双酶法制备沙丁鱼ACE抑制肽的工艺研究

本实验以广东大宗低值沙丁鱼为原料,采用不同蛋白酶降解沙丁鱼以筛选合适的酶组合,然后对原料的酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺进行研究。结果表明,制备沙丁鱼ACE抑制肽的酶组合为:木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶;酶解的最佳工艺参数为:第一步采用木瓜蛋白酶进行酶解,酶解温度70℃、p H7.5、反应时间2.25 h、酶添加量4000 U/g、料液比30%(w/v);采用碱性蛋白酶进行第二步酶解,酶解温度70℃、p H10.0、反应时间2.0 h、酶添加量5000 U/g。通过工艺优化,沙丁鱼蛋白质的水解度提高到28.44%,并且最终水解蛋白肽的ACE抑制率为73.44%。      

利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化

运用正交试验和响应面法优化牡蛎血管紧张素转换酶(angiotensin-Ⅰconverting enzyme,ACE)抑制肽的分步酶解制备工艺。采用复合蛋白酶和碱性蛋白酶对牡蛎进行分步酶解,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析和ACE抑制率为考核指标优化工艺参数。结果表明,第1步复合蛋白酶最佳工艺参数为:料液比1∶4、加酶量1.2%、pH 7.0、反应温度50℃、酶解时间1 h;第2步碱性蛋白酶最佳工艺参数为:加酶量0.42%、pH 8.3、反应温度53℃、酶解时间73 min。凝胶过滤色谱法测得牡蛎酶解液分子质量在3 000 D以下小肽所占比例为99.72%,其ACE抑制活性IC50为0.8 mg/mL。同时,氨基酸组成分析表明,牡蛎肽中Glu含量最高,Cys含量最低;必需氨基酸和疏水性氨基酸含量分别占总氨基酸的36.6%和37.2%。本研究制备的低分子质量、高ACE抑制活性牡蛎肽,可为牡蛎资源的开发利用提供理论参考。     

小米多肽酶解工艺及其抗氧化和ACE抑制活性

以小米蛋白为原料，制备具有抗氧化活性和血管紧张素转移酶(ACE)抑制活性的食源性多肽。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解小米蛋白，选取最优酶解工艺。选用碱性蛋白酶酶解4 h，得到的蛋白水解液分别通过3 ku和10 ku的超滤膜，得到分子质量＜3，3~10 ku和＞10 ku的3种组分，测定其抗氧化活性和ACE抑制活性。结果表明:采用碱性蛋白酶酶解4 h得到的蛋白水解液经超滤后得到分子质量＜3 ku的多肽具有最高的抗氧化活性和ACE抑制活性，其DPPH清除能力为38.44%，ABTS自由基清除能力为81.62%，羟基自由基清除能力为68.49%，ACE抑制活性为87.53%。此方法得到的多肽分子质量小，功能氨基酸含量较高，具有良好的抗氧化活性和ACE抑制活性。本研究结果为抗氧化肽和ACE抑制肽的开发提供试验依据，对未来工业化的发展提供理论参考。     

响应面法优化核桃降压肽的酶解工艺研究

本研究以低温脱脂核桃粕为原料,采用碱溶酸沉提蛋白后,分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶制备核桃多肽,以血管紧张素转化酶（Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE）抑制率和水解度为指标,选出酶解效果最好的酶,并且对其底物质量浓度、加酶量、酶解温度、酶解时间和p H进行单因素实验,在此基础上采用响应面实验优化其制备核桃降压肽的最佳水解工艺。结果表明:在底物质量浓度30g/L、加酶量8000U/g、酶解温度57℃和p H8.6的条件下水解3h,ACE抑制率可达64.32%,此时酶解液的水解度为21.57%。      

膜法制备血红蛋白血管紧张素Ⅰ转化酶抑制肽

研究了猪血粉酶解及超滤法制备血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)抑制肽的工艺条件。首先将胃蛋白酶的猪血粉水解产物,依次通过30、10 ku和6 ku 3个截留分子质量(MWCO)的超滤膜,获得4组不同分子质量段(P-Ⅰ、P-Ⅱ、P-Ⅲ和P-Ⅳ)的血红蛋白多肽组分,质量浓度为1 mg/m L时,4个组分对ACE的抑制率分别为16.5%、21.7%、24.3%和55.6%。其次对抑制活性较低的3组分,分别用胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行二次酶解,底物浓度均为2.0%,酶与底物质量比1.0%,根据ACE抑制率,分别确定各组分的二次酶解条件,结果显示P-Ⅰ、P-Ⅱ使用碱性蛋白酶酶解1 h时活性最强,P-Ⅲ使用中性蛋白酶酶解5 h时活性最强,得出结论血红蛋白二次酶解使水解产物的活性增强,且蛋白酶水解与膜分离的工艺适合于工业化生产。     

酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺研究

以鹰嘴豆为原料,以其酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度为指标,比较中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对鹰嘴豆的酶解效果,并进一步对碱性蛋白酶的酶解工艺参数进行响应面法优化。结果表明碱性蛋白酶的酶解效果最好,响应面法优化得到碱性蛋白酶酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的最佳工艺条件为:酶解时间5.1 h,酶解温度57℃,底物浓度5.2%,p H 10.0,加酶量4 000 U/g。在该工艺条件下,鹰嘴豆蛋白水解度为14.51%,酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达32.79%。     

酶法制备火麻肽及其血管紧张素转化酶抑制活性研究

以火麻蛋白为原料,在碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味酶和木瓜蛋白酶4种单酶酶解火麻蛋白的基础上,再优选碱性+中性蛋白酶、碱性+风味酶、碱性+木瓜蛋白酶双酶分步对火麻蛋白进行酶解,酶解物(HPH)及其超滤组分的体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性采用高效液相检测法(HPLC)进行测定。结果得到火麻蛋白最佳酶解组合为碱性+中性蛋白酶,最佳工艺条件为:碱性蛋白酶加酶量8000 U/g,pH10.0,酶解温度50℃,酶解时间4 h;中性蛋白酶加酶量8000 U/g,pH7.0,酶解温度45℃,酶解时间4 h,分步酶解物水解度(DH)和ACE抑制活性分别达74.52%和82.14%,但其与超滤各组分对ACE抑制活性差异并不显著。该研究为产业化制备火麻降血压肽提供理论依据。     

酶解法制备葵花籽粕ACE抑制肽

试验以ACE抑制率为指标,通过单因素和正交试验确定酶解法制备葵花籽粕ACE抑制肽的最优工艺。结果表明:碱性蛋白酶制备葵花籽粕ACE抑制肽的最佳工艺为:溶液p H 8,加酶量7%,水浴温度55℃,酶解时间2 h。葵花籽粕ACE抑制率为85.49%±0.80%。     

紫薯多酚蛋白复合物酶解及降血糖组分制备工艺优化

采用双酶水解法结合超滤膜分离从紫薯多酚蛋白复合物中制备降血糖肽组分。以酶解产物的水解度及α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶中筛选出2种蛋白酶,以酶解时间、pH、加酶量和酶解温度分别进行单因素和正交实验优化酶解工艺。酶解工艺最佳条件为:底物浓度0.01 g/mL,木瓜蛋白酶在pH7.0、温度50℃、酶添加量5000 U/g的条件下酶解1 h;灭活冷却后,碱性蛋白酶在pH8.0、温度60℃、酶添加量6000 U/g的条件下酶解5 h。得到酶解产物的水解度为25.72%,α-葡萄糖苷酶抑制率为24.18%。为探究酶解产物中不同分子质量的降血糖活性组分,酶解液分别通过3ku和10ku超滤膜后得到3个组分(组分1:分子质量3 ku,组分2:分子质量3～10 ku,组分3:分子质量10ku),通过胰岛素抵抗模型HepG2细胞实验验证3个组分的降血糖活性。结果表明,组分1可增加胰岛素抵抗模型细胞对葡萄糖的消耗量,可作为分离纯化制备紫薯高活性降血糖肽类物质的优选来源。     

大米蛋白抗氧化肽的酶法制备工艺研究及其优化

以大米蛋白粉为反应底物,采用酶解法制备大米蛋白抗氧化肽。以酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶为最佳用酶。通过BoxBehnken响应面设计法优化木瓜蛋白酶酶解大米蛋白抗氧化肽的工艺条件为p H值5.25、酶解温度61.4℃、加酶量5.6 U/m L、底物质量浓度5.3 g/100 m L。其酶解液稀释5倍后对DPPH自由基的清除率为94.8%。     

响应面优化复合酶制备中华蜂蛹活性肽工艺研究

以中华蜂蛹为原料,研究复合酶制备中华蜂蛹蛋白肽的工艺。以中华蜂蛹蛋白肽的肽得率为参考指标,确定了木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶添加顺序和添加比例。采用单因素法确定酶解最佳工艺参数,响应面法优化复合酶酶法制备中华蜂蛹蛋白肽的工艺条件。研究结果表明,制备中华蜂蛹蛋白肽的最佳工艺条件为:木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶添加比例按酶活力比2︰1同时添加,酶用量4 503.5 U/g,底物浓度4.5%,p H 8.3,酶解温度59.9℃,在该工艺条件下中华蜂蛹蛋白肽的肽得率可达65.2%。     

酶解核桃蛋白制备降血压肽的工艺优化

以蛋白质含量为88%的核桃蛋白为试验原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用酶解产物血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为检测指标。考察酶解温度、p H值、加酶量以及底物浓度这4个因素对酶解产物ACE抑制率的影响,通过响应面优化试验,重复3次验证性试验,最后确定酶解的最佳工艺条件酶解温度、p H值、加酶量、底物浓度分别为:55℃、9.0、7 300 U/g、2.7%,酶解物的ACE抑制率平均可达60.23%。经超滤分离,得到小于3 k Da分子量的核桃降压肽,IC50值最低为0.389 3 mg/m L,其ACE抑制活性最高。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

鲍鱼脏器酶解工艺条件的优化

以鲍鱼内脏为原料,采用碱性蛋白酶水解鲍鱼内脏制备血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽。在单因素试验的基础上,采用响应面法和Box-Behnken试验优化酶解鲍鱼内脏的工艺条件。以ACE抑制率为考察指标,探讨了酶解温度、加酶量和酶解时间对ACE抑制率的影响。试验结果表明,最优工艺条件为酶解温度52 ℃,pH 9.0,料液比1∶3（g∶mL）,加酶量4.5%,酶解时间5.5 h,此条件下获得的鲍鱼内脏酶解产物的ACE抑制率为79.72%。     

酶解水牛乳蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化

以水牛乳蛋白为原料,选用6种蛋白酶在各自适宜的条件下酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,用高效液相色谱检测酶解产物对ACE的体外抑制活性,筛选出胃蛋白酶为制备水牛乳蛋白ACE抑制肽的最佳用酶.在此基础上,分别考察了酶解时间、初始酶用量、初始底物浓度、酶解温度和pH值对酶解工艺的影响,得到水牛乳蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解工艺条件:酶解时间为3h,酶用量为10 000U/g,底物质量浓度为20 g/L,反应温度为37℃,pH值为2.0,此时酶解产物的水解度为17.4％,ACE抑制率可达90.0％.采用超滤技术对酶解产物活性组份进行分离富集,结果表明产物中高活性部分均可富集于10 ku和5 ku渗透液中,且高活性组份分子量主要集中在5 ku以下,该组份对ACE的活性抑制率为84.7％.     

分步酶解法制备菜籽降血压肽

以菜籽蛋白为原料,用两种蛋白酶将其分步水解制备降血压肽。从4种酶的两两组合中筛选出了最佳酶组合碱性蛋白酶和中性蛋白酶,采用紫外检测法对酶解产物中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性进行测定。对酶解工艺进行优化,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计试验,运用Design-Expert软件处理,建立制备菜籽降血压肽的三元二次回归正交模型。结果确定最佳酶解条件为:碱性蛋白酶和中性蛋白酶为分步水解的酶、底物的质量浓度5.65g/100mL、加酶量6.5%、酶解温度54.9℃,ACE抑制率理论值为50.303%,在此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为50.12%的菜籽降血压肽。     

紫贻贝酶解工艺及抗炎活性研究

目的：结合抗炎指标对紫贻贝酶解工艺进行筛选,确定最佳制备工艺。方法：采用脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型评价抗炎作用。以酶解得率和NO抑制率为指标,从菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶6种蛋白酶中筛选出最佳蛋白酶和超滤组分,并通过正交试验优选最佳试验方案。结果：紫贻贝经胰酶酶解得到的分子质量小于5ku的组分抗炎效果最佳。最佳工艺条件为料液比为1:15(w:V)、加酶量为1.5%、酶解时间3 h,在此条件下的酶解得率为13.54%(以鲜品计),NO抑制率为99.17%。结论：紫贻贝酶解物具有明显的抗炎作用,制备工艺合理可行,适合工业化生产。     

龙须菜蛋白酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

通过酶解法酶解龙须菜蛋白制备ACE抑制肽,考察风味蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶的龙须菜蛋白酶解液对ACE抑制活性,并对酶解工艺进行优化。最后选出胰蛋白酶为ACE抑制肽的适宜蛋白酶,在单因素的基础上,采用响应面分析法对胰蛋白酶的酶解工艺进行优化。结果表明：最佳酶解工艺为：pH为8.0,酶底比为6%,温度为35℃,在此条件下,制备的多肽（2.0 mg/mL）对ACE的抑制率为72.37%。