一株产CoQ10的类球红细菌分离鉴定及诱变选育

辅酶Q_(10)(CoQ_(10))是天然存在的抗氧化剂和细胞代谢激活剂,具有消除自由基、维持细胞膜通透性、提高机体免疫功能等多种生理作用。选育CoQ_(10)高产菌株并通过发酵法实现该功能化合物的高效合成具有重要价值。作者从污水处理厂的淤泥中分离纯化获得了一株CoQ_(10)高产菌株YLL-13,通过形态观察、生化特性分析及16S rDNA序列比对,鉴定为类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides),命名为R. sphaeroides YLL-13。随后,以R. sphaeroides YLL-13为出发菌株,以维生素K3和4-羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,pHBA)为复合筛选标记,通过亚硝基胍化学诱变,筛选高产突变菌株,并初步研究了其生产CoQ_(10)特性。结果显示,经诱变选育获取了一株遗传稳定的CoQ_(10)高产突变株R.sphaeroides YLL-13-T,其具有相对低类胡萝卜素合成、高生长速率和高CoQ_(10)积累特性。在所考察的发酵体系中,发酵120 h后突变菌株YLL-13-T的生物量、CoQ_(10)产量和CoQ_(10)产率达到83.5、1.04 g/L和12.46 mg/g,比出发菌株分别提高了12.3%、42.5%和23.6%,展现出良好的工业化应用前景。     

LC-MS/MS法分离鉴定迷迭香化学成分

分析迷迭香的化学成分,并测定其在不同极性溶剂中的分布情况,为迷迭香的应用提供依据。用80%乙醇在80℃提取迷迭香干叶3次,得到迷迭香80%乙醇粗提物,再以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水分级萃取,所得萃取液用微孔滤膜过滤,最后通过LC-MS/MS对其中化学成分成分进行分离鉴定。分离得到5种化合物,经鉴定分别为迷迭香酸、迷迭香酚、鼠尾草酚、鼠尾草酸和鼠尾酸甲酯,且不同萃取液所含化合物的种类和相对质量均有差别。结论:萃取剂的极性影响迷迭香化学成分的分布,利用所建立的LC-MS/MS可对5种化合物进行分离鉴定。     

类球红细菌红色素稳定性研究

采用光谱法研究了光、pH、温度、还原剂、氧化剂和食品添加剂对类球红细菌红色素稳定性的影响。试验结果表明:类球红细菌红色素具有较好的光、热稳定性和抗氧化性,还原剂可增加稳定性;pH值对该色素影响明显,中、碱性条件下其较稳定;常见食品添加剂蔗糖和葡萄糖能增加色素稳定性,碳酸氢钠、苯甲酸钠和柠檬酸使色素稳定性降低;氯化铁可增加色素稳定性,氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁和硫酸亚铁均使色素稳定性下降。     

HPLC-ESI-MS/MS快速鉴定蜜橘中4种多甲氧基黄酮

通过HPLC-ESI-MS/MS技术分离鉴定出蜜橘中4种多甲氧基黄酮,分别为蜜橘黄素、35,,6,7,83,’,4’-七甲氧基黄酮、5-降甲基蜜橘黄素、橘皮晶。干燥蜜橘幼果粉碎后用95%乙醇热回流提取,石油醚萃取。HPLC条件为色谱柱:XBridgeTM C18(4.6×250 mm,5μm);流动相:甲醇:水=60:40(体积比);流速:0.8 mL/min;检测波长:330 nm。MS条件:ESI+,鞘气、辅助气为N2,喷雾电压4.5 kV。     

HPLC-ESI-MS/MS鉴定几种提取物的主要花色苷成分

随着人们对食品中合成添加物中潜在的健康意识的提高,水果和蔬菜中天然提取物在食品工业中的应用受到了广泛关注。本文通过高效液相色谱-电喷雾离子化串联质谱联用技术(HPLC-ESI-MS/MS)对几种提取物中的主要花色苷成分进行了成分鉴定。通过对比相关文献结果,推测出葡萄皮花色苷的主要成分为:飞燕草-3-半乳糖苷、矢车菊-3-葡萄糖苷、矮牵牛-3-葡萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷、锦葵素-3-葡萄糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖苷;黑米花色苷的主要成分为:矢车菊素-3-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-葡萄糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖苷;紫甘薯花色苷中主要检测出了:芍药素-3-咖啡酰-对羟基苯甲酰槐糖苷-5-葡萄糖苷、芍药素-3-咖啡酰-阿魏酰槐糖苷-5-葡萄糖苷。通过研究不同提取物中的花色苷成分,为其在食品中的应用提供理论数据。     

类球红细菌纳米粉免疫调节作用研究

为研究类球红细菌纳米粉对小鼠免疫功能的调节作用,先考察纳米磨法和超声波法对类球红细菌干菌中辅酶Q10和类胡萝卜素提取效果的影响,然后以12 g/(kg BW)剂量的类球红细菌纳米粉连续灌胃小鼠36 d后,测定各免疫指标。结果表明,纳米磨法是较优的提取方法。与0 g/(kg BW)组比较,12 g/(kg BW)类球红细菌纳米粉组能提高小鼠淋巴细胞增殖能力,半数溶血值,碳廓清能力,巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率和吞噬指数。处理组对小鼠体重增长无不良影响。类球红细菌纳米粉具有增强免疫力的作用。     

响应面法优化类球红细菌中番茄红素提取工艺

利用响应面法研究有机溶剂提取类球红细菌中番茄红素的工艺。以每克菌体提取所得番茄红素的量作为响应值,在单因素试验基础上,选取皂化时间、料液比、超声时间及提取次数为自变量,采用响应面法研究各因素及其交互作用对类球红细菌番茄红素提取量的影响并建立了番茄红素提取的回归模型,确定了番茄红素提取工艺的最佳条件为以丙酮为提取溶剂、皂化时间28 min、料液比1∶86（g/mL）、超声时间11 min、提取次数2 次。在此条件下,番茄红素提取量为9 326.48 μg/g。本实验所得工艺方法切实可行,为类球红细菌工业化发酵生产番茄红素的进一步研究提供技术参考。     

HPLC-ESI-MS/MS测定牛奶中四环素类抗生素残留

建立高效液相色谱-电喷雾串联质谱法检测牛奶中土霉素、四环素及金霉素残留的分析方法。采用酸化乙腈提取样品并沉淀蛋白,离心、浓缩、正己烷脱脂,经Agilent ZOBAX SB-C18柱分离,以0.1%甲酸-乙腈对待测成分进行梯度洗脱。采用高效液相色谱-串联质谱多反应监测正离子模式检测,外标法定量。结果表明,3种抗生素浓度在50~1 000μg/L范围内线性关系良好,方法定量限(LOQ,S/N=10)为15~25μg/kg,检出限(LOD,S/N=3)为8~15μg/kg,加标回收率为79.6%~88.7%,相对标准偏差为3.2%~6.0%。该方法前处理简单、可靠,灵敏度高,适用于牛奶中四环素类抗生素残留的快速测定。     

类球红细菌降解亚硝酸盐及其影响因素研究

目的:探讨类球红细菌对亚硝酸盐的降解作用及影响因素。方法:将类球红细菌活化后进行微氧培养,添加不同浓度的亚硝酸盐以确定耐受范围;在此基础上确定温度、pH、溶解氧和亚硝酸盐初始浓度对类球红细菌降解亚硝酸盐的影响。结果:亚硝酸盐耐受试验表明类球红细菌最高耐受200mg/kg的亚硝酸盐,在100mg/kg的亚硝酸盐胁迫下能良好地生长。温度、pH、溶解氧和亚硝酸初始盐浓度对类球红细菌降解亚硝酸盐有较大的影响,降解率最高可达35.98%。结论:类球红细菌具有一定的降解亚硝酸盐能力,为后期开发类球红细菌发酵剂提供了理论基础。     

一株能产类胡萝卜素的粘性红酵母的分离与鉴定

通过YPD液体培养基富集培养和稀释涂YPD琼脂平板从苹果皮上分离一株产类胡萝卜素的酵母WP3。基于形态学,生理生化和18SrDNA,ITS区和26SrDNA D1/D2区序列分析确定这株酵母为粘性红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。     

西南委陵菜黄酮的纯化及HPLC-ESI-MS/MS分析

通过静态吸附研究了七种大孔吸附树脂对西南委陵菜黄酮的纯化效果,利用动态吸附考察了样品液的吸附流速和pH值、解吸剂pH值和乙醇浓度等影响因素。发现大孔吸附树脂D101对西南委陵菜黄酮的纯化效果最佳,最佳条件为：样品液pH 4、吸附流速2 BV/h、解吸剂pH 8、解吸剂中乙醇浓度为60%,使纯度由28.24%提高到46.60%。利用高效液相色谱电喷雾离子化串联二级质谱（HPLC-ESI-MS/MS）,根据保留时间、分子离子、二级质谱碎片,对西南委陵菜黄酮成分进行定性分析。通过多反应监控模式（MRM）监控特定碎片离子,以及三种标准品的标准曲线,分别利用外标法和内标法对黄酮进行了定量分析。西南委陵菜黄酮的主要成分及其含量为：芹黄素-7-O-β-D-葡糖苷酸（6.66 μg/mg）、金丝桃苷（2.39 μg/mg）、紫云英苷（2.30 μg/mg）、野黄芩苷（1.95 μg/mg）、木犀草苷（0.44 μg/mg）、翻白叶苷A（0.39 μg/mg）和异牡荆素（0.01 μg/mg）。     

生物转化生成D-阿洛酮糖的类球红细菌的筛选

对鱼塘淤泥、水样中富集分离的27株光合细菌的静止细胞反应产物,采用高效液相色谱进行分析,从中筛选到1株D-阿洛酮糖产率较高的菌株,在形态和常规生理生化方面鉴定的基础上,结合16S rDNA序列分析鉴定为类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides),定名为类球红细菌SK011。SK011利用D-果糖(36 g/L,pH7.5)为底物进行静止细胞转化,45℃,5 h,D-阿洛酮糖产率达到6.54%。     

酸热辅助超声法提取类球红细菌发酵产物CoQ_(10)

以类球红细菌为试验菌株,对其发酵制备的辅酶Q_(10)进行提取。通过比较醇碱皂化法、超声波破碎法和酸热辅助超声法三种不同破胞方法,确定利用酸热辅助超声法提取发酵液中的辅酶Q_(10)。并对酸热辅助超声法进行单因素和正交试验,优化了类球红细菌辅酶Q_(10)的提取工艺,得出的最佳工艺条件为:盐酸300μL,温度80℃,超声波破碎输出功率400 W,工作时间20 min。在此条件下,辅酶Q_(10)得率可达3.738 mg/g。     

降解类胡萝卜素产香细菌的筛选及鉴定

本实验从常年落花的土壤中分离到了6 株能降解类胡萝卜素并且产生香味的菌株。形态学观察和16S rDNA序列分析表明,其中有3 株与Bacillus subtills和Bacillus tequilensis聚在一起,2 株与Bacillusmethylotrophicus和Bacillus pumilus相似性最高,1 株菌与Bacillus licheniformis亲缘关系最近。通过透明圈观察和OD495 nm判定培养基中的类胡萝卜素明显被降解,并且通过气相色谱-质谱法初步分析了其降解产物,产物中主要为2-庚酮、棕榈酸、邻苯二甲酸酐等物质。     

食品中苏丹红的HPLC/DAD/MS分离分析方法研究

本实验研究了一种针对食品中非法添加苏丹红的分析方法,采用固相萃取技术对样品进行前处理,然后用HPLC 对苏丹红样品进行分离,DAD 和MS 进行串联检测。提高了分析检测的准确性、可靠性。本方法灵敏度高,具有较高且稳定的回收率,精密度较好。分析应用结果令人满意。     

高产辅酶Q10类球红细菌的选育及发酵优化

辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)是一种淡黄色的脂溶性醌类,常见于动植物和微生物的细胞内膜中,是天然的抗氧化剂和细胞代谢激活剂。该研究以1株具有CoQ10生产能力的类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)为出发菌株,其在摇瓶水平上初始CoQ10产量为136.47 mg/L,通过常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)诱变和多孔板高通量筛选相结合的方法,确定了ARTP诱变处理的时间为120 s,致死率为90%。在孔板初筛阶段,从5 184株菌的突变菌库采用高通量筛选方法获得8株高产菌株,经过复筛得到1株CoQ10的高产突变菌株7p22,其摇瓶水平CoQ10产量达到158.44 mg/L,相比出发菌株提高了16.1%。验证其遗传稳定性后,进一步优化了碳源、前体物质、金属离子等,提高了辅酶Q10的产量。最后,在5 L发酵罐上对突变菌株进行培养条件的优化,CoQ10产量提高至1 640.6 mg/L。该研究所使用的结合筛选因子和Craven test检测法的高通量筛选方法可以实现简单、高效...     

类球红细菌对亚硝酸盐和食盐及pH的耐受性研究

目的:旨在探讨类球红细菌对亚硝酸盐、食盐和低pH的耐受性,为类球红细菌应用于腌腊肉制品加工提供初步的理论基础.方法:将类球红细菌分别在不同浓度的亚硝酸盐、食盐和低pH胁迫下生长,绘制生长曲线,确定亚硝酸盐、食盐和pH的耐受范围;绘制类球红细菌在亚硝酸盐、食盐和低pH同时存在时的生长曲线.结果:类球红细菌对100 mg/...     

不同提取方法对类球红细菌超氧化物歧化酶抗氧化活性的影响

采用纳米磨法、酶法辅助超声波法、超声波法和研磨法提取类球红细菌超氧化物歧化酶(SOD),测定SOD活力;以还原力、ABTS+·、·OH和O2-·的清除作用为指标考察这4种提取方法对湿菌体SOD体外抗氧化活性的影响,并比较了纳米磨法和超声波法对干菌体SOD清除·OH和O2-·的作用。结果表明,纳米磨法提取湿菌体和干菌体SOD的活力最高,分别为36.90±1.25 U/g和214.20±7.72 U/g。这4种提取方法提取湿菌体的SOD均具有体外抗氧化活性;纳米磨法SOD的抗氧化活性最好,固液比1:15时,其对ABTS+·、·OH和O2-·的清除率分别为92.1±3.32%、76.90±2.67%和36.90±1.22%,还原力为11.30±0.35。纳米磨法干菌的SOD抗氧化活性优于超声波法,固液比1:20时,其对·OH和O2-·的清除率分别为57.10±1.96%和79.40±2.71%。类球红细菌SOD具有较强的抗氧化能力,且与菌体浓度呈量效关系,纳米磨法是较优的提取方法。     

高产类胡萝卜素红法夫酵母的筛选

通过亚硫基胍诱变，以色素合成抑制二苯胺和β－紫罗酮为筛选剂，筛选到数株类胡萝卜素含量较原发菌株高的突变株，其中一株经二次诱变，类胡萝卜素含量比亲株提高82．9％，本研究选用5种酵母生长抑制作为筛选剂，其中以硫酸铜效果最好。     

高产类胡萝卜素红法夫酵母的筛选

通过亚硝基胍诱变 ,以色素合成抑制剂二苯胺和 β -紫罗酮为筛选剂 ,筛选到数株类胡萝卜素含量较出发菌株高的突变株 ,其中一株经二次诱变 ,类胡萝卜素含量比亲株提高82 9% ,尝试了 5种酵母生长抑制剂作为筛选剂 ,其中以硫酸铜效果最好。