-SPR检测系统具有良好的灵敏性和特异性,完全适用于11种致病菌的高通量检测。该检测方法检测时间短、检测成本低、减少了人为因素的影响,具有良好的应用前景。     

生物素-亲和素增敏抑制型SPR等离子共振传感器检测牛奶中链霉素

针对牛奶中链霉素(STR)残留问题,开发一种基于生物素-亲和素系统(BAS)增敏及抑制型等离子共振(SPR)免疫传感器。方法:直接交联法获得的半抗原STR-OVA,通过活化酯法偶联生物素得到抗原BNHS-STR-OVA,与芯片上的链霉亲和素(SA)结合,绑定抗原。依据免疫抑制原理,STR与BNHS-STR-OVA共同竞争固定浓度的特异性抗体,依据不同浓度STR所得响应值,计算抑制率并绘制曲线,实现对食品中STR残留的准确、灵敏、快速分析。利用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS)检测该方法的准确性。结果:检测过程中抗原的固定量为6μg,抗体质量浓度为60 mg/mL。构建的抑制型免疫传感器的检出限(IC15)为0.37μg/L,灵敏度(IC50)为1.65μg/L。检测时长不超过10 min,芯片可重复使用90次。结论:研究所构建的BAS-SPR增敏、抑制型免疫传感器,方法简单,灵敏度高,检测时间短,成本低,可满足牛奶样品中STR高效检测的需求。     

SPR生物传感器高通量检测多种食源性 致病菌的研究

目的 建立一种基于表面等离子共振技术 (Surface Plasmon Resonance technology,SPR)原理的生物传感器方法,实现11种常见致病菌的高通量检测。方法 用表面自组装技术(self-assembled monolayer,SAM)在金膜表面引入羧基,然后通过氨-羧基反应将5’端标记有氨基的探针固定在芯片表面,经多重PCR扩增出的产物变性、杂交、生物素-亲和素系统信号放大等步骤完成目的片段的检测。对所建立的多重PCR-SPR检测方法的灵敏性、特异性等技术指标进行评价。 结果 本研究建立的多重PCR-SPR检测方法具有良好的灵敏性,该芯片检测11种常见致病菌的灵敏性均达到103~104,能满足现有检测要求。通过对实验室保存的14株标准菌株和沙门氏菌等90份样品分离株进行检测,结果显示该检测方法具有较好的特异性,无交叉反应。结论 本研究建立的多重PCR-SPR 检测系统具有良好的灵敏性和特异性,完全适用于11种致病菌的高通量检测。该检测方法检测时间短、检测成本低、减少了人为因素的影响,具有良好的应用前景。     

谷氨酸生产中生物素含量的检测

微生物检测法是利用营养缺陷型菌株细胞的生长、繁殖与环境中某一限制性营养因子含量之间存在关联性而建立起来的一种生物检测方法.微生物法可以免去繁琐的样品预处理步骤,适合于生物素含量测定.在生物素浓度为0～0.8μg/L的范围内可以获得重复性较好的线性关系.利用该方法,分析了玉米浆、糖蜜、淀粉水解糖液中生物素的含量,分别为248.18μg/kg,1790.53μg/kg和1.25μg/L.     

婴儿配方食品中生物素测定

植物乳杆菌（ATCC No.8014)对生物素有很高的灵敏性，利用这种特异性，可以定量地测出奶基婴幼儿食品中的生物素的含量。为了达到定量测定的目的，在供繁殖试验菌株所用培养基中供给除生物素以外的所有营养成分，这样植物乳杆菌的生长就会同标准溶液及未知测定溶液的生物素的水平相对应。结果表明，本文法的重现性好，变异系数为3.34%，平均回收率为97%。     

婴幼儿乳粉中生物素含量的测定研究

研究利用微生物法测定婴幼儿乳粉中生物素的含量。利用植物乳杆菌(ATCC 8014)对生物素具有很高灵敏性的特点,其生长与生物素含量成一定的线性关系,通过测定培养后菌液吸光度的变化得出婴幼儿乳粉中生物素的含量。测得的标准曲线在0.1ng～1ng范围内线性关系良好(R2=0.9989),所测样品RSD为2.8%(n=6),标准品平均回收率为89.3%～97.7%。该方法重现性较好,稳定可靠,适用于婴幼儿乳粉中生物素含量的测定。     

表面等离子体共振免疫传感器用于快速检测微囊藻毒素的研究

针对现有微囊藻毒素（MC-LR）检测方法操作复杂、因标记而污染环境、仪器贵重,不利于现场快速检测等问题,将自行研制的表面等离子体共振（SPR）生物芯片检测仪应用于微囊藻毒素的检测,提出抑制型SPR生物芯片快速检测痕量微囊藻毒素的方法。采用该方法分别对浓度为3.5、2.5、1.5、1、0μg/L的MC-LR样品进行了检测。结果表明:该方法检测限小于1μg/L,可满足世界卫生组织（WHO）对于饮用水和我国地表水环境质量标准中MC-LR最低含量检测的需求。该方法完成一个样品检测耗时约8 min,相比于高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附法（ELISA）等传统检测方法,快速定量是其最大的优势,可用于食品质量监控和现场实时检测。      

纺织品中双酚A的表面等离子体共振辅助检测方法

鉴于双酚Ａ（BPA）能够干扰生物的内分泌功能,引起各种生殖异常,威胁着婴幼儿的健康,甚至有致癌的危险等生物危害性,采用表面等离子体共振技术（SPR）对BPA 进行定性定量检测。从传感芯片的修饰、BPA-BSA溶液最佳质量浓度的确定、不同质量浓度BPA的响应情况以及纺织品中BPA的萃取等4个方面出发,探索了SPR技术检测纺织品中BPA的实用性。结果表明,BPA的SPR检测法具有检测速度快、对样品要求低、检测针对性强、检测灵敏度高等优点,适合检测领域的广泛应用,可应用于纺织品中双酚A含量的测定。     

Casein interactions studied by the surface plasmon resonance technique

Surface plasmon resonance technique was investigated for the first time to study the apparent hydrophobicity and association properties of the major bovine caseins: alpha(s)-(alpha(s1)- and alpha(s2)-caseins in a 4:1 proportion), beta-, and kappa-caseins. The apparent hydrophobicities of the caseins were evaluated by a new method based on the binding level of casein on a hydrophobic sensor chip, and kinetic and equilibrium affinity constants were determined for the following casein interactions: alpha(s)/alpha(s), alpha(s)/beta, alpha(s)/kappa, beta/beta, and beta/kappa, using a sensor chip modified with covalent immobilized caseins. The study by surface plasmon resonance technology of these casein interactions under different conditions (pH, ionic strength, calcium concentration, chemical modification) demonstrated that, at neutral pH, electrostatic repulsive forces play an important role since an increase in ionic strength of the medium resulted in a stronger interaction. When charge repulsions were reduced by either acidification, increase in ionic strength, or dephosphorylation, casein interactions were reinforced, presumably due to weak attractive forces. Moreover, in this molecular model, we showed that addition of calcium greatly increased the binding response between the most phosphorylated caseins and that the added calcium (2 mM) participated directly in the formation of bridges between the phosphate groups of the casein molecules.     

表面等离子共振技术快速检测食品中的 玉米赤霉烯酮毒素

目的建立基于表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速检测食品中玉米赤霉烯酮毒素(zearalenone,ZEN)的方法。方法采用表面自组装技术(self-assembled monolayer,SAM)在金膜的表面修饰羧基基团,将ZEN抗原与牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)偶联物(ZEN-BSA)通过共价键固定在芯片的表面,采用竞争法检测样品中的玉米赤霉烯酮毒素。结果该方法的检测限为8.2 ng/m L,ZEN单克隆抗体与呕吐毒素、黄曲霉毒素B_1、赭曲霉毒素、伏马毒素等没有交叉反应,与α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇交叉反应率分别为15.3%和11.5%。结论本方法具有简便、快速和高灵敏度等优势,在食品中真菌毒素的快速检测方面具有潜在的应用价值。     

表面等离子共振法传感器快速检测农药残留的研究进展

为确保农产品质量安全, 发展高灵敏检测技术对农药残留进行检测尤为重要。本文简要介绍了表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)传感器的原理和增强SPR检测灵敏度的方法, 重点综述了国内外应用SPR传感器检测农药残留的研究现状, 分析了SPR检测农药残留的优势和发展趋势。     

Comparison of a fluoroquinolone surface plasmon resonance biosensor screening assay with established methods

The performance of a previously developed immunochemical biosensor screening method for fluoroquinolone (FQ) antibiotics in poultry muscle, fish and egg was compared with established methods. Blank sample material of the target matrices was individually spiked with the FQs at half maximum residue levels. Homogeneity of the test materials was confirmed by liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS/MS). Identical sets of spiked samples as well as incurred samples from a previous feeding experiment were sent to three independent laboratories and analysed by LC–MS/MS, a microbiological assay and the new biosensor assay. The new method correctly identified all contaminated samples and demonstrated advantages in sensitivity and analysis time compared to the microbiological screening assay.     

纺织品中双酚 A 检测用表面等离子体共振传感器的表面预处理

针对纺织服装中双酚 A（BPA）分子量小,直接采用表面等离子体共振（SPR）技术难以精准检测的问题,采用传感器表面预处理方法和溶液竞争原理来扩大响应信号,对其进行定性定量检测。为更好地使双酚Ａ?牛血清白蛋白抗原（BPA?BSA）和传感芯片进行氨基偶联,从传感芯片的选择、修饰溶液的pH 值、离子浓度、BPA?BSA 抗原的最佳浓度４ 个因素出发,运用控制变量法,探索双酚Ａ 检测中传感芯片的最佳修饰条件。结果表明：当采用羧甲基葡聚糖组装（CM5） 芯片、修饰液pH 值为4.5、离子浓度为10 mmol/L、BPA?BSA 质量浓度为50 μg/mL 时,BPA?BSA 的氨基偶联修饰效果最佳,且预处理方法简便快捷,BPA 无需精度提纯,特异性识别度高,可应用在纺织品双酚 A 检测中。     

利用表面离子共振系统检测三种禽流感病毒 亚型的研究

目的 利用表面离子共振系统建立检测H5、H7、H9三种亚型禽流感病毒的方法。方法 取原核表达的H5、H7、H9亚型的血凝素HA蛋白偶联于CM5芯片上, 利用HBS缓冲液梯度稀释病毒参考抗原并分别与固定浓度的三种亚型的禽流感抗血清进行反应, 采用竞争法制备标准曲线并用以计算样品的浓度和确立检测灵敏度低限。对不同亚型之间及五种其他常见禽类病毒抗体进行特异性检测试验。结果 建立的表面离子共振方法在检测各亚型时相互之间无交叉反应, 未检测到其他禽源病毒的阳性响应信号, HA重组蛋白的检测极限可达0.5 μg/mL。结论 研究表明该方法可用于同步鉴别主要流行的禽流感病毒亚型。     

传统微生物法测试乳粉中生物素与试剂盒法方法比较

目的 微生物法和试剂盒法测试配方奶粉中生物素含量比较。方法 用国标方法GB5009.259-2016和试剂盒方法测试标准参考物质和不同配方奶粉中生物素含量,对结果进行精密度和相对偏差比较。 结果 微生物方法测得标准参考物质生物素平均值为173.6 μg/100g,试剂盒方法标准参考物质生物素平均值为199.4μg/100g,与标准物质指定值(189 μg/100g)相对偏差分别为8.49%,5.34%;对不同配方奶粉生物素检测,两种方法的相对偏差<10%。 结论 微生物法与试剂盒法测试配方奶粉中生物素结果接近,可综合实验室人员和经济条件选择适当的方法进行测试。