罗非鱼源肠道益生菌的分离鉴定及其体外益生特性分析

为了筛选出优良的鱼源益生菌,作者以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验材料,进行肠道芽孢杆菌和乳酸菌的分离、鉴定,并对分离得到的菌株进行抑菌活性、耐酸性、耐胆盐、人工胃肠液耐受、溶血活性和抗生素敏感性等体外益生特性分析。结果表明,从罗非鱼肠道中共分离得到109株菌,其中包括79株乳酸菌和30株芽孢杆菌,经过一系列的实验最终筛选出3株乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。生物学特性研究表明,3株菌均无溶血活性,对抗生素具有一定的敏感性,对强酸、胆盐和人工胃肠液具有一定的耐受性,对水产病原菌具有不同的抑菌活性。筛选得到的3株菌丰富了鱼源益生菌资源,它们均可作为优良的鱼源益生菌候选菌株。其中,菌株R1对强酸和人工胃肠液耐受性最强,菌株R29耐胆盐能力最强,可进行进一步的益生特性研究,挖掘其作为食品源益生菌的益生效果。     

凝结魏茨曼氏菌BC66的筛选、鉴定及特性研究

本研究旨在分离和筛选一株用于微生态制剂的益生菌。根据耐高温和产乳酸特性，从仔猪粪便中筛选到一株芽孢杆菌。通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析，该菌株鉴定为凝结魏茨曼氏菌，代号为BC66。在此基础上，通过体外实验考察了凝结魏茨曼氏菌BC66菌株的益生菌潜力，包括对胃肠道条件的耐受性（低pH，胆盐耐受性）、对病原菌的抑菌能力和抗生素敏感性。实验结果表明，BC66菌株在pH3.0酸性条件下处理2 h，菌株存活率达98%,0.3%胆盐浓度下处理2 h，菌株存活率达79%，在90℃水浴中处理10 min菌株芽孢存活率可达92%。而且，BC66菌株对大肠杆菌和沙门氏菌的生长具有较强的抑制能力。对所有测试的抗生素都表现出很好的敏感性，且没有观察到溶血活性。上述结果表明，本研究分离筛选的凝结魏茨曼氏菌BC66具有较强的抗逆性且益生性能良好。该菌株有可能作为饲料添加剂中潜在的候选益生菌，为应用于微生态制剂的研发奠定了基础。     

虾酱源芽孢杆菌的筛选及其益生特性

从市售农家制作传统虾酱中筛选分离5株芽孢杆菌，经鉴定后命名为解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32和蜡样芽孢杆菌BI6Y。5株菌都可在10%的盐质量分数下正常生长，具有不同产蛋白酶和脂肪酶的能力以及抑菌特性。其中，蜡样芽孢杆菌BI6Y具有β溶血性，对氯霉素、万古霉素、诺氟沙星不敏感，不适合作为益生菌。其它4株芽孢杆菌具有γ溶血性，对氯霉素不敏感，自聚集率在25%~35%之间，可耐受酸和胆盐；分泌表面活性素surfactin；人工胃肠液处理后的存活率多数集中在50%~70%之间，枯草芽孢杆菌Y13在人工胃液(pH 2.0)的存活率最高为95.3%，沙福芽孢杆菌Y32在人工肠液中的存活率最高为85.1%；其菌体、无细胞提取液、细胞内容物分别具有不同的抗氧化活性，其中无细胞提取液可同时清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟自由基，清除率在40%~60%之间。研究结果表明:除蜡样芽孢杆菌BI6Y外，解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32具有作为益生菌的潜力。研究结果为基于芽孢杆菌的益生菌产品开发提供了一定理论依据。     

凝结芽孢杆菌13002的益生特性

以凝结芽孢杆菌13002为研究对象,测定了该菌株对高温、胆盐、酸的耐受性以及对有害菌的抗菌活性、对抗生素的耐药性五个方面的益生特性。结果表明:该菌株于80 ℃条件作用10 min存活率达72.3%;0.3%胆盐作用12 h存活率达69.8%;pH2.0条件下作用4 h存活率达40.0%;对有害菌株(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)具有一定抗菌活性,其抑菌圈直径分别达13.650和14.367 mm;对青霉素、链霉素、四环素三种抗生素具有不同程度的耐药性,其MIC值分别为0.781、0.391和0.039 mg/mL。凝结芽孢杆菌13002具有良好的益生特性。     

产γ-氨基丁酸贝莱斯芽孢杆菌CLYB1的鉴定及基因组改组选育研究

为了提高γ-氨基丁酸产量，本研究采用紫外诱变和基因组改组技术处理筛选鉴定的产γ-氨基丁酸菌株CLYB1，并对改组后的菌株进行溶血试验和抗生素敏感性试验。结果表明：产γ-氨基丁酸菌株CLYB1为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，产量为3.95 g/L。对菌株CLYB1进行紫外诱变，得到菌株CLYB1-Y,γ-氨基丁酸产量为10.26 g/L，比出发菌株CLYB1的γ-氨基丁酸产量提高160%。通过基因组改组得到菌株CLYB1-YC,γ-氨基丁酸产量为20.19 g/L，比出发菌株CLYB1提高411%。改组菌株进行菌株溶血试验和抗生素敏感性试验，CLYB1-YC没有溶血环出现，无溶血性，对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、庆大霉素、四环素、红霉素、环丙沙星、林可霉素、氯霉素、复方新诺明10种常见抗生素均敏感，菌株安全性良好。贝莱斯芽孢杆菌CLYB1通过基因组改组可以提高γ-氨基丁酸产量，菌株具有更好的应用开发价值。     

贝莱斯芽孢杆菌防治甜樱桃采后软腐病的效果和机理

为探索贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）抑制甜樱桃软腐病的作用机理,实验分析贝莱斯芽孢杆菌KT对匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）LC-7的体外和甜樱桃果实体内抑制效果,以及贝莱斯芽孢杆菌KT菌株对甜樱桃果实相关防御酶活力的影响,并通过转录组学解析在与匍枝根霉互作期间,贝莱斯芽孢杆菌KT菌株中与次级代谢物合成和生物防治相关基因的表达情况。结果表明,1×109 CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液对匍枝根霉LC-7菌丝抑制率达87.12%,此时孢子萌发率和胚芽管长度分别为21.54%和11.45 μm。在甜樱桃果实上,1×109 CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液处理48 h后,果实软腐病发病率约为20%,比对照组降低了约80%,并且贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液能抑制甜樱桃果实多酚氧化酶和脂氧合酶活力,诱导过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力增加,提高果实抗氧化和抗病能力。扫描电子显微镜观察发现,经与贝莱斯芽孢杆菌KT菌株共培养后,匍枝根霉LC-7菌丝和孢子形态扭曲,贝莱斯芽孢杆菌KT对匍枝根霉LC-7具有明显的致畸作用。转录组学分析结果表明,贝莱斯芽孢杆菌KT菌株中抗生素合成基因簇bacillaene中的pksIJ和糖醛酸磷壁酸合成基因簇中的tuaAGE基因表达上调,此外发现,表达差异显著的基因主要富集在生物学过程中的核糖核蛋白复合体组装和亚基组成及核糖体组装等一系列与核糖体活动相关的过程。贝莱斯芽孢杆菌可能通过营养和空间竞争以及分泌抑菌活性物质直接抑制匍枝根霉LC-7,还可诱导甜樱桃果实的抗病性。贝莱斯芽孢杆菌对由匍枝根霉引起的甜樱桃软腐病有良好的控制作用,具有开发成生防菌剂的潜力。     

鲜天麻内生菌分离鉴定及功能活性探究

目的:明确天麻内生菌及其代谢产物的活性。方法:采用组织匀浆法和划线法从秦巴地区鲜天麻中分离纯化内生菌,测定其抗菌、抗氧化及抗肿瘤活性,并对高活性菌株进行分子生物学鉴定。结果:从鲜天麻内部分离得到4株菌,其中内生菌B1、B2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,内生菌B2对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径达26.33 mm。4株菌均有一定的抗氧化活性,其中,内生菌B1对DPPH自由基的清除能力为69.13%。内生菌B2、B3、B4对HEK293T细胞有一定的抑制作用,其中内生菌B2的最高抑制率可达40.40%。分子生物学方法鉴定结果表明,内生菌B1、B2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),内生菌B3为Lelliottia sp.,内生菌B4为水生拉恩菌(Rahnella aquatilis)。结论:分离纯化的鲜天麻内生菌具有抑菌和抗氧化活性。     

芽菜中高效降解亚硝酸盐菌株的分离鉴定

以芽菜为研究对象,筛选亚硝酸盐高效降解菌,采用分离纯化、分子生物学鉴定等方法对菌株进行分离鉴定。结果表明:通过显色反应、降解能力测定和形态学特征比较,最终筛选出7株具有强降解能力的亚硝酸盐还原菌株,其中A5、A7在浓度为400μg/mL NaNO2的液体培养基中培养24h的降解率最快,分别为80.49%、85.03%,在培养72h后降解率接近99%,进行分子生物学鉴定,结果表明:菌株皆为芽孢杆菌属,其中A5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、A7为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。     

四川泡菜中潜在益生性植物乳杆菌的筛选及安全性评价

为筛选具有潜在益生作用和安全性的植物乳杆菌,以四川泡菜中分离的114株植物乳杆菌为出发菌株,进行耐酸性、耐胆盐能力、耐模拟胃肠液能力、自聚能力、致病菌共聚性、抗生素耐药性和溶血性研究。经过pH2.0酸性条件、0.2%浓度胆盐培养后,初步筛选出13株耐受能力较好的菌株。对13株菌进行模拟胃肠液、聚集能力、耐药性和溶血性试验。结果表明,13株菌模拟胃肠液耐受存活率均高于75%,自聚集能力23%~52%,与致病菌单增李斯特菌和大肠埃希氏菌的共聚集能力分别为10%~29%和16%~37%。在药敏和最小抑菌浓度（MIC）试验中,潜力菌株对10种常见抗生素的耐药性表现基本一致,对β-内酰胺类、酰胺醇类抗生素较敏感,对氨基糖苷类、喹诺酮类、糖肽类、大环内酯类和四环素类抗生素有较强耐受性;13株菌均无溶血现象,说明具有一定的安全性。因此,筛选得到的13株植物乳杆菌均有潜在的益生作用和较高安全性,研究结果为益生菌的开发提供了菌种资源。     

2株樱桃腐败真菌的鉴定及贝莱斯芽孢杆菌对其抑制作用

为了获得绿色、安全的樱桃天然防腐保鲜剂,从腐败的樱桃上分别分离出2株主要的腐败菌,经菌落形态和分子生物学鉴定,初步鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)和总状毛霉(Mucor racemosus),分明命名为BC-1和SC-1。从实验室保存的菌种库中筛选出两株对樱桃腐败菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,通过形态学及分子生物学鉴定,初步确定均为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),分别命名为KA-2和XK-5。采用LB和landy培养基发酵两株菌,用贝莱斯芽孢杆菌的两种培养基发酵液酸沉后浸泡的方法研究其对樱桃的防腐保鲜作用,发现贝莱斯芽孢杆菌XK-5 landy发酵液酸沉提取物具有更好的防腐保鲜作用。该贝莱斯芽孢杆菌菌株有望作为生产新型绿色、安全的生物防腐保鲜剂的优良菌种。     

自然发酵泡菜中高体外抗氧化活性乳酸菌的筛选及其对模拟胃肠道环境的耐受性

本研究以自然发酵泡菜为原料,通过氧化氢法初筛,基于自由基清除率和还原能力的复筛,得到高抗氧化活性的菌株,并测定其对胃肠模拟环境的耐受性,利用16S rDNA基因的序列对其进行鉴定。结果表明,初筛得到的75株抗氧化菌株中有14株乳酸菌的DPPH自由基清除能力较强(清除率大于30%),结合羟基自由基清除率、还原活性及亚铁离子还原能力活性的监测,筛选得到2株(Kc 6和Kc 13)具有高抗氧化活性的乳酸菌菌株;2株菌在酸、胆盐、人工胃液和肠液中的存活率均超过了60%,具有较高的模拟胃肠环境耐受性。经鉴定2株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。该菌兼具抗氧化活性和环境耐受性的乳酸菌,能够为可定植体内的功能乳酸菌资源的开发提供新思路。     

酱香型白酒酒醅中乳酸菌的分离鉴定及其益生特性研究

为从酱香型白酒酒醅中筛选出益生特性优良的乳酸菌,该研究从酱香型白酒酒醅中分离纯化乳酸菌,对其进行形态学观察及分子生物学鉴定,并研究其耐受性、体外黏附能力、抗氧化和抗菌活性及抗生素敏感性。结果表明,共分离纯化得到8株乳酸菌,其中,6株菌（编号为Z4.1、Z4.3、Z4.5、Z6.2、DJ2.1、DJ4.1）被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、1株菌（编号为DJ3.2）被鉴定为绿色魏斯氏菌（Weissella viridescens）、1株菌（编号为DJ3.3）被鉴定为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。除菌株Z4.1和DJ3.3外,其余6株菌可耐受pH 3.0和0.5%胆盐,在模拟人体胃液、肠液中处理3 h后,其活菌数均>106 CFU/m L;其中,菌株DJ4.1具有较强的疏水性、自凝聚性和一定的抗氧化能力,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除能力最高（79.39%）;其对3种病原指示菌的抑菌活性具有较强的抑菌效果,且对4种抗生素高度敏感。     

富集钙乳酸菌的筛选、鉴定及安全性评价

采用传统培养分离法从新疆发酵酸奶中分离乳酸菌菌株，通过钙富集量、耐受性与黏附能力测定筛选性能优良的富集钙菌株，通过抗生素敏感性、溶血活性与硝基还原酶产生能力测定进行安全性评价，并采用形态观察及分子生物学技术进行菌种鉴定。结果表明，共分离出40株乳酸菌，均具有钙富集能力，其中菌株M5、M18、M24的钙富集能力较好，分别为41.90 mg/g、49.37 mg/g、52.60 mg/g，且对酸和胆盐具有耐受性；菌株M24在氯仿中疏水性高(44.12%)，菌株M18在二甲苯中疏水性高(37.14%)，菌株M5、M24的自凝聚能力均>80%;3株菌株经人工胃肠液消化，活菌数均>6×10⁷ CFU/mL;3株菌株对氯霉素、克林霉素、氨苄西林、红霉素敏感，溶血试验阴性且不产生硝基还原酶，为安全菌株。经鉴定，菌株M5、M18、M24分别为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)和植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)。     

植物源益生乳酸菌的筛选及其特性

为筛选具有益生特性的植物源乳酸菌,以传统发酵蔬菜中分离的1 000 株乳酸菌为出发菌株,进行了耐酸性、耐胆盐能力、抑菌性、体外抗氧化能力、药敏性、溶血性和氨基酸脱羧酶活性等特性研究,并对筛选菌株进行了16S rDNA 鉴定。经pH 3.0 MRS培养得乳酸菌82 株,再经pH 2.5 MRS培养得乳酸菌49 株;49 株菌经0.3%胆盐测试,均具有耐胆盐能力;根据镜检形态结合发酵植物源的不同从中挑选19 株乳酸菌进行药敏性、溶血性、抑菌性、氨基酸脱羧酶活性和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除实验。结果表明,19 株菌对所选20 种抗生素多数表现敏感,其中4 株菌对20 种抗生素都较敏感;19 株菌对供试致病菌都有不同程度抑制能力且都无溶血性;经氨基酸脱羧酶活性试剂盒结合聚合酶链式反应扩增检测表明,19 株菌无产生物胺的潜在威胁;有5 株菌体外抗氧化能力高于40%。可见19 株菌均具有益生菌的基本特性。经16S rDNA鉴定,7 株为发酵乳杆菌、6 株为植物乳杆菌,嫩江杆菌、戊糖片球菌、利莫西杆菌、戊糖乳杆菌、屎肠球菌、短乳杆菌分别各1 株。     

中国传统乳制品中乳杆菌的益生菌潜力评估

目的：评估从中国传统乳制品中分离出的9株乳杆菌的功能及其益生菌潜力。 方法：从中国传统乳制品中分离纯化得到乳杆菌菌株，测试了它们的益生菌潜力，如溶血活性和抗氧化活性等。 结果：所有分离的乳杆菌均可耐受低pH值（pH 2.0、2.5和3.0）和高胆盐条件（0.3％，0.5％和1％）。 测试了分离的乳杆菌对10种抗生素的敏感性，结果表明，所有分离株对万古霉素均没有抗性，另一方面，大多数分离株对青霉素，氨苄青霉素，链霉素和四环素具有抗性。 所有乳杆菌对HT-29细胞具有优异的粘附能力，其值介于10.4％-39.0％之间，并且对DPPH自由基（清除率50.4％-80.4％）和超氧阴离子自由基具有出色的抗氧化活性（清除率17.5％-44.4％）。 另外，所有分离的乳杆菌均可以极大降低胆固醇含量（19.1-65.8 μg / mL），且没有任何溶血性。结论：从中国乳制品中分离出的乳杆菌具有作为各种产品中益生菌的潜力。     

一株黄曲霉毒素B_1降解菌的筛选及鉴定

以香豆素为唯一碳源进行AFB1降解菌的初筛,从青岛土壤中筛选出高效降解AFB1的菌株A6,分离该菌的上清液、菌悬液、胞内液并分析各组分降解AFB_1特征,通过形态学、生理生化和16S rRNA基因对该菌株进行鉴定。研究结果表明,菌株A6能高效降解AFB1,其胞外上清液、菌悬液和胞内液能分别降解90.6%、19.6%和12.8%的AFB_1,表明起降解的活性物质主要位于胞外液。在平板上该菌落呈现乳白色,具有皱褶,革兰氏染色呈阳性;能利用葡萄糖、阿拉伯糖、乳糖等碳源; 16S rRNA基因分析表明该菌与贝莱斯芽孢杆菌CR-502~T(Bacillus velezensis)相似度为99.64%。综合形态学特征、生理生化特征和16S rRNA基因分析结果,鉴定菌株A6为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),命名为Bacillus velezensis A6。本研究结果为深入研究该菌的降解机理奠定了基础。     

东北地区传统发酵食品中两株植物乳杆菌的安全性评价

针对已分离的植物乳杆菌L12和L20通过体外和体内两种方法进行安全性评价。通过体外实验测定乳酸水解活性抗生素敏感性，胆盐水解酶活性，D-乳酸含量，γ溶血等指标；体内实验是对小鼠进行短期口服毒性的研究，口服0.2 mL（109 CFU/mL）的实验性细菌溶液30 d。结果表明，体外实验中，两株菌株均具有良好的抗氧化活性，对抗生素敏感性高，胆盐水解酶活性高，D-乳酸含量低，γ溶血；体内实验中灌胃给药对治疗小鼠的生长、行为、摄食量、器官重量或组织病理学分析均无不良影响。与对照组相比，益生菌组小鼠血清MDA浓度和肝脏GSH含量差异有统计学意义(P<0.05)。这些结果表明，菌株L12和L20是非致病性的，人直接食用是安全的。     

Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力

对Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力进行了体外活性初步研究。采用模拟胃液、肠液、不同浓度的胆盐环境,测定BD3526菌株在酸性及高胆盐环境的存活率,并测试BD3526对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明,BD3526可以耐受pH值为2.0、3.0、4.0的人工胃液、pH8.0的模拟肠液以及0.1%、0.2%、0.3%的胆盐环境;对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌有显著的抑制能力。说明BD3526在人工消化液环境中具有良好的存活能力,不具有溶血作用;可引起敏感菌细胞渗漏,达到杀灭部分细菌,包括金色葡萄球菌的作用,因此,该菌具备作为益生菌应用的潜力。     

6种药用植物内生菌提取物的抗氧化活性研究

本论文以6种具有抗氧化活性的药用植物乌头、唐松草、独活、车前草、薄荷、泽泻为材料分离内生菌,并对内生菌发酵液和菌丝体提取物中抗氧化活性成分进行了研究。实验以PDA培养基分离内生真菌,以高氏培养基分离内生放线菌,测定各提取样品的抗氧化活性,比较其总酚含量和总黄酮含量,并结合形态学和分子生物学方法对高活性菌株进行的鉴定。结果分别分离得到43株内生真菌,18株内生放线菌,其中内生真菌显示了较好的抗氧化活性,对·OH自由基有较强清除(清除率≥70%)作用的菌株有6株,占所用菌株的9.84%。其中菌株DHL-10发酵液乙酸乙酯提取物显示了较强的抗氧化活性,对过氧化氢的IC50为0.26 mg/m L,总酚和总黄酮含量分别达到了0.81±0.05 mg/g和0.84±0.05 mg/g;分子生物学鉴定结合形态学鉴定该菌株为链格孢菌属(Alternaria sp)真菌。本研究的结果证明,药用植物内生菌是抗氧化活性物质寻找的良好资源。     

广西生榨米粉中益生乳酸菌的筛选及鉴定

通过革兰氏染色、过氧化氢酶试验、溶血性试验、耐酸、耐胆盐试验及体外抗氧化能力测定从广西本地传统发酵食品生榨米粉中筛选优良益生乳酸菌，对其生长情况及产酸性能进行测定，并通过分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明，共分离得到146株γ-溶血乳酸菌，其中22株乳酸菌对pH 2.0和0.3%胆盐均具有良好耐受性，且乳酸菌PM20、PM22、FD13及PM44的综合体外抗氧化能力较好。4株菌株的生长及产酸趋势一致，其中菌株PM44的生长速度和产酸能力最强。经鉴定菌株PM20、PM22、FD13均为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum），菌株PM44为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）。