具有高抗胃肠道胁迫嗜酸乳杆菌的筛选及对肠炎小鼠的治疗作用

目的:从三株嗜酸乳杆菌中筛选出具有高抗胃肠道胁迫特性的嗜酸乳杆菌并研究其对溃疡性结肠炎小鼠的治疗效果。方法:人工模拟人体消化道胃液、肠液和胆盐环境,设置不同浓度梯度,研究三株嗜酸乳杆菌进入人体后对在消化道胃液、肠液和胆盐环境中的存活率,从而反映嗜酸乳杆菌对人体消化道胃液、肠液和胆盐环境的抵抗力。然后以筛选出的具有高抗胃肠道胁迫能力的嗜酸乳杆菌为研究对象,让处理组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠盐(DSS)溶液7 d,以人工诱发的溃疡性结肠炎(UC)小鼠为动物模型,观察此株高性能的嗜酸乳杆菌CGMCC10436的抗溃疡性结肠炎潜力。结果表明,嗜酸乳杆菌CGMCC10436在模拟胃酸pH2.5~4.5时,其活菌数大于10~7CFU/mL,并且在3 h时没有下降的趋势;在模拟肠液中2h时,嗜酸乳杆菌CGMCC10436活菌数有所上升;并且嗜酸乳杆菌CGMCC10436在胆盐浓度为4g/kg时,3 h时其活菌数大于1×107CFU/mL。嗜酸乳杆菌CGMCC10436发挥较好的抗溃疡性结肠炎功效的剂量为3×108CFU,能够改善溃疡性结肠炎小鼠表观状况,修复溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜损伤,增强溃疡性结肠炎小鼠的免疫调节。     

自然发酵五彩椒中具有益生特性乳酸菌的筛选及鉴定

为获得具有益生功效的乳酸菌，采用钙溶圈法从自然发酵五彩椒发酵液中分离纯化乳酸菌，测定其耐酸能力，并对耐酸能力较强的菌株进行鉴定。结果表明，分离得到32株疑似乳酸菌，其中5株菌（编号为CA1-1,CA1-4,CA3-4,CA4-2,CA6-2）具有较强的耐酸能力。根据16S r RNA测序结果，菌株CA1-1、CA3-4、CA6-2分别被鉴定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）、类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），菌株CA1-4、CA4-2被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。菌株CA1-1和CA4-2的产酸量（9.43 g/L和9.86 g/L）和胆盐处理4 h后的存活率（108.1%和96.51%）均高于其余菌株。此外，菌株CA1-1和CA4-2的耐胃肠道消化能力（胃液处理3 h后的存活率分别为82.4%和88.89%，肠液处理3 h后的存活率分别为38.4%和41.88%）、抗氧化能力（DPPH自由基清除率分别为46.84...     

副干酪乳杆菌HCS17-040的筛选鉴定及其益生特性

目的：获得具有降甘油三酯功能的乳酸菌菌株。方法：从母乳及顺产的健康婴儿粪便中筛选分离乳酸菌菌株,采用单试剂法乳酸菌（GPO-PAP法）测定其甘油三酯去除能力。从中选择甘油三酯去除能力强的菌株进行形态学鉴定、生理生化及16S rDNA鉴定,并测定其耐受酸、胆盐和胃肠液的能力。结果：筛选分离出一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）,命名为HCS17-040（CGMCC No 19747）,其甘油三酯下降率达（42.80±1.79）%;该株菌在pH 3.0和pH 2.0的环境中培养17 h后存活率分别为89.39%和87.18%;在3 g/L和5 g/L的胆盐浓度环境中培养17 h后存活率分别为94.75%,92.97%;在人工胃液中作用3 h,存活率为93.93%;在人工肠液中作用4 h,存活率高达99.06%。结论：副干酪乳杆菌HCS17-040对甘油三酯具有一定的去除能力,且具有良好的耐酸、胆盐及人工胃肠液的能力。     

人肠道乳酸片球菌的分离鉴定及其发酵枸杞汁性能分析

为获取定植能力强和枸杞汁发酵性能优良的候选菌株，从人肠道中分离筛选出3株乳酸菌。通过形态、生理生化、16S rDNA序列分析及系统发育树构建进行鉴定，并对其耐酸、耐胆盐、耐人工胃液、肠液及其发酵性能进行研究，研究其定植能力和发酵性能。结果表明，经鉴定3株均为乳酸片球菌（Pediococcus lactis），分别编号为NXU＿220218、NXU＿220219和NXU＿220220。其中NXU＿220218在2～8 h生长速度较快，产酸能力较强，对酸、胆盐、人工胃液的耐受能力均优于NXU＿220219和NXU＿220220，在pH为2时的存活率约为67%，在浓度为0.3%的牛胆盐中的存活率约为65%，对人工胃液的耐受能力为72%，人工肠液的耐受能力达到95%。将菌株NXU＿220218接种于枸杞汁中发酵，经测定发现发酵枸杞汁中的还原糖含量显著降低，自由基清除率显著提高，表明其对枸杞汁具有良好的发酵性能，可作为乳酸菌的候选菌株应用于枸杞汁的发酵。     

5株植物乳杆菌生物学特性及安全性评价

通过对不同分离源的5株植物乳杆菌进行产酸、抑菌、耐酸耐胆盐、耐药性、溶血性、产生物胺能力测定,结果显示:5株菌的产酸及抑菌能力较强,差异显著(p0.05);耐酸性能较强,2 h的存活率在85.67%~98.00%,PBIL1-002与其他各菌株之间差异显著(p0.05);耐胆盐能力相对较弱,2 h的存活率在21.17%~51.20%,除PBIL1-002与PBIL1-006外,其余各菌株间差异显著(p0.05);5株菌均对链霉素和万古霉素耐药,PBIL1-009和PBIL1-018对复方新诺明耐药;PBIL1-006和PBIL1-009对庆大霉素耐药;菌株不具溶血性能;定性检测菌株产生物胺能力显示,PBIL1-009代谢产生精胺,PBIL1-018代谢产生精胺和酪胺。说明不同分离源的菌株特性及安全性有一定差异,生产应用时需选择生物学特性佳且无安全隐患的菌株。     

嗜酸乳杆菌生物抗性的研究

选择一株嗜酸乳杆菌优良菌株为研究对象,用平板菌落计数法测定嗜酸乳杆菌在各因素的作用下的存活率来研究其耐酸、耐渗透压、耐胆盐能力以及模拟人体肠胃环境研究胃酸、食盐、胆盐对嗜酸乳杆菌的综合影响;从实验结果得出嗜酸乳杆菌具有一定的抗性能力。     

一株自主分离嗜酸乳杆菌的功能性研究

针对一株自主分离保存的嗜酸乳杆菌MF204(CGMCC No.2122)的益生特性,抑菌、降血脂以及提高免疫力等功能进行了研究.结果表明,嗜酸乳杆菌MF204能耐受胆盐、模拟人工胃液和肠液;体外抑菌效果明显,对多种致病菌均有抑制作用:体外对胆固醇平均脱除率达65.64%;对降低高脂大鼠血清胆固醇有一定疗效;对试验小鼠的特异性免疫力均有所提高.表明嗜酸乳杆菌MF204是一株具有较强功能性的益生菌株.     

动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002益生特性的研究

该研究测定动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animails subsp. lactis）菌株HCS04-002对酸、胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性,并采用邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）法及甘油三酯试剂盒分别测定菌株的β-半乳糖苷酶活力和甘油三酯降解能力。结果表明,菌株HCS04-002在pH 2.0和pH 3.0环境下处理17 h,存活率达60%以上;在0.3%、0.5%、1.0%、1.5%的胆盐环境处理17 h,存活率达70%以上;经人工胃液和人工肠液消化后,存活率达99%以上;β-半乳糖苷酶活力为0.78 U/mL;甘油三酯降解率为43%。综上,动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002具有较好的耐酸、耐胆盐及耐胃肠液能力,进入人体后能够以较高存活率到达肠道发挥作用,并具有一定的缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能。     

原生质体融合提高嗜酸乳杆菌耐酸及耐胆盐能力

两株不同来源嗜酸乳杆菌La-w1和La-w2进行原生质体融合,获得一株耐酸和耐胆盐能力强的菌株La-F1,并对其生长特性进行研究。结果表明,融合菌株La-F1耐酸性和耐胆盐能力明显高于初始菌株,其生长特性适于乳酸发酵食品要求。     

牦牛酸乳中耐酸耐胆盐乳酸菌的分离筛选和鉴定

通过对青海地区采集的牦牛酸乳中乳酸菌的分离鉴定,共获得48株乳酸菌。以生长旺盛且可用于食品的11株乳酸菌为研究对象,进行人工胃液和胆盐耐受性评价。结果表明,有6株菌株在pH 3.00人工胃液中存活率50.00%,2株菌株在0.30%胆盐中生长率15%。其中鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601为最佳抗性菌株,在人工胃液中存活率为119.53%,在0.30%胆盐中生长率为41.64%。     

臭味发酵食品中益生菌分离鉴定及功能性研究

目的分析臭味天然发酵食品中常见益生菌种类。方法本实验从臭味天然发酵食品中选取了4种常见益生菌株,并对耐酸耐胆盐能力、抗药性进行了研究。结果 4株益生菌株经16S rDNA分子鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和粪肠球菌(Enterococcus faecium)。嗜酸乳杆菌在pH 4的培养基培养16 h后,其相对OD_(600 nm)值为51.13%,具有较强的耐酸能力。植物乳杆菌在0.3 g/L和0.6 g/L胆盐质量浓度下培养16 h后,其相对OD_(600 nm)值分别为98.88%、66.22%,具有较强的耐胆盐能力。实验结果表明这2株菌的耐药性都低于鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌。结论植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌为耐酸耐胆盐低耐药性特点的益生菌株。     

优良饲用乳酸菌的筛选及在模拟消化环境中的耐受性

通过MRS培养基进行初筛,耐酸耐胆盐复筛,从乳猪粪便中筛选出能够应用于饲料中的优良乳酸菌。MRS初筛得到26株乳酸菌疑似菌株,在pH2.0和3 g/L胆盐的MRS培养复筛得到7株菌,对性能较好的菌株G1和G9进行生理生化及分子生物学鉴定:G1为植物乳杆菌(NCU156)、G9为戊糖片球菌(NCU301)。进一步研究NCU156的耐酸耐胆盐性能以及模拟动物消化道耐受性能。结果表明:NCU156在p H2.5的MRS培养基中,作用4 h存活率为87.31%;在胆盐质量浓度为3 g/L的培养基中,作用6 h活菌数下降不到一个数量级;在pH3.0的人工胃液中作用4 h,NCU156的活菌数稍有增加,在3 g/L胆盐的人工肠液中作用6 h,活菌数下降约一个数量级(1.81×10~9~1.27×10~8CFU/m L),活菌数仍保持在10~8CFU/m L以上。可见NCU156对动物胃肠道有良好的耐受性,在饲料产品中有很好的应用前景。     

内蒙古地区传统酸乳中耐酸乳酸菌的分离鉴定及其耐酸性能的研究

从内蒙古鄂尔多斯牧区家制传统酸乳中分离出15株乳酸菌并进行了分子鉴定,对其中5株耐酸性能较好的乳酸菌的生长性能、耐酸能力、耐胆盐能力和发酵性能进行测定。结果表明:5株耐酸乳酸菌均具有良好的生长性能,且对p H3.0环境均表现出一定的耐受力;对0.3%和0.5%的胆盐耐受性较差;菌株LD7-3是5株菌中产酸能力最强的菌株。     

鼠李糖乳杆菌耐酸及胆盐能力研究

本实验对来源于婴儿粪便鼠李糖乳杆菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验。结果获得鼠李糖乳杆菌菌株B在pH1.8条件下,维持2h,活菌数达到107CFU/ml以上;在pH值为2.2以上的培养基中生长良好,而且随着时间的延长菌株的数量增加。在胆盐浓度在0.5%以下的MRS-broth培养基中鼠李糖乳杆菌B菌株维持4h,活菌数均达到108CFU/ml以上,而且随着时间的延长活菌数均有所增加。模拟胃液和模拟肠液实验结果表明该菌株能够有效通过胃环境,并能在肠道中繁殖。结果可见,鼠李糖乳杆菌B具有较强的酸的胆盐的耐受能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求。     

三株乳酸杆菌益生及免疫特性研究

试验以副干酪乳杆菌KLDS1.0351、植物乳杆菌KLDS1.0985及KLDS1.0986为对象,探究其耐人工胃液、肠液、耐胆盐能力及三株菌株对脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明,三株菌株耐人工胃液、耐人工肠液和耐胆盐能力良好,副干酪乳杆菌KLDS1.0351强于植物乳杆菌KLDS1.0985和KLDS1.0986。乳酸杆菌对脾淋巴细胞活性的影响随活菌数量的增加而增大。活菌数为107 CFU/m L时,对脾淋巴细胞活性的影响为KLDS1.0986KLDS1.0351KLDS1.0985;KLDS1.0351对脾淋巴细胞的增殖具有较好的促进作用,而KLDS1.0985和KLDS1.0986两株菌株只有活菌数达到107 CFU/m L时才有促进作用。     

婴儿肠道内嗜酸乳杆菌L2的筛选及菌株代谢产物的初步分析

实验以出生4个月的婴儿的新鲜粪便作为样品,将粪便稀释液接种到MRS(methicillin resistant staphylococcus)培养基,37℃厌氧培养2d,共分离出了三株溶钙环明显的嗜酸乳杆菌.对这些分离菌进行了抑菌活性、耐酸性、耐胆盐能力等生化特性研究之后,筛选出了在各方面品质都较好的L2菌株.该菌株对肠道内常见致病菌有很强的抑制作用,可以长时间耐受0.5%的胆盐,对pH为3.0的环境也有较强的抵抗性.参照<伯杰氏细菌学鉴定手册>(第八版)的参数对L2菌株进行初步鉴定,确定为嗜酸乳杆菌.其代谢产物经过毛细血管电泳分析,分为三种组分,分子量分别为:组分1的范围在2.512～6.214kD之间,组分2、3均略大于16.949kD.再分析代谢产物对蛋白酶的敏感性,得出该代谢产物对部分蛋白酶敏感,更进一步确定是短肽类细菌素.综合判定,这株嗜酸乳杆菌预期可作为生产食品防腐剂的菌株,或添加到牛奶等食品中来调节人体肠道内的菌群平衡.     

西藏牦牛粪和乳源中益生菌的筛选与鉴定

采用钙透明圈法从西藏地区牦牛粪和乳源中分离、筛选益生菌，通过形态观察及分子生物学技术进行菌种鉴定，并对其生长特性、产酸能力、耐胆盐、酸、人工胃液能力及抑制大肠杆菌能力进行分析。结果表明，共分离、筛选出25株乳酸菌，经鉴定7株为益生菌，分别为1株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），2株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）和4株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracaseium）。其中植物乳杆菌B2具有良好的生长优势、产酸能力（发酵终pH值在4左右）、耐酸（pH值为4）、耐胆盐（0.6%）、耐人工胃液能力（存活率为57.4%），且抑制大肠杆菌效果较好（抑菌圈直径为22.0 mm）。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸耐胆盐优良菌株的选育

通过反复驯化的培养方法将两歧双歧杆菌驯化成耐氧耐酸耐胆盐的优良菌株。实验结果表明，在牛乳培养基中耐氧驯化后的双歧杆菌的增殖比例为41000％，而原始菌的增殖比例仅为8233％，且前者的凝乳时间为后者的2／3；经过耐酸驯化的菌株在低pH值条件下的产酸性能也大为提高，且耐酸性明显优于未经驯化的菌株；胆盐驯化的菌株经胆盐浓度为0．5％的培养后也有较高的活菌数，其对胆盐的忍耐力明显增强。     

潜在益生作用乳酸菌的筛选鉴定及其生物学特性

该研究对酸马奶中分离的197株乳酸菌进行潜在益生作用菌株的筛选鉴定及生物学特性研究。通过耐酸性试验和耐胆盐能力试验初步筛选出10株耐受能力较好的菌株,经过模拟人工胃液处理3 h后10株菌的存活率在46.48%~95.86%之间,选取存活率大于80%的3株菌进行模拟人工肠液试验（处理4 h和8 h后）,活菌数均保持在1.65×109~1.81×1010 CFU/mL之间,并且3株菌均有一定的疏水能力。其中,菌株2-33在模拟人工胃液中存活率达95.86%、模拟人工肠液中存活率达80.80%、细胞表面疏水性为42.61%,因此将菌株2-33确定为目的菌株。从抗生素药敏试验可知,菌株2-33对诺氟沙星、头孢拉定、庆大霉素、万古霉素以及链霉素有耐药性,不敏感;对克林霉素中度敏感;对四环素、氯霉素、红霉素、氨苄西林敏感。最后,经分子生物学确定菌株2-33的16S rDNA基因序列长度为1432 bp,在NCBI中基因登录号为MN611708,与L. plantarum JCM1149同源性达100%,并且菌株2-33的糖类发酵试验结果与GB 4789.35-2016一致,所以将菌株2-33鉴定为植物乳杆菌。该研究结果对今后益生菌的深入研究和功能性食品的开发提供材料。     

具有抑制肠道致病菌和黏附Caco-2细胞作用的益生性乳酸菌的筛选及鉴定

为了筛选具有肠道益生特性的乳酸菌,进一步开发益生菌资源,本文研究采用牛津杯、人工模拟胃肠液及体外黏附Caco-2细胞等方法,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)为对照菌株,对实验室保藏15株乳酸菌的益生特性进行筛选与评估。实验结果表明:15株乳酸菌对两株沙门氏菌都具有一定抑制效果,抑菌圈直径为10.95~22.06 mm;乳酸菌C174、D24、D599、C37、D512具有较好的耐酸耐胆盐能力,在人工胃液3 h内存活率达到60%以上,人工肠液4 h内存活率达到80%以上;在黏附试验中,C174对Caco-2细胞具有较强黏附能力,黏附数量为740 CFU/100细胞,略高于对照菌株鼠李糖乳杆菌(543 CFU/100细胞);通过对具有高黏附性的菌株C174进行生理生化和16S rRNA分子测序鉴定,结果表明菌株C174为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为Lactobacillus plantarum ZJ-174。Lactobacillus plantarum ZJ-174的抑菌能力强、能够耐酸耐胆盐,并具有很强的黏附能力,是一株潜在的益生菌,具有治疗或预防人和动物肠道疾病等应用价值。