乙型肝炎病毒变异

乙型肝炎疫苗和抗病毒药物在全球的广泛应用有效地防止了乙肝病毒的感染。但是在疫苗免疫后人群、抗病毒治疗的患者以及慢性HBV感染的人群中都出现了HBV的变异,对于乙肝的免疫诊断、预防及临床治疗方案的选择都产生了很大的影响。本文对乙肝病毒变异株的流行情况进行了较全面的综述。     

乙型肝炎病毒疫苗逃逸株及其研究策略的初步探讨

乙肝疫苗的接种为人类控制乙肝流行做出了巨大贡献,但乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在疫苗、核苷类药物的筛选压力下易发生突变成为疫苗变异株,可能影响疫苗的保护效果。近期建立的HBV体外感染系统为研究疫苗逃逸株对乙肝疫苗保护人群的潜在威胁提供了工具。本文对HBV疫苗逃逸株及其研究策略进行初步探讨。     

兴文县乙型肝炎表面抗原调查分析

目的了解我县部分人群的HBsAg感染率的情况,找出引起HBsAg感染的原因,为制定切实有效的预防措施提供依据。方法按照组群抽样的原则随机收取,HBsAg检验采用指端末稍血,用乙肝病毒表面抗原(HbsAg)胶体金诊断试剂。结果6岁以下HBsAg感染率为0.67%,6岁以上HBsAg感染率为1.51%差异有显著性。结论在以后的乙肝防治工作中,应加强健康教育,在提高新生儿接种率的基础上,加强学龄儿童和青少年的免疫接种工作,使他们及时得到免疫保护。     

HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究

目的　研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果 ,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础。方法　选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBVDNA疫苗作为模型 ,以壳聚糖作为载体 ,通过沉淀 凝聚法制备壳聚糖微球疫苗 ,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠 ,在不同时间点收集小鼠血清 ,用ELISA检测血清中抗HBVIgG ,分析不同免疫途径的免疫效果。结果　在HBV亚单位微球疫苗免疫组中 ,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义 ;而在HBVDNA疫苗免疫组中 ,肌肉免疫后 12周IgG达到峰值 ,随后开始出现下降趋势 ;而微球疫苗则在 16周才达峰值 ,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组。结论　鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径 ,且相对于DNA疫苗而言 ,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用。     

转人HLA-A2基因小鼠对adr亚型重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)的免疫应答

目的对汉逊酵母表达的adr亚型重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗(adr疫苗)进行免疫学特性与功能学研究。方法采用adr疫苗与酿酒酵母表达的重组乙肝疫苗(adw疫苗)免疫转人HLA-A2基因小鼠,免疫剂量2μg/0.2 ml,于初免3周后进行第2次免疫。于第2次免疫1周后,采血,分离血清,经ELISA法检测小鼠血清中抗-HBs抗体水平。同时取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,采用HLA-A2/WLSLLVPFV五聚体荧光标记流式细胞术分析细胞中特异性抗乙肝病毒表位的CTL比例。结果 adr疫苗与adw疫苗均可诱导转基因小鼠产生抗乙肝表面抗原抗体,且抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),2种疫苗对转基因小鼠的体液免疫应答的增强作用相似;adr疫苗诱导的乙肝表面抗原特异性CTL应答作用较adw疫苗更明显(P<0.05)。结论 adr重组乙肝疫苗(汉逊酵母)诱导转基因小鼠的体液免疫应答作用与现有adw疫苗相似,但其诱导机体产生细胞免疫应答的能力更显著,可能具有更加良好的预防HBV感染作用和前景。     

治疗性乙型肝炎病毒载体疫苗的构建

目的研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗。方法将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒。经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量。结果获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达。结论已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒。     

HIV抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较

目的比较HIV抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异。方法 用HIV抗体诊断试剂和HIV抗体酶联免疫诊断试剂分别检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品、HIV不同亚型样品以及HIV高危人群样品。结果检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品中,20份阳性样品只检出10份阳性,5份最低检出限样品只检出1份阳性。与酶联免疫试剂相比,对B亚型样品的检测,其灵敏度低2-8倍;对AE重组样品,其灵敏度低100倍;对BC重组样品,其灵敏度低2-10倍。在HIV高危人群样品中,与酶联免疫诊断试剂阳性符合率为88.2％,阴性符合率为97.3％。结论快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂,因此,其应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂。     

慢性乙肝病毒感染者血清IFN-r、IL-4和IL-12的检测

本研究用ELISA法检验健康人及慢性HBV感染者血清中IFN-r、IL-4和IL-12的水平,观察其与ALT,HBV DNA等临床常用指标的相关性,以了解机体免疫功能,探索准确全面地评价慢性HBV感染者免疫功能的方案及非细胞溶解机制在抗病毒治疗中的应用前景,以期能对抗病毒治疗前免疫功能的评价及抗病毒治疗有所帮助。     

吉林省不同年份乙型肝炎血清流行病学调查分析

目的评价吉林省2006和2014年调查人群乙型肝炎病毒感染标志物的流行情况及乙型肝炎疫苗纳入计划免疫后的免疫效果,为制定全省乙型肝炎防治措施提供科学依据。方法采用多阶段随机抽样方法,对吉林省4个地级市中5个县(市、区),于2006年抽取1~59岁人群2 239人,2014年抽取1~29岁人群650人,进行乙型肝炎流行病学调查,并采集血液样本,ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)、乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBs Ab)、乙型肝炎病毒核心抗体(hepatitis core antibody,HBc Ab);用EPIData3.1建立数据库,SPSS 13.0软件进行数据统计学分析。结果 2006和2014年调查人群各年龄组接种率及全程接种率差异有统计学意义(P0.016 7)。2006年15~59岁组人群HBs Ag携带率和乙型肝炎病毒感染率均高于其他两组(P0.016 7);HBs Ab阳性率随年龄组升高而降低。2014年各年龄组人群HBs Ag、HBs Ab携带率及乙型肝炎病毒感染率差异无统计学意义(P0.05)。2006年调查人群HBs Ag携带率及乙型肝炎病毒感染率均低于1992年而高于2014年,HBs Ab阳性率高于1992年而低于2014年,差异均有统计学意义(P0.05)。结论接种乙型肝炎疫苗可有效控制乙型肝炎病毒的感染;免费接种可提高乙型肝炎疫苗接种率,降低HBs Ag携带率及HBV感染率,在青少年、成年及老年人中进行有效接种,可降低易感人群的感染风险。     

乙肝病毒DNA疫苗诱导小鼠体液免疫应答

目的 通过ＤＮＡ疫苗诱生乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）特异性体液免疫应答。方法 将编码乙肝 病毒表面抗原的真核表达质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,并分别于第１ｗ、第３ｗ后加强免疫１次,同时设对照组注射质粒 ｐｃＤＮＡ３．１。第２次加强免疫３ｄ后采血检测血清中 ＨＢｓＡｇ和 ＨＢｓＡｂ。结果 实验组２ｗ时检测到ＨＢｓＡｂ,２个月后达 到高峰。对照组未检测到 ＨＢｓＡｂ。实验组和对照组始终均未检测到 ＨＢｓＡｇ。结论 乙肝病毒 ＤＮＡ疫苗能引起小 鼠特异性体液免疫应答。     

应用IU标准对HBsAg检测试剂的分析

目的应用IU标准对HBsAg检测试剂进行比较分析。方法筛选1份HBsAg阳性血浆,血清学检测证实为HBsAg adr亚型,参照WHO HBsAg标准品稀释方法进行稀释,以IU为单位的HBsAg国际标准品为标准,应用双平行线终点稀释方法对该样品进行定量标定。以标定的IU为单位样品,对国内外13家HBsAg检测试剂进行检测。结果待标定的样品经平行稀释后,测定的浓度值与理论浓度值误差均在11%以内,应用IU标准对国内外HBsAg检测试剂进行检测,国外试剂的最低检出限可达0.02~0.06IU/ml,国产试剂除1家可达0.14IU/ml外,其余试剂均在0.29~0.91IU/ml之间。结论应用IU标准检测HBsAg检测试剂,国外试剂的灵敏度明显高于国内试剂。     

Hepatitis B Virus Cure: Targets and Future Therapies

Chronic hepatitis B virus (HBV) infection is a major global health problem. It can cause progressive liver fibrosis leading to cirrhosis with end-stage liver disease, and a markedly increased risk of hepatocellular carcinoma. In the last two decades, substantial progress has been made in the treatment of chronic hepatitis, B. However, HBV is often reactivated after stopping nucloes(t)ide analogues because antivirals alone do not directly target covalently closed circular DNA, which is the template for all viral RNAs. Therefore, although currently available antiviral therapies achieve suppression of HBV replication in the majority of patients, hepatitis B surface antigen (HBsAg) loss and seroconversion is rarely achieved despite long-term antiviral treatment (HBsAg loss of less than 10% in 5 years). Various clinical trials of agents that interrupt the HBV life cycle in hepatocytes have been conducted. Potential treatment strategies and new agents are emerging as HBV cure. A combination of current and new anti-HBV agents may increase the rate of HBsAg seroclearance; thus, optimized regimens must be validated. Here, we review the newly investigated therapeutic compounds and the results of preclinical and/or clinical trials.     

乙型肝炎病毒S基因变异株的研究

目的　对７份ＨＢｓＡｇ诊断试剂检测结果不一致的样品进行确证并分析其原因。方法采用套式 ＰＣＲ法对７份样品进行ＤＮＡ扩增,并将阳性产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体上,然后进行测序并对其序列进行分析。 结果　７份样品中６份为ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性,其中５份与Ａｂｏｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ　ＨＢｓＡｇ试剂无反应或反应较弱,而且其ａ决定 簇的氨基酸均在１３４位发生改变,由Ｆ变为 Ａ;１份与 Ａｂｂｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ ＨＢｓＡｇ试剂反应较强,其ａ决定簇的氨基酸也 在１３４位发生改变,但由Ｆ变为Ｓ。结论　国内外首次报道ＨＢｓＡｇ ａ决定簇１３４位由 Ｆ变为 Ａ后,其抗原性明显降 低,不易被ＨＢｓＡｇ试剂检出;而１３４位由对变为 Ｓ后,其抗原性无明显改变。     

High Risk of Viral Reactivation in Hepatitis B Patients with Systemic Lupus Erythematosus

HBV reactivation (HBVr) can occur in hepatitis B surface antigen (HBsAg)-positive and negative patients. Here, we determined the incidence of HBVr and its related hepatitis in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). From 2000 to 2017, 3307 SLE cases were retrospectively reviewed for episodes of hepatitis. The incidence, long-term outcomes and risk factors associated with HBVr, including HBsAg reverse seroconversion (RS) were analyzed. Among them, 607 had available HBsAg status. Fifty-five (9.1%) patients were positive for HBsAg and 63 (11.4%) were HBsAg-negative/antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc)-positive (resolved hepatitis B infection, RHB). None of them received antiviral prophylaxis before immunosuppressive treatment. During a mean 15.4 years of follow-up, 30 (54.5%) HBsAg-positive patients developed HBVr and seven (23.3%) died of liver failure, whereas only two (3.2%) RHB cases experienced HBsAg reverse seroconversion (RS). Multivariate logistic regression analysis showed that age ≥ 40 years at diagnosis of SLE (HR 5.30, p < 0.001), receiving glucocorticoid-containing immunosuppressive therapy (HR 4.78, p = 0.003), and receiving glucocorticoid ≥ 10 mg prednisolone equivalents (HR 3.68, p = 0.003) were independent risk factors for HBVr in HBsAg-positive patients. Peak level of total bilirubin ≥ 5 mg/dL during HBVr was an independent factor of mortality (p = 0.002). In conclusion, the risk of HBVr was associated with glucocorticoid daily dose. Antiviral prophylaxis is mandatory for SLE patients diagnosed at age of ≥40 years who receive ≥ 10 mg daily dose of oral prednisone or equivalent.     

固定化Anti-HBsAg单克隆抗体及其含HBsAg血清体外吸附评价

以壳聚糖微球为载体 ,经环氧氯丙烷活化后固定Anti HBsAg单克隆抗体。活化条件是 :环氧氯丙烷用量 0 3mL/g载体、活化温度 4 5℃、活化时间 4h、c(NaOH) =2mol/L ;固定化温度 3℃、固定化时间 2 4h ,活化壳聚糖与单克隆抗体的偶联率为 17.8%。患者血清体外吸附实验结果表明 ,该吸附剂可吸附除去 30 %～ 5 0 %致病抗体 ,血清由阳性转为阴性     

乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其初步鉴定

从乙肝阳性人血清中克隆HBV含前s区表面抗原基因（PreSZ＋S），将其插入到杆状病毒转移质粒PVL1393中，并与昆虫病毒ACNPVDNA共转染Sf9昆虫细胞，筛选出重组病毒。用乙肝放免（RIA）试剂盒及EIAPreS2－Ag检测试剂盒检测重组病毒感染的Sf9细胞，表明细胞中有HBsAg及PreS2－Ag存在。将重组病毒感染的细胞免疫小鼠，在小鼠血清中能检测到anti-HBsAg及anti-PreS2抗体。     

重组乙型肝炎病毒核心抗原的免疫原性及其对乙型肝炎病毒表面抗原的免疫增强作用

目的探讨重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的免疫原性及其对重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫增强作用。方法用透射电镜观察HBcAg、HBsAg及HBcAg+HBsAg混合抗原病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的形态。将小鼠随机分为6组:阴性对照组(NS)、HBcAg组(C)、HBsAg组(S)、HBsAg+铝佐剂组(S+Al)、HBsAg+HBcAg混合组(S+C)及HBsAg+HBcAg+铝佐剂组(S+C+Al),用相应抗原免疫各组小鼠,分别于第0天、第14天经小鼠双侧大腿肌肉进行初次和加强免疫1次,间接ELISA法检测各组小鼠血清中HBsAg和HBcAg的特异性抗体水平,分析HBsAg特异性抗体亚类,ELISPOT法检测各组小鼠脾细胞中HBsAg特异性IFNγ、HBcAg特异性IFNγ及HBsAg特异性IL-4水平。结果电镜观察可见HBsAg和HBcAg均呈大小均一的VLP结构,二者混合后有聚集现象。初次免疫后,S+C组的HBsAg特异性抗体水平与S组差异无统计学意义(P=0.074),加强免疫后,S+C组HBsAg特异性抗体水平明显高于S组(P=0.002),C组和S+C组均可产生高水平HBcAg特异性抗体。S组HBsAg抗体亚类以IgG1为主,S+C组以IgG2a为主。S+C组HBsAg特异性IFNγ斑点数明显高于S组、S+Al组和S+C+Al组(P<0.05),C组与S+C组HBcAg特异性IFNγ斑点数均较高,与S+C+Al组比较,S+Al组HBsAg特异性IL-4斑点数明显升高(P=0.026)。结论 HBcAg具有良好的免疫原性,可增强HBsAg的免疫反应,使反应向Th1方向极化,为治疗性乙肝疫苗的研发奠定了基础。     

三种常见乙型肝炎患者的血清蛋白谱特点

目的分析3种常见乙型肝炎病人的血清蛋白谱特征。方法采用酶联免疫吸附实验检测乙肝标志物,双缩脲法检测总蛋白,溴甲酚绿法(BCG)检测白蛋白,琼脂糖凝胶电泳法分析血清蛋白组分。结果乙型肝炎病毒表面抗原阳性携带者与正常人血清蛋白各组分之间差异无显著意义(P>0·05);乙型肝炎患者与正常人血清蛋白各组分之间差异均有显著意义(P<0·01)。乙型肝炎患者HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组与乙型肝炎患者HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清蛋白各组分相比较,Alb呈显著降低(P<0·05);α1、α2、β差异无显著意义(P>0·05),γ球蛋白呈显著升高(P<0·05)。结论血清蛋白电泳、总蛋白、白蛋白联合检测可全面了解乙型肝炎患者血清蛋白谱的变化特征,对乙型肝炎的临床诊断和疗效观察有重要的参考价值。     

重组汉逊酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原疏水层析图谱的峰形规律分析

目的探讨疏水层析纯化重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)层析图谱与蛋白含量及HBsAg含量的相关性。方法采用疏水层析纯化8批HP-HBsAg小量试验样品和5批小量验证试验样品及5批酿酒酵母表达的HBsAg对照试验样品,采用Lowry法和电化学发光法(Electrochemiluminescentimmunoassay,ECLIA)分别检测纯化样品中蛋白含量和HBsAg含量,并计算HBsAg的回收率;通过几何法封闭紫外监测图谱特征峰图形,用数字求积仪采用积分法求出各封闭特征峰的图形面积,并进行分析;取小量验证试验1批样品的层析主峰和副峰收液进行电镜观察。结果 8批HP-HBsAg小量试验和5批HP-HBsAg小量验证试验HBsAg的平均回收率分别为70%和54%。HP-HBsAg疏水层析图谱由两部分构成:穿透峰和目标峰(HBsAg峰),目标峰可见高低不同的两个峰(主峰与副峰);对照图谱中有穿透峰和目标峰。对目标峰进行量化分析,主峰、副峰与目标峰的面积比值分别与其所对应的收集量、蛋白含量和HBsAg含量比值相关。电镜观察可见小量验证试验样品主峰收液中HBsAg颗粒大小均一,副峰收液中HBsAg颗粒大小不均一。结论疏水层析纯化重组HP表达的HBsAg效果良好,通过峰形之间面积比值,可获得峰形所对应的收集量、蛋白量和HBsAg量比值,为HBsAg的进一步纯化提供了参考。