利用微生物育种新技术提高酱油酿造用菌的生产性能

本文论述了近年来酱油工业发展情况以及在提高酱油品质方面一些新技术的应用。在酱油酿造用菌的诱变改良方面提出利用新技术——离子注入法对米曲霉进行诱变育种,提高其生产性能。     

酿酒用米曲霉若干菌株的培养特性研究

对国内目前使用较广的米曲霉4#,5#,6#及日本生产用米曲霉菌株1#,2#,3#的产酶作对比试验,研究了培养温度、培养基、初始酸度和培养时间对产酶的影响,分析米曲霉制作过程中的理化性质变化,探索其最佳制曲条件。本实验三角瓶米曲霉糖化力可达1400mg葡萄糖/g曲·h,产酶最适品温为37～38℃,最适pH为5～6;用5#制的曲糖化力和酸性蛋白酶活力较高。     

从酱油生产用菌粉中选诱优良米曲霉菌种的研究

以酱油酿造用菌粉为出发菌(S),经分离、纯化后再经紫外线诱变(15W,20cm,30min)及控温培养处理后,获得1株变异菌株。结果表明:能在44环境中旺盛生长;酶活力可达8158.6u/g(干曲),较出发菌株S酶活力提高了77.84%;遗传稳定性较好;发酵成酱油后经测定,其指标可达揋B181862000低盐固态发酵酱油特级品,明显优于出发菌株酿造的酱油。     

从酱油生产用菌粉中选诱优良米曲霉菌种的研究

以酱油酿造用菌粉为出发菌S,经分离、纯化后再经紫外线诱变(30W、25cm、30min)及控温培养处理后,获得1株变异菌株,进行生产试验。结果表明,该变异菌株能在42℃环境中旺盛生长;酶活力可达7263.5U/g(干曲),较出发菌株S酶活力提高了108.3%;遗传稳定性较好;发酵的酱油经测定,其指标可达“GB18186-2000低盐固态发酵酱油”特级品,明显优于出发菌株酿造的酱油。     

制酱用蛋白酶产生菌的分离和鉴定

研究了黑龙江省西北部地区土壤中霉菌及蛋白酶产生菌的分布情况，并分离到了蛋白酶活力较高、产孢能力较强的菌株QU3601，鉴定为米曲霉。该菌株与沪酿3．042米曲霉混合发酵用于制酱生产，收到了良好的效果。     

酱油生产用菌诱变优化的研究

本文以酱油酿造用菌粉为出发菌(S)，经分离、纯化后再经紫外线诱变(30W，25cm，30min)及控温培养处理后，获得1株变异菌株。结果表明：能在42℃环境中旺盛生长；酶活力可达7263．5μ／g(干曲)，较出发菌株S酶活力提高了108．3％；遗传稳定性较好；发酵成酱油后经测定，其指标可达“GB18186—2000低盐固态发酵酱油”特级品，明显优于出发菌株酿造的酱油。     

从酱油生产用菌粉中选诱优良米曲霉菌种

以酱油酿造用菌粉为出发菌 (S) ,经分离、纯化后再经紫外线诱变 ( 3 0W ,2 5cm ,3 0min)及控温培养处理后 ,获得 1株变异菌株。结果表明 ,该菌株能在 42℃环境中旺盛生长 ;酶活力可达 72 63 5u/g(干曲 ) ,较出发菌株S酶活力提高了 1 0 8 3 %;遗传稳定性较好 ;发酵成酱油 ,其指标可达“GB1 81 86— 2 0 0 0低盐固态发酵酱油”特级品标准 ,明显优于出发菌株酿造的酱油     

从酱油生产用菌粉中选诱优良米曲霉菌种的研究

以酱油酿造用菌粉为出发菌(S)，经分离、纯化后再经紫外线诱变(15W，20cm，30min)及控温培养处理后，获得1株变异菌株。结果表明：能在44℃环境中旺盛生长；酶活力可达8158．6u／g(干曲)，较出发菌株S酶活力提高了77．84％；遗传稳定性较好；发酵成酱油后经测定，其指标可达“GB18186—2000低盐固态发酵酱油”特级品，明显优于出发菌株酿造的酱油。     

NTG和UV复合诱变米曲霉A.O—2原生质体选育米蛋白分解菌的研究

以米曲霉A·0—2原生质体为对象,采用NTG和UV作为诱变剂进行单因子和多因子复合诱变处理,在以米渣为主要原料的固体培养基上培养,选育出中性蛋白酶活力较高,生长快,易于培养的变异株N—4.原料配比为:米渣:麦麸:=2:1;培养时间为48小时;培养温度为30℃的培养条件下,变异株N—4的中性蛋白酶活力最高、与出发菌株A·O—2相比,中性蛋白酶活力提高32.6%。     

增强酱油色度和香气的混菌制曲新工艺研究

以米曲霉AS3.951为主要生产菌,选用根霉、红曲霉为辅助生产菌,各菌种分别单独制种曲,按米曲霉种曲:根霉种曲:红曲霉种曲为7:2:1的比例混合,按制曲原料的0.8%～1%接种混合种曲,制曲时间为36～42 h,固态低盐发酵生产酱油,使酱油的香气和色泽有了很大的提高,同时也提高了酱油原料的利用率和出品率.     

Aspergillus niger C15产柚苷酶发酵条件的优化研究

通过正交实验对黑曲霉菌株C15产柚苷酶的发酵条件进行了优化。实验结果表明,Aspergillus niger C15菌株的最优产酶发酵条件为:2%桔皮粉、6%豆粕粉,250mL三角瓶中装料30mL,接种量3%,最适初始pH为5.0,30℃条件下培养100h,产酶量可达1395.9U/mL。与原始产酶条件相比,产酶量提高8.6%。不同的金属离子对产酶有不同的作用,添加适量的K2HPO4、MgSO4对产酶有明显的促进作用,CuSO4、FeSO4对产酶起抑制作用。      

甜菜糖蜜制取低聚果糖的研究

以甜菜糖蜜为原料,对发酵法制取低聚果糖进行了初步的研究。研究结果表明,通过优化发酵条件,可以使低聚果糖的产率大幅度提高。该法的最适条件为：接种量5％,温度30℃,初始pH7．0,培养时间36h,初始废蜜浓度20％,制得的低聚果糖含量为46．75mg／mL。该法工艺简单,成本低,节约资源。     

固态发酵啤酒糟产木聚糖酶的菌种筛选及其产酶条件研究

从40株保藏菌种中筛选得到1株能发酵啤酒糟高产木聚糖酶的菌株黑曲霉AN27—2—1。通过单因素实验和正交实验对黑曲霉AN27—2—1固态发酵啤酒糟产木聚糖酶的条件进行优化，结果表明：在培养基组分为啤酒糟：玉米芯：麸皮=6：2：2，NH4NO3 2％，吐温800.1％，加水比为1：2，接种量为3．5％，培养温度为30℃，培养周期为2d-3d，产酶活达310．54U／g。     

高温混菌发酵生产果胶酶的研究

为了降低底物抑制效应,提高黑曲霉产果胶酶的能力,在黑曲霉发酵过程中引入酒精酵母,成功构建了黑曲霉GJ-2与酒精酵母J-1混菌发酵生产果胶酶的体系,确定了酒精酵母的最佳接入时间和最佳接入量分别为12h和5mL/50mL,并对其产酶条件进行响应面优化,实验中发现高温对产酶有促进作用,确定最佳产酶条件为:橙子皮29.3g/L,麸皮30.0g/L,硫酸铵11.8g/L,吐温-802.0g/L,发酵温度34.1℃,在此条件下果胶酶酶活为188.12U/mL,比黑曲霉单一体系发酵生产果胶酶提高了63.6%。     

氮离子注入和微波复合诱变选育高产柠檬酸的黑曲霉研究

利用低能离子注入及微波辐射对柠檬酸生产菌进行诱变选育.在30keV能量的氮离子注入以及间隔10s的微波电磁辐射后筛选得到2株产量提高到60％的诱变高产菌,多次传代实验表明菌株遗传稳定性良好,为柠檬酸发酵菌黑曲霉的进一步的育种工作提供了诱变参数和高产出发菌株.     

黑曲霉产菊粉酶的条件及其酶学性质的研究

对黑曲霉SL-09在摇瓶条件下产菊粉酶的奈件及其酶学性质进行了研究。结果发现,接种量和装瓶量对产酶影响不大,而pH值影响较为显著,最佳产酶pH值为6．0;在对催化条件的研究中发现最佳反应温度、底物浓度和pH值分别为60℃、60g/L和6．0;锰离子对酶活有较强的激活作用,最适浓度为1．5×10mol／L;同时发现该酶存在着严重的产物抑制现象,当果糖浓度大于1％时,菊粉酶活力将大幅度下降。     

黑曲霉发酵法制备大豆异黄酮苷元工艺初探

利用能产生β-葡萄糖苷酶的黑曲霉作为菌种,对大豆胚芽进行固态发酵,制备大豆异黄酮苷元。考察了几个主要因素对发酵过程中大豆异黄酮苷元产生量的影响,初步探讨了黑曲霉发酵法制备大豆异黄酮苷元的工艺条件。      

产木聚糖酶毕赤酵母工程菌株构建及表达条件优化研究

将黑曲霉XZ-3S木聚糖酶Xyn43A成熟肽基因插入表达载体p PIC9K,重组质粒SalⅠ线性化后分别电击转化2种毕赤酵母GS115和KM71,转化液经MD平板、G418浓度梯度平板和摇瓶复筛,获得两株重组菌GS115/Xyn43A（Mut⁺）和KM71/Xyn43A（Mut^s）。其中GS115/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度2.0%,接种时间24 h,诱导时间108 h,诱导温度30℃、诱导培养基初始p H6.3;KM71/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度1.75%,接种时间26 h,诱导时间132 h,诱导温度30℃、诱导培养基初始p H6.5。在最优表达条件下两重组菌GS115/Xyn43A和KM71/Xyn43A比酶活力分别可达139.36、143.29 U/mg。      

航天诱变黑曲霉菌株ZM-8产纤维素酶的固态发酵条件研究

以麦秸、麸皮为原料,利用固态发酵对航天诱变后筛选的黑曲霉ZM-8菌株生产纤维素酶的条件进行了研究。结果表明,最佳培养基配方为:小麦秸秆粉与麸皮质量比为8:2,(NH4)2SO4为4%,料水比为1:2;最佳培养条件为:接种量为6%,初始pH值为6.5,培养温度为28℃,培养时间为96h。在以上的培养基和培养条件下,测定滤纸酶(FPA)、羧甲基纤维素酶(CMC)和β-葡萄糖苷酶的活力分别为7.90U/g、24.99U/g、21.74U/g,比出发菌种分别提高了3.0倍、1.66倍、2.24倍。     

黑曲霉发酵韭菜籽产蛋白酶活力的工艺研究

为了充分利用韭菜籽中的蛋白质,本实验研究了黑曲霉液态发酵脱脂韭菜籽粉的不同发酵条件对蛋白酶活力的影响。以发酵液中的蛋白酶活力为指标,用单因素实验结合响应面实验探究了初始p H、接种量、脱脂韭菜籽粉浓度和发酵时间对蛋白酶活力的影响。最佳发酵条件为:初始p H为2.95,接种量10.0%,底物浓度7.00%,发酵时间72.0h。在最佳工艺条件下蛋白酶活力可达到280U/m L。