曲霉型豆豉酿造中米曲霉产蛋白酶作用条件研究

研究曲霉型豆豉酿造用米曲霉沪酿3.042产蛋白酶在其酿造过程中的最适作用条件。利用大豆豆汁培养基对米曲霉沪酿3.042菌株进行培养,并用(NH4)2SO4溶液对所产蛋白酶进行沉淀,脱盐处理后,研究该酶的最适作用pH及pH稳定性、最适作用温度及热稳定性以及Na Cl浓度对酶活力的影响。结果显示:该蛋白酶最适作用pH为6.0,酶活最高为1941U/m L,在pH为6.0~8.0时稳定性较高;最适作用温度为50℃,酶活为2658U/m L,在40℃以下其酶活力较稳定;Na Cl对淀粉酶酶促反应有明显的抑制作用,随着Na Cl浓度的升高,其抑制效果越明显。     

酱油发酵用2种米曲霉中性蛋白酶的酶学性质比较

米曲霉产蛋白酶的性质对酱油品质有重要的影响。研究以一株产中性蛋白酶的米曲霉CICIM F0899为研究对象,首先对其进行扫描电镜观察,与米曲霉沪酿3.042比较表明F0899的分生孢子头较小,分生孢子大于沪酿3.042。其次对F0899和沪酿3.042产蛋白酶酶学性质研究表明F0899产蛋白酶在20～40℃保持稳定,最适反应温度为60℃,在pH 6.0～8.0时保持稳定,最适反应pH为8.0,在盐浓度为18%的条件下,仍能保留20%的酶活,可达沪酿3.042的2.2倍,Ag+对F0899有严重的抑制作用,Fe3+没有明显的抑制。因此,米曲霉CICIM F0899产的蛋白酶在耐高温、耐低pH和耐高盐的性能优于沪酿3.042。     

米曲霉固态发酵产酶条件及酶活力研究

以酱油生产用米曲霉沪酿3.042进行固态发酵,考查了影响米曲霉蛋白酶、木聚糖酶、纤维素酶生产的固态发酵条件,包括碳源、氮源、初始pH值及温度等因素.实验表明,此菌株产酶的最佳碳、氨源分别为麸皮及蛋白胨,最适合产酶的初始pH值为6.0～8.0,温度为30℃.实验并对菌株所产的蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶进行了活力分析,为深入研究及应用米曲霉酶系提供理论依据.     

米曲霉今野菌株所产α-淀粉酶性质的研究

采用硫酸铵盐析 ,再透析提纯得到米曲霉今野菌株的α -淀粉酶 ;该酶能耐受 5 0～ 65℃的高温 ,在 65℃处理 2小时后剩余酶活力为 85 % ;采用正交实验得其在反应过程中所受因素影响大小为酶液浓度 >底物浓度 >pH值 >温度 ,酶反应的最适pH为 6 0 ,最适温度为 60℃ ;以可溶性淀粉为底物时 ,该α -淀粉酶的Km值为 5 8× 10 - 1mol/L ;当NaCl浓度超过 30 %时 ,对酶活有明显的抑制作用 ,剩余酶活力只有 15 %。当NaCl浓度在 18%以下时 ,剩余酶活力在 90 %以上     

诱导激活剂对不同曲霉菌株淀粉酶组分的激活作用

以活性电泳比较了不同酱油生产菌株的淀粉酶组分,研究了激活酿造时淀粉酶组分表达及活性的变化.结果表明,不同菌株淀粉酶组分数量各不相同,其中黑曲霉沪酿3350、黑曲霉3.324、米曲霉3.362和米曲霉HL均含有4个淀粉酶组分,而米曲霉3.042和米曲霉3042KG含有3个淀粉酶组分,米曲霉ZH含有2个淀粉酶组分.经诱导激活剂作用后,所有菌株的淀粉酶总活力提高,5株米曲霉的激活作用明显,米曲霉3.042的淀粉酶总活力提高15.55％.     

豆酱种曲培养过程中米曲霉Y29与3.042产酶特性比较

将米曲霉Y29菌株和沪酿3.042菌株在豆酱制种曲过程中产生的蛋白酶和淀粉酶的活性进行了比较,结果表明:米曲霉Y29菌株的酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力的峰值分别比米曲霉沪酿3.042菌株高了45.55%,15.13%,9.86%,而α-淀粉酶和糖化酶活力二者无显著差异;并且两菌株蛋白酶和淀粉酶酶活高峰出现的时间也一致。     

不同酱油米曲霉制曲过程中的酶活变化分析

米曲霉是酱油酿造过程中的关键微生物,其蛋白酶活的高低及其它酶系的健全程度直接影响到酱油产率及品质的高低。研究对国内外三种优良酱油生产米曲霉菌株的制曲性能进行研究,分析了中性蛋白酶、酸性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶等重要酶系的酶活力变化趋势。结果表明:沪酿3.042的中性蛋白酶活高于RB-A,RB-C;而RB-C在其它酶系方面则具有更高的活力。其中,沪酿3.042、米曲霉RB-A在制曲39h时酶活力最高,米曲霉RB-C在制曲42h时酶活力最高。研究对米曲霉制曲时间的控制具有一定的指导意义。     

米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的研究

研究了酶液组成、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂、培养基成分、再生培养方式等因素对米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的影响,建立了米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的适宜方法,即在查氏液体培养基中28℃培养10h,菌体用0.8mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、1%纤维素酶、1%蜗牛酶、0.5%溶菌酶的复合酶液,30℃酶解4h￣6h后,经0.8mol/L NaCl再生固体培养基,双层平板培养法进行原生质体再生,可获得超过70%的再生率。为进一步通过原生质体技术选育优良的酱制品生产用菌株奠定了方法学基础。     

三株酱油曲霉蛋白酶特性的研究

通过对今野曲霉,沪酿３．０４２、３１１三株米曲霉生理特性和生长规律的研究,得出今野曲霉产酶高峰期为４４ｈ,沪酿３．０４２曲霉及３１１曲霉为４８ｈ;三株供试菌制曲最适温度为２５℃,培养基最适含水量１００％,最适ＰＨ为７;３１１曲霉最适盐分４％,沪酿３．０４２、今野曲霉最适盐分２％。     

多菌种制曲在原池浇淋酱油制曲工艺中的应用研究

采用原池浇淋工艺,添加糖化增香曲(HQ)、曲精(QJ)与米曲霉沪酿3.042进行混合制曲,以沪酿3.042米曲霉、曲精分别单独制曲进行对照实验,对制曲过程中中性蛋白酶、酸性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及理化指标的变化进行了研究。结果表明,曲精和糖化增香曲混合制曲,成曲的酸性蛋白酶活力比曲精单独制曲提高42.6%,但是多菌株组合混合制曲较单菌株制曲,成曲的中性蛋白酶酶活力没有增加,淀粉酶酶活力均不高,未检测到纤维素酶活。     

酱油曲霉优良菌株的评选

作者对常用的酱油生产菌株黄曲霉UV-1229,米曲霉沪酿3.042、UE3362、3811、Xi-3菌株的产酶能力,生长能力和发酵能力进行了比较;并研究了培养温度和培养基水份对各菌种的影响。结果表明,米曲霉沪酿3.042具有较好的综合性能,黄曲霉UV-1229适应性最强。     

米曲霉1228产α-淀粉酶特性的研究

对米曲霉1228产α-淀粉酶的特性及部分酶学性质进行了研究.结果表明,在发酵培养基中豆粕含量20%、NaCl浓度2%、初始pH6.6的条件下,采取3%的接种量,31 ℃培养108 h,此时的酶活最大.该酶的最适作用温度为55 ℃,最适pH为5.0,Ca2+对酶有激活作用,Fe2+、Fe3+、Mn2+、Ba2+和Cu2+对其有不同程度的抑制.     

米曲霉KFRI 888产中性蛋白酶、a-淀粉酶酶学性质的研究

通过对米曲霉KFRI888产中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶学特性进行了研究,实验发现,当温度高于40℃时,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着温度的升高而下降。而中性蛋白酶的最适作用pH为7.0～8.0,淀粉酶的最适作用pH为6.0～7.0,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着NaCl浓度的升高而下降,但a-淀粉酶耐盐性能比中性蛋白酶强。金属离子Ca2 、K 、Mg2 对a-淀粉酶有激活作用,且基本不影响蛋白酶的酶活。     

半干态豆豉高效发酵菌株筛选及其发酵性能评价

为筛选出适用于半干态豆豉发酵的高效菌株,本研究比较分析了产酶能力差异较大的6株米曲霉和1株毛霉的制曲效果及其发酵半干态豆豉品质差异。结果表明,米曲霉（Aspergillus oryzae）沪酿3.042和DM1、DM2代谢α-淀粉酶能力较强,发酵豆豉L*值相对较低;米曲霉24M-1、30M-1和郫酿M003产蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶能力较强,对蛋白质类底物利用程度较高,发酵豆豉中总酸、氨基酸态氮含量具有一定优势。挥发性风味物质方面,沪酿3.042、DM1和DM2制曲发酵豆豉中1-辛烯-3-醇和异戊酸、4-甲基戊酸等酸类物质含量相对较高;米曲霉24M-1、30M-1和郫酿M003制曲发酵豆豉风味丰富度和反式-2-壬烯醛、3-辛酮、异佛尔酮等物质含量相对较高,风味品质佳,适用于豆豉加工。相比于米曲霉,本实验的伞状毛霉（Lichtheimia corymbifera）QM3各酶活力均较低,发酵豆豉中理化指标、游离氨基酸及风味物质含量均较低,品质较差。豆豉发酵品质同制曲菌株产酶能力相关,以α-淀粉酶为优势的制曲酶系利于发酵豆豉色泽和酸类风味物质的形成,以蛋白水解酶类为优势的制曲酶系则利于发酵豆豉...     

茶多酚对米曲霉α-淀粉酶的回收及其特性的影响

研究绿茶中多酚类对米曲霉来源的α－淀粉酶特性的影响。从绿茶中提取茶多酚（TP），对米曲霉α－淀粉酶进行络合，沉淀及回收；以Bernfeild法测定α－淀粉酶与TP络合后，在不同温度，不同pH值，不同底物浓度的活性变化。结果表明：茶多酚对米曲霉α－淀粉酶无活性抑制作用，两者之间具有起混作用；0．3％的茶多酚浓度，获得最大α－淀粉酶活性回收率（约71％）；α－淀粉酶与TP络合后，阳适反应温度由30－50℃范围变为60－70℃；最适pH值由3．0－8．0变为5．0－6．0；在80℃下，活性变化总趋向与游离的α－淀粉酶；180min后能够保85％的酶活力，但是在前40min，酶活力下降较快；Lineweever-Burk图表明，络合后的α－淀粉酶Km由0．18％变为1．03％（可溶性淀粉底物浓度）。结论：米曲霉α－淀粉酶与TP络合后活性不受抑制并可通过这种络合回收，络合后的α－淀粉酶，最适反应温度及最达pH值变大，变窄，对底物的亲和力下降。     

基因组功能注释分析米曲霉ZA189优势酿造性能的遗传基础

米曲霉ZA189是以米曲霉沪酿3.042为出发菌株经传统诱变获得的,具有中性蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶活力高的特性.为深入研究米曲霉ZA189的遗传背景,评估其作为酱油酿造菌株的性能,本研究利用新一代纳米孔测序技术完成了米曲霉ZA189基因组的测序、组装和功能注释.获得的基因组全长36.89 Mb,包含16条Scaff...     

菌种接种方式对黄豆酱品质的影响

以沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉、AS 3.324甘薯曲霉、沪酿3.130毛霉、AS 3.972红曲霉、米根霉和枯草芽孢杆菌为菌种进行制曲、发酵,通过测定发酵7 d后蛋白酶活力和氨基酸态氮含量,研究单菌种制曲发酵、曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵方式对黄豆酱品质的影响。结果表明:曲料混合发酵产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量效果最好,其次为多菌种混合制曲发酵和单菌种制曲发酵。曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵中,2菌种和3菌种组合产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量整体较高,其中曲料混合发酵5号(沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉和枯草芽孢杆菌)产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量最佳,分别达到713 U/mL和0.89 g/100 g。研究发现,沪酿3.042米曲霉成曲、AS 3.35黑曲霉成曲和枯草芽孢杆菌成曲按照曲料混合发酵方式接种更有利于得到品质较优黄豆酱。     

不同菌种制备酱油大曲生产酶系特性及其耐盐性的比较

采用4株米曲霉菌种(j2、y2、x42、x72)与对照米曲霉菌株(沪酿3.042)制备大曲,探究其所产中性蛋白酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶以及糖化酶在盐浓度为0%、5%、10%、15%、20%下酶活力变化。实验结果表明,5株菌株所产酶系中,中性蛋白酶活随盐水浓度的增加显著(P<0.05)下降,酸性蛋白酶和糖化酶在5%盐浓度下活力显著下降(P<0.05),随后酶活力下降速率减慢,α-淀粉酶在5%的盐浓度下无显著下降(P>0.05),随后下降速率加快。此外,相同盐浓度下淀粉酶比蛋白酶更稳定,5株米曲霉菌株的α-淀粉酶和糖化酶在20%的盐浓度下残留率均达到50%。菌株y2、j2所产中性蛋白酶和菌株x72所产酸性蛋白酶的耐盐性优于对照菌株。     

优质米曲霉筛选及复合菌剂构建提升郫县豆瓣蚕豆曲品质

郫县豆瓣是我国优势传统发酵食品,其高品质生产具有重要的工业与文化价值。蚕豆曲制备是郫县豆瓣生产的重要工序,目前使用米曲霉沪酿3.042纯菌株作为工业菌剂。米曲霉沪酿3.042水解酶活力较高却酶系不均,获得新的、具有更高且更均匀酶系的优质菌种或复合菌剂用于蚕豆曲生产,将对郫县豆瓣生产品质提升有极大促进作用。该研究自传统酿造食品微生物菌种库中筛选获得并鉴定2株米曲霉菌株,LBM 30007及LBM 30008,经基础发酵表型研究,2株菌在发酵性能方面优势互补：LBM 30007分泌的水解酶活力及分布均匀度高,LBM 30008孢子萌发速率极快。基于此,结合工业米曲霉沪酿3.042的发酵性能,该研究设计了3菌株复合菌剂制曲。经检测,经复合菌剂制作的蚕豆曲中,酸性和中性蛋白酶活力、亮氨酸氨肽酶活力、氨基酸态氮含量及鲜味氨基酸含量较沪酿3.042单菌制曲均有所提升,特别是对郫县豆瓣酿造至关重要的酸性蛋白酶活力提高了23.25%,鲜味氨基酸含量上升11.33%。该研究获得的优质米曲霉菌株/菌剂及复合菌剂构建思路,对包括郫县豆瓣在内的传统高盐高氮发酵食品生产有潜在应用价值。     

酱油多菌种制曲改善酶系组成的研究

通过对米曲霉3.042、黑曲霉3.350、根霉3.010进行混合制曲试验,以蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶为指标,研究不同比例、制曲温度、制曲时间对复合菌种酶活力的影响.结果表明,三菌种米曲霉3.042、黑曲霉3.350、根霉3.010的比例为3:2:0.5,制曲温度36℃,制曲时间48h,在此条件下,制曲酶系丰富,酶活力高...