桃果实褐腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗活性

以桃褐腐菌(Monilinia fructicola)为靶菌,采用稀释分离法和平板对峙法从桃园土壤中筛选出对病原菌有较强拮抗作用的菌株12a和14b。通过离体和活体实验对拮抗菌抑菌活性进行研究,经菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌株鉴定。结果表明:菌株12a和14b分别鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),其无菌发酵滤液和挥发性代谢产物对桃褐腐菌的生长有显著的抑制作用,其中12a挥发性代谢产物对其菌丝生长的抑菌效果更为显著(p0.05)。两株拮抗菌的菌液浸泡和熏蒸桃果实,延缓了桃褐腐病发病时间,有效地控制了病斑的扩展。     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

胡麻枯萎病生防芽孢杆菌筛选及抑菌效果研究

为筛选拮抗胡麻枯萎病菌的生防微生物,对采自我国不同省份胡麻根围土壤进行了细菌分离和拮抗菌筛选。根据土样中151株病原菌尖孢镰刀菌[Fusarium oxysporum f.sp.lini（FOL）]对峙培养获得21株拮抗芽孢杆菌,其中XJ2-20拮抗效果最好,盆栽实验的胡麻枯萎病防效可达56.3%,经鉴定为枯草芽孢杆菌。菌株XJ2-20对151株镰刀菌株的抑菌率最高可达64.5%,其发酵滤液可抑制尖孢镰刀菌生长及抑制分生孢子萌发。菌株XJ2-20的抑菌活性物质的最佳硫酸铵沉淀浓度为70%,活性物质对热和胰蛋白酶敏感,最适pH为7。其最佳发酵条件为LB液体培养基（初始pH 7.2）、每300mL三角瓶装液量50～100mL,29℃培养5d。     

抗青霉芽孢杆菌优良菌株的分离、筛选及鉴定

为了获得一株对青霉有强烈拮抗作用的芽孢杆菌以应用于食品的防腐保鲜中,从木瓜、柑橘、葡萄、全麦面包、太子参、陈皮等食品及中草药共计30个样品中分离得到132株芽孢杆菌。通过平板对峙法,筛选出18株对青霉有较强拮抗作用的芽孢杆菌。对其中3株抑菌效果显著的芽孢杆菌利用杯碟法测定其发酵液的抑菌效果,最终筛选出一株芽孢杆菌LPL40,其发酵上清液对青霉的抑菌圈直径达到(13.94±1.90)mm。通过形态学、生理生化及16S rDNA鉴定,最终将该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌LPL40(Bacillus amyloliquefaciens LPL40)。     

黑曲霉拮抗细菌的筛选、鉴定和生防条件优化

为筛选出对葡萄贮藏中污染黑曲霉具有良好抑制作用的拮抗菌，本研究通过平板稀释法从土壤中筛选出对葡萄采后引起霉菌病变的黑曲霉有较强抑菌作用的菌株，采用形态学和分子生物学相结合的方式对拮抗细菌进行鉴定，并使用单因素和正交试验方法优化其生防条件。结果表明:本研究从新疆葡萄园土壤中分离到14株对黑曲霉具有抑菌效果的细菌，其中，菌株G8对黑曲霉的抑菌效果最佳。经鉴定，黑曲霉拮抗细菌G8为暹罗芽孢杆菌（Bacillus siamensis）。暹罗芽孢杆菌G8最佳生防条件为:接种量3%，培养基初始pH为7，培养温度为33 ℃，培养温度摇床转速为160 r/min，培养时间为33 h，该条件下抑菌直径达到28.79 mm。研究结果将为拮抗细菌在葡萄采后黑曲霉生物防治中的应用提供理论依据。     

烟草疫霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件优化

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为60.6%,且抑菌谱广,对其进行16S rRNA基因序列分析后将该菌株鉴定为多粘芽孢杆菌。采用单因素优化试验初步探究了多粘芽孢杆菌LB-9的最适发酵条件,明确了LB-9的最适发酵培养基、最适发酵温度、最适发酵时间和最适发酵初始pH值,对其生防制剂的开发应用具有重要意义。     

易门豆豉中芽孢杆菌分离筛选及产酶特性研究

该研究从云南传统发酵豆制品易门豆豉中分离筛选获得产淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶的芽孢杆菌,利用水解圈法初筛、摇瓶发酵复筛得到产酶菌株,并对产酶较高的菌株进行生长性能分析和分子生物学鉴定。结果表明,从易门豆豉中分离纯化得到64株菌,筛选得到1株产淀粉酶和蛋白酶能力均较好菌株NB-13,其淀粉酶和蛋白酶活力分别为100.64 U/m L和34.30 U/m L;1株产脂肪酶能力较好的菌株ND-21,其脂肪酶活力为39.95 U/m L;2株产纤维素酶能力较好的菌株,菌株ND-38、NB-55,其纤维素酶活力分别为1.65 U/m L和1.72 U/m L;由生长状况结果可知,菌株ND-21和NB-13富集的菌量最多,生长能力最强;菌株NB-13和NB-55分别被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,菌株ND-21、ND-38被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。     

2株樱桃腐败真菌的鉴定及贝莱斯芽孢杆菌对其抑制作用

为了获得绿色、安全的樱桃天然防腐保鲜剂,从腐败的樱桃上分别分离出2株主要的腐败菌,经菌落形态和分子生物学鉴定,初步鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)和总状毛霉(Mucor racemosus),分明命名为BC-1和SC-1。从实验室保存的菌种库中筛选出两株对樱桃腐败菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,通过形态学及分子生物学鉴定,初步确定均为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),分别命名为KA-2和XK-5。采用LB和landy培养基发酵两株菌,用贝莱斯芽孢杆菌的两种培养基发酵液酸沉后浸泡的方法研究其对樱桃的防腐保鲜作用,发现贝莱斯芽孢杆菌XK-5 landy发酵液酸沉提取物具有更好的防腐保鲜作用。该贝莱斯芽孢杆菌菌株有望作为生产新型绿色、安全的生物防腐保鲜剂的优良菌种。     

海南雪茄烟叶霉变微生物鉴定及拮抗菌株筛选

为明确引起海南雪茄烟叶霉变的微生物种类并筛选其拮抗菌株防治烟叶霉变,分别从海南霉变雪茄烟叶表面分离、纯化得到霉变微生物和拮抗微生物,采用形态学和分子生物学相结合的方法鉴定微生物种类。鉴定和筛选结果表明,引起海南雪茄烟叶霉变的微生物主要为篮状菌属、帚霉属和曲霉属,得到3株霉变菌株分别为Talaromyces funiculosus、Scopulariopsis brevicaulis和Aspergillus occultus。筛选到2株拮抗效果良好的拮抗菌株,分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）。引起海南雪茄烟叶霉变的微生物主要为篮状菌属、帚霉属和曲霉属菌株,筛选到的2株芽孢杆菌对致霉菌有良好的拮抗作用,为雪茄烟叶霉变的防治提供了参考。     

高温大曲中产吡嗪芽孢杆菌的分离鉴定及发酵产物分析

该试验从高温大曲中筛选产吡嗪芽孢杆菌（Bacillus）,通过形态观察及磷脂脂肪酸（PLFA）分析对其进行鉴定,并采用发酵试验分析其代谢产物。共筛选出3株芽孢杆菌,即菌株B1、B2、B3。经分析鉴定后得出：菌株B1为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）;菌株B2和B3为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）。3株菌发酵产物分析结果表明,在液态发酵条件下3株菌发酵产吡嗪,其中菌株B2和B3发酵产物中吡嗪相对含量较高,均＞60%;固态发酵条件下生成吡嗪前体物质3-羟基-2-丁酮,且发酵产物中相对含量均＞75%。表明这3株芽孢杆菌对酱香型白酒风味物质的产生有着一定的影响。     

泡菜中产抗菌素的乳酸菌筛选和性能鉴定

主要是对自然发酵泡菜中的乳酸菌素产生菌株分离筛选、鉴定。采用TJA培养基初步筛选9株典型菌株进行抗菌素产生菌的筛选,供试菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。通过抑菌实验,综合菌株的形态学特征、生理生化特征,筛选确定了2株细菌素产生菌菌株。     

窖泥中酯化菌的筛选鉴定及协同发酵条件优化

该研究对窖泥中酯化菌进行筛选,通过形态学观察和分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定。将筛选菌株与异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）JM-4协同发酵,以酯化酶活力为指标,通过单因素及正交试验优化其发酵条件,并采用顶空固相微萃取结合气质联用（HS-SPME-GC-MS）技术分析发酵产物挥发性风味化合物。结果表明,获得3株酯化酶活力较高的细菌,分别编号为CY-1、CY-2、SY-3。菌株CY-1、CY-2、SY-3分别被鉴定为阿氏芽孢杆菌（Priestia aryabhattai）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、暹罗芽孢杆菌（Bacillus siamensis）。将3株酯化菌与菌株JM-4协同发酵,其最优发酵条件为接种量6%、初始pH值为4.5、发酵时间48 h。在此优化条件下,酯化酶活力达到52.67 U/m L,是优化前的1.23倍。HS-SPME-GC-MS结果表明,协同发酵提高了挥发性风味化合物含量,产生了己酸、辛酸、2,3-丁二醇等挥发性风味化合物。     

产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4 U/mL~10.4 U/mL之间。经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌。     

真空包装冷鲜牛肉中生物保护菌的分离鉴定与生物学特性

从真空包装冷鲜牛肉中分离筛选得到7 株具有生物保护潜力的乳酸菌，通过细菌形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA分子生物学鉴定确定为清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei）。所有分离菌株均在25～35 ℃生长良好，其中菌株RS-16和RS-25的生长及产酸能力较强，除RS-33和RS-41外，其他菌株均未检测出耐药性或毒力基因。使用琼脂扩散法对7 株分离菌的抑菌性进行测定，结果表明，分离菌株对所有指示菌均表现出拮抗效果，且菌株RS-16和RS-25对鼠伤寒沙门氏菌的拮抗效果显著优于其他菌株；对保护菌的抑菌产物分析表明其抑菌性来源于有机酸。本研究从真空包装冷鲜牛肉中分离鉴定并筛选得到2 株具有生物保护潜力的清酒乳杆菌，丰富了生物保护菌的种质资源。     

地衣腌菜中产广谱细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

采用滤纸片双层平板法从自制酸奶、市售散装腌菜和袋装榨菜中分离出乳酸菌,再对分离的乳酸菌进行抑菌试验、酸和过氧化氢抑制作用的排除、蛋白酶的敏感检测和抑菌谱测定,最后对所得菌株形态和生理生化特性进行鉴定。结果:从样品中筛选到5株具有较高抑菌活性的乳酸菌菌株,在排除了酸和过氧化氢干扰后,发酵上清液仍有很强的抑菌作用;经蛋白酶处理后,发酵液的抑菌活性显著下降,说明该抑菌物具有蛋白质性质,是一类细菌素。这5株菌对绿脓假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌均有很强的抑菌活性,并选出抑菌活性最强的菌株E2-2,初步鉴定其为戊糖乳杆菌。     

一株黄曲霉拮抗细菌的分离筛选及鉴定

通过稀释分离法从土壤中分离纯化出一株具有黄曲霉拮抗活性的菌株。该菌株的次生代谢产物具有抑制黄曲霉生长的效果,抑菌率可达63%。该菌对多种病原真菌抑制效果明显,具有广谱抑菌效果。根据形态学观察、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

北冰洋来源白色念珠菌拮抗菌株的分离与鉴定

采用涂布平板法、对峙培养法及琼脂扩散法从北冰洋沉积物样品中分离、筛选对白色念珠菌（Canidia albicans）具有良好拮抗作用的菌株,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其抑菌谱进行研究。结果表明,从北冰洋沉积物样品中共分离纯化出314株菌株,其中,4株菌株对白色念珠菌具有明显拮抗作用,且菌株56#拮抗效果最好,抑菌圈直径为（32.14±0.72） mm。菌株56#被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其对大肠杆菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、屎肠球菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌都有一定的抑制作用,是一株广谱抗菌的海洋微生物。     

拮抗丁香假单胞菌海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物，首先采用滤纸片法对丁香假单胞菌拮抗菌株进行初筛，然后采用牛津杯法进行复筛，并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后研究其抑菌谱。结果表明，从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物，经过初筛得到33株丁香假单胞菌拮抗菌株，再经过复筛后，筛选出一株对丁香假单胞菌抑菌效果最好的菌株，编号为NO.4.1.3-1，其抑菌圈直径达（12.63±0.06） mm。该菌被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）；除屎肠球菌外，该菌对8株致病菌均有抑制作用，且对肺炎克雷伯氏菌、金黄葡萄球菌的抑菌作用较好，具有较广的抑菌谱。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及发酵条件优化

该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1（AFB1）菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱（HPLC）法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。     

一株甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定

为研究一株甲基营养型芽孢杆菌拮抗特性及其抑菌活性物质,试验采用牛津杯法和平板对峙培养法,研究甲基营养型芽孢杆菌BFWR11对真菌的生物拮抗作用,分别采用酸沉淀、正丁醇萃取、硫酸铵沉淀从发酵上清液中提取脂肽、有机酸和粗蛋白,并基于代谢组学技术对其抑菌活性代谢产物进行了分析鉴定。甲基营养型芽孢杆菌BFWR11对赤霉菌、灰霉菌、黑曲霉菌均有明显的拮抗作用,发酵液及其不同提取物也表现出一定的抑制作用。正丁醇萃取物中分离鉴定到棕榈酸、阿扎胞苷、3-羟基苯甲酸、肉豆蔻酸、水杨酸等主要抑菌相关物质,粗蛋白提取物中分离鉴定出表面活性素合成酶亚基、聚酮合成酶、鞭毛相关蛋白等抑菌蛋白相关物质。甲基营养型芽孢杆菌BFWR11繁殖活力强,对真菌有显著的抑制作用。BFWR11菌株在LB肉汤中可产生多种抑菌活性物质进行协同抑菌,在食品加工及生物防治领域具有一定的应用价值。