黑豆皮花色苷的中压液相色谱制备及结构鉴定

以黑豆皮为实验材料,用乙醇浸提法对黑豆皮中的花色苷进行提取,用大孔吸附树脂对花色苷进行纯化,经冷冻干燥得到黑豆皮花色苷粗品。利用中压制备色谱对花色苷组分进行分离,通过质谱分析鉴定经中压制备色谱分离后的花色苷组分。结果表明:黑豆皮花色苷粗品中的总花色苷含量为26.9%,经中压制备色谱对花色苷粗品进行分离后的2峰中矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度达到91.46%。黑豆皮中的主要花色苷为天竺葵素-3-O-芸香糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷-4-乙醛。     

黑果枸杞中一种花色苷类物质的分离纯化及抗氧化活性

以黑果枸杞为原料,利用ÄKTA Purifier蛋白纯化系统分离纯化得到1 种纯度97%以上的花色苷物质。通过质谱和核磁共振分析,鉴定该花色苷物质为矮牵牛素3-O-芸香糖（反式-香豆酰基）-5-O-葡萄糖苷（petunidin3-O-[rhamnopyranosyl-(trans-p-coumaroyl)]-5-O-(β-D-glucopyranoside)）。体外抗氧化活性分析表明该花色苷物质具有显著的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和超氧阴离子自由基（O2 － ·）清除能力。     

黑枸杞中花青苷的定性分析及主要花青苷的抗氧化活性研究

以黑枸杞为实验材料,采用超高效液相-三重四级杆质谱仪(UPLC-MS/MS),对黑枸杞中花青苷进行定性分析。结果表明,黑枸杞中花青苷共5种分别为矮牵牛素-3-[芸香糖-(对-香豆酰葡萄糖)]-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(咖啡酰芸香糖)-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(对-香豆酰芸香糖苷)、飞燕草素-3-(对-香豆酰芸香糖)-5-葡萄糖苷和锦葵素-3-[鼠李糖-(对-香豆酰葡萄糖苷)]-5-葡萄糖苷。AB-8大孔树脂、聚酰胺和葡聚糖凝胶联用对黑枸杞花青苷主要成分进行分离纯化,矮牵牛素-3-[芸香糖-(对-香豆酰葡萄糖)]-5-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-(对-香豆酰芸香糖苷)纯化后含量可达98%,并采用福林酚试剂法和清除DPPH自由基评价其抗氧化活性。可得黑枸杞中主要抗氧化成分为花青苷类化合物,且抗氧化活性与花青苷含量成正相关,相同苷元的酰基花青苷,其活性高于非酰基花青苷。     

黑果枸杞-酿酒葡萄混合果酒酿造过程中花色苷稳定性研究

针对黑果枸杞加工过程中存在的花色苷不稳定的关键瓶颈问题,以黑果枸杞鲜果为原料,辅以酿酒葡萄共发酵酿制果酒。分析不同酿造因子对果酒多酚、花色苷及色泽的影响;明确影响酒体中花色苷含量及稳定性的主要因子,通过正交优化试验得到最佳酒精发酵工艺。结果表明：黑果枸杞与酿酒葡萄质量比以及pH 值对果酒花色苷含量和色泽影响程度较大,但对多酚含量影响作用较小,而酵母菌类型对黑果枸杞果酒多酚、花色苷和色泽影响均较小;复配酿酒葡萄可减少花色苷损失,提高黑果枸杞果酒中花色苷的稳定性。最佳酒精发酵工艺条件为黑果枸杞与酿酒葡萄质量比1∶4、果胶酶添加量0.70 g∕L、酿酒酵母添加量0.25 g∕L,发酵后酰化花色苷[矮牵牛素-3-O-芸香糖（反式-p-香豆酰基）-5-O-葡萄糖苷]含量可达（459.51±3.66）mg∕L。     

不同花色苷代表性成分的分离鉴定及体外抗氧化活性

本实验以紫甘薯、黑枸杞、黑加仑和桑葚花色苷提取物为原料,制备其单体花色苷组分并研究其体外抗氧化性质。选取每种花色苷中含量较高,分子量居中,具有代表性的单体化合物作为目标组分,采用高速逆流色谱制备分离四种来源的花色苷。选用甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-三氟乙酸作为溶剂体系,流速设定为5 mL/min,转速为850 r/min,分离得到高纯度花色苷单体化合物。采用分光光度法、HPLC-MS法分析测定花色苷含量及主要组成,用DPPH自由基、羟自由基清除能力和总还原力的测定分析其体外抗氧化活性。结果表明,四种来源的花色苷中代表性的成分依次为芍药素-3-咖啡酰-阿魏酰槐糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷、矢车菊-3-芸香糖苷和矢车菊-3-O-葡萄糖苷,它们均具有良好的体外抗氧化活性。     

紫色马铃薯皮花色苷的结构鉴定

为纯化、鉴定紫色马铃薯(Solanum tuberosum L.)皮中的花色苷组分,采用2%柠檬酸水和D101大孔树脂对紫色马铃薯皮花色苷进行提取分离,利用高效液相色谱外标峰面积法测定花色苷的含量为207.33 mg/g冻干粉,并通过HPLC-DAD-ESI-MS/MS联用技术鉴定紫色马铃薯皮花色苷的组成。紫色马铃薯皮花色苷冻干粉共检出14种花色苷,以矮牵牛素-3-O-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷含量最为丰富。所有花色苷中,4种花色苷以花色素-3-O-芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷形式存在,9种花色苷以花色素-3-O-对香豆酰(或咖啡酰或阿魏酰)芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷的形式存在,除此之外,存在一种花色苷可能采取C3,C7-位双糖基取代。紫色马铃薯皮中所含花色苷绝大多数为酰化双糖基取代花色苷,结构稳定,因而紫色马铃薯皮作为一种食品加工副产物具有良好的开发前景和利用价值。     

大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷

以蓝莓果实为原料,采用大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷。分别比较6 种不同类型树脂 对蓝莓花色苷静态吸附-解吸效果,优化大孔树脂分离纯化蓝莓花色苷的工艺。结果表明：D101大孔树脂对蓝莓 花色苷的分离效果最佳,对花色苷的吸附属于多分子层吸附。在柱压力为1 MPa、温度25 ℃、上样液质量浓度为 0.073 mg/mL、洗脱剂乙醇体积分数为80%、流速5 mL/min条件下,经D101大孔树脂柱分离后,花色苷纯度从5.53% 增加到75.58%,提高了12.67 倍。采用Sephadex LH-20中压柱层析对蓝莓花色苷进一步分离纯化,主要得到1 种花 色苷组分,通过高效液相色谱和高效液相色谱-电喷雾质谱联用对蓝莓花色苷进行定性和定量分析,确定该组分为 矢车菊-3-O-葡萄糖苷,纯度达到90.88%。     

黑果枸杞化学成分的UPLC-Triple TOF/MS分析及其总花色苷类含量测定

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术对黑果枸杞中的化学成分进行分析,通过多级离子碎片信息,结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献进行推断;采用超高效液相色谱仪,使用Acquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）,以0.1%三氟乙酸-10%甲酸溶液及甲酸-水-甲醇-乙腈（1∶5∶2∶2,V/V）为流动相进行梯度洗脱,检测波长530 nm,对黑果枸杞中的总花色苷进行定量分析;黑果枸杞中的总花色苷含量以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为标准计算。从黑果枸杞中共鉴定出化合物30 个,其中包括生物碱类化合物13 个、花色苷类化合物13 个。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在0.005～0.08 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好（R=0.999 9）;平均加样回收率为95.45%,相对标准偏差为2.62%。本方法可快速、高效地鉴定黑果枸杞中的化合物;花色苷含量测定方法重复性好、准确度高,有助于提高黑枸杞的品质控制。     

新疆药桑椹中花色苷的分离与鉴定

采用高速逆流色谱分离制备药桑花色苷。以甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-三氟乙酸(2:2:1:5:0.01,V/V)为溶剂体系,进样量50mg,分离得到纯度分别为99.24%、88.5%、99.9%和96%的4个花色苷单体。通过高速逆流色谱(HSCCC)、紫外-可见光谱、质谱进行结构鉴定,初步确定馏分1为矢车菊-3-O-芸香糖苷,馏分2为天竺葵-3-O-芸香糖苷,馏分3为矢车菊-3-O-葡萄糖苷,馏分4为天竺葵-3-O-葡萄糖苷。此法高效、稳定、简捷易行。     

紫马铃薯花色苷的提取纯化与鉴定

对超声波辅助提取紫马铃薯花色苷工艺条件进行优化,并用NKA-9大孔吸附树脂进行纯化,液相色谱结合紫外-可见光谱扫描分离和鉴定花色苷组成。结果表明：花色苷最佳提取条件为料液比1:50(2.5g/100mL柠檬酸溶液)、超声功率400W、提取温度45℃、提取时间10min,以干质量计算紫马铃薯种花色苷含量为1.362mg/g;用NKA-9大孔吸附树脂纯化,8倍柱床体积洗脱出占总量98.35%的的花色苷,花色苷纯度达到90.23%;高效液相色谱鉴定出紫马铃薯含有5种组分,其中3种分别是矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷和芍药-3-葡萄糖苷,其含量分别为0.27、0.057mg/g和0.46mg/g,三者总和占马铃薯中总花色苷含量的57.78%。马铃薯中含量最高的花色苷成分出峰保留时间为12.224min,其结构未知。     

黑果枸杞不同组织花青苷组分及相对含量研究

通过研究黑果枸杞不同生长时期组织中花青苷的组分及相对含量的变化，为花青苷的合成调控和形成机制研究提供基础数据。采用液质联用技术，研究了野生黑果枸杞展叶期、花期和果期的茎、叶、花、果中花青苷组分和相对含量。结果表明，茎、叶、花和果中共检测到19种花青苷，茎、叶、花、青果和紫果中的主要花青苷组分是飞燕草素-3-O-对香豆酸-葡萄糖苷，黑果中的主要花青苷组分是矮牵牛素-3-O-反式对香豆酸-芸香糖苷-5-葡萄糖苷。3个生长时期茎和叶的花青苷组分没有变化，果中花青苷组分从青果中的8种增加到黑果的13种。茎、叶、花、果中都含有丰富的花青苷，其中相对含量较高的花青苷组分主要有5种，这5种组分在各组织中占比各不相同。茎中的花青苷总含量在不同时期基本保持稳定；叶中的花青苷总含量先增加后减少；果中的花青苷总含量随着果的成熟显著增加。研究证明在不同生长时期黑果枸杞组织中花青苷组分的积累存在组织特异性和时间差异。茎、叶、花中花青苷含量丰富，具有潜在的利用价值。     

黑果枸杞速溶粉营养成分分析及抗氧化活性研究

对以黑果枸杞干果为原料制备的黑果枸杞速溶粉的营养成分进行了分析,并测定了体外抗氧化活性。采用高效液相色谱(HPLC)柱后衍生的方法测得速溶粉含有17种氨基酸,其中天冬氨酸含量最高(1.345%);并采用亚硝酸钠-硝酸铝法、香草醛-浓盐酸法、苯酚-硫酸法、pH示差法测定了速溶粉中黄酮、原花青素、多糖、花色苷的含量,分别为6.02%, 2.88%, 6.88%和1.40%;通过HPLC-DAD分析得出速溶粉中含有多种花色苷,其中两种主要的花色苷为天竺葵素-3-O-二葡糖苷和天竺葵素-3-O葡萄糖苷。速溶粉具有较强的还原能力,可显著清除ABTS+·和DPPH·, IC_(50)分别为0.077和0.061 mg/mL,表现出良好的体外抗氧化活性。     

紫玉米苞叶花色苷的纯化鉴定及热稳定性分析

为明确紫玉米苞叶花色苷的组成及比较单体花色苷的热稳定性,实验采用大孔树脂、凝胶树脂分离纯化紫玉米苞叶花色苷提取物,得到三个不同花色苷组分,并采用液质联机的方法鉴定其结构;将制备的花色苷提取物及三个单体组分进行热重仪器分析,比较不同组分的热稳定性结果表明紫玉米苞叶中共含有6种花色苷,通过分离纯化后能够得到三个组分,第一个组分为芍药-3-O-葡萄糖苷和天竺葵-3-O-葡萄糖苷的混合物,第二个组分为矢车菊-3-O-葡萄糖苷,第三个组分为矢车菊-3-(6' 丙二酰-葡萄糖苷).其中总花色苷提取物的热稳定性最强,矢车菊-3-(6'丙二酰-葡萄糖苷)次之,芍药-3-O-葡萄糖苷和天竺葵-3-O-葡萄糖苷的混合物与矢车菊-3-O-葡萄糖苷热稳定性相当,均较以上组分弱.     

野生黑枸杞果实中酚类物质的组成分析

以产自宁夏的野生黑枸杞鲜果为实验材料,采用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪对黑枸杞果实中的酚类物质组成进行定性、定量分析。结果显示,黑枸杞果实富含酚类物质,共鉴定到花色苷类物质20 种,非花色苷酚类物质16 种。其中,最主要的花色苷为甲基花翠素-3,5-O-双葡萄糖苷和一些6-O-香豆酰化衍生的3-O-单糖苷花色苷,而最主要的非花色苷酚类物质为绿原酸等一系列羟基肉桂酸,与葡萄、蓝莓等富含酚类物质的深色水果有极大不同,具有典型的种属特异性。本研究将为黑枸杞的鲜果消费以及产品开发提供一定的理论基础。     

利用中压制备液相色谱从桑葚中快速制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体

单体花色苷的快速大量制备长久以来是花色苷产业化中的难题,而中压制备液相色谱在产业应用中有着很大的开发空间。选取花色苷组分较单一的桑葚为实验原料,经提取分离总花色苷后使用填装有反相C18填料的耐压玻璃柱作为中压制备液相色谱柱,纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体。结果显示：3 个色谱分离峰中目的峰（峰2）经高效液相色谱和质谱确证为由矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside,C3G）和矢车菊素-3-芸香糖苷（cyanidin-3-rutinoside,C3R）组成,采用峰面积归一化法计算得到C3G纯度为73.56%;通过对峰2采用切割方式进行收集,C3G纯度达到98%以上,单次收集到C3G单体溶液650?mL。中压制备液相色谱法单次上样量大、步骤简洁、成本低廉,可为矢车菊素-3-葡萄糖苷单体的规模化生产提供一定的参考。     

黑葵花籽壳中主要花色苷类物质的结构分析

为确定黑葵花籽壳中主要花色苷类物质的结构,采用高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱串联四极杆质谱研究黑葵花籽壳中的花色苷类物质,结果表明：纯化后的黑葵花籽壳花色苷主要有两种单体,之后采用纸层析对两种物质进行分离,再用红外光谱、紫外-可见光谱、Francis的研究结论等方法对两种单体结构初步推测。最后采用高效液相色谱串联四极杆质谱对两种花色苷结构确认为：花青素-3-O-单葡萄糖苷和甲基花青素-3-O-单葡萄糖苷两种单体。     

黑果枸杞花青素类型、含量及结构分析研究

研究高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测黑果枸杞中花青素含量的最佳方法,采用高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS)分析黑枸杞中的花色苷结构。以超声波辅助提取获得的花青素粉末作为样品,对影响检测结果的样品水解时间,液相流速等因素进行研究,并采用高效液相色谱-串联质谱检测花青素。确定水解液比例为乙醇:水:盐酸=3:2:1(体积比),水解液中HCl浓度为3.0 mol/L,水解时间1 h,流速为0.7 mL/min时,液相检测效果较好。结果表明,黑果枸杞中飞燕草素、矢车菊素、矮牵牛素和锦葵素的浓度分别为2.32、15.44、35.18、2.63μg/mL。通过试验确定高效液相色谱法的最佳检测条件,确定黑果枸杞花青素的含量;并对黑果枸杞花青素进行一定的结构分析,得到较好的结果,并检测出14种花色苷成分。     

黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用

为了提高黑果枸杞花色苷的稳定性和活性,利用壳聚糖（chitosan,CS）与酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptide,CPP）复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得最佳制备条件为：pH?4、室温条件下搅拌,2?mg/mL黑果枸杞花色苷溶液等体积添加到质量分数0.5%?CPP溶液中,然后添加等体积0.20～0.30?mg/mL?CS溶液至上述花色苷-CPP溶液中,由离子凝胶机制自发形成CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径为215.3?nm,表面电势为36?mV,包封率为65.0%～72.2%;体外释放实验结果表明,在pH?7.0时该CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒的释放率为24.3%～64.2%。体外细胞实验结果表明,黑果枸杞花色苷质量浓度为100～200?μg/L的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒能够显著提高氧化低密度脂蛋白诱导的氧化损伤人脐静脉融合EAhy926细胞的存活率（P＜0.05）。因此,CS-CPP复合凝胶体系能够包封黑果枸杞花色苷,其制备的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒具有较好的体外抗氧化能力。     

黑果枸杞花色苷的提取、纯化及降解动力学研究

以花色苷提取量为主要考察指标,通过单因素和正交试验优化冻干黑果枸杞花色苷提取工艺,并在此条件下研究花色苷纯化工艺及其降解动力学,探讨不同温度、pH下花色苷提取量的变化。结果表明,提取最佳工艺条件为：料液比1:25(g:mL)、乙醇浓度60%、pH4、提取时间2 h,此条件下花色苷提取量达36.507±0.325 mg/g。研究显示AB-8大孔树脂纯化黑果枸杞花色苷效果最好,对花色苷吸附量和解吸量的影响效果最佳,其最佳条件为：上样液浓度200 mg/100 g,解吸乙醇浓度80%,上样流速2 mL/min,洗脱流速2 mL/min,上样体积为5 BV,纯化率为90.02%。降解动力学研究结果表明：相同pH下,随着温度升高花色苷的降解速率增大、半衰期减少;此外,花色苷在酸性环境中较稳定,在碱性环境下易降解,当pH为3,50℃时花色苷稳定性最好,t1/2最大为38.5 h,Ea最大为41.89 kJ/mol。因此黑果枸杞花色苷提取量与其提取、纯化及温度、pH的工艺条件密切相关,本研究为黑果枸杞花色苷的提取及饮品开发提供技术支撑。     

利用AB-8大孔树脂纯化‘黑宝石’李果实花色苷的研究

本文以‘黑宝石’李果实为材料,实验通过AB-8大孔树脂静态和动态条件下的吸附和解吸优化了AB-8大孔树脂纯化花色苷的条件,同时对纯化前后花色苷的成份和含量及抗氧化能力的变化进行了研究。结果表明,最佳纯化工艺条件:以浓度0.015 mg/m L、p H3.5的提取液,流速1.0 m L/min进行上样;以流速0.5 m L/min、80%的乙醇进行洗脱。纯化花色苷的抗氧化能力有所提高,在浓度小于100μg/m L时,纯化花色苷对DPPH自由基的清除能力明显高于粗提物对DPPH自由基的清除能力;在浓度为10和15μg/m L时,纯化花色苷样品对ABTS+·自由基的清除能力分别为粗花色苷的1.24和1.07倍。‘黑宝石’李中的花色苷为矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷,纯化后两种花色苷单体的含量分别达到261.6 mg/L和26.6 mg/L。研究成果将为李花色苷性质研究、李资源开发和深加工转化提供理论依据和技术支撑。