康宁木霉cbh2基因在毕赤酵母中的表达

为拓宽酵母菌的应用领域,构建具有分泌纤维素酶能力的酵母工程菌,利用质粒pPICZαA构建了康宁木霉纤维素酶cbh2基因的酵母表达载体,经线性化后采用电穿孔法转入毕赤氏酵母菌中.以甲醇为诱导物进行诱导,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果证明该基因可成功表达.对重组蛋白进行了产酶活性测定,结果证明该重组蛋白具有纤维二糖水解活性,从而获得了一株可产生纤维素酶的酵母工程菌.     

瑞氏木霉木聚糖酶Ⅰ基因的克隆、序列分析及在酵母中的表达

本实验从构建于大肠杆菌DH5α的瑞氏木霉cDNA文库中用PCR法体外扩增到木聚糖酶I（XynI)的DNA片段，然后连接至穿梭载体pAJ401,转化酵母H158,以刚果红染色法筛选阳性重组子并测序，当将其mRNA5‘端非翻译区的79个碱基删除后，木聚糖酶的表达水平显著提高，有可能此基因的调节区位于5‘端非翻译区内，而且可能被酵母的相关基因表达因子所识别。     

康宁木霉与米根霉混合发酵生产纤维素酶和木聚糖酶的研究

对康宁木霉QF-02和米根霉NRRL395液态混合发酵生产纤维素酶和木聚糖酶的工艺进行了研究.实验结果表明:康宁木霉先接种培养48 h后再接种米根霉产酶效果最佳,在此接种方式下获得的优化培养温度为28℃,起始pH为5.0.混合菌在发酵罐中的产酶趋势与康宁木霉纯培养类似,最大酶活都出现在120 h,但混合培养物中FPA、B-葡萄糖苷酶活和木聚糖酶活比纯培养分别提高14.8%、45.4%和4.3%.米根霉的加入使混合培养物中还原糖浓度下降并维持在较低水平,而康宁木霉纯培养中还原糖呈不断增加的趋势.康宁木霉和米根霉混合发酵产酶的微生态原理应归于二者形成了相互促进的共生关系.     

康宁木霉固态发酵中药渣制备蛋白饲料

考察了营养源和其它条件对康宁木霉固态发酵中药渣的影响,采用正交实验优化了发酵条件,同时在单菌种发酵的基础上,对康宁木霉和产朊假丝酵母混合发酵进行了初步探索.研究结果表明,利用康宁木霉固态发酵中药渣生产蛋白饲料是可行的;在优化发酵条件下,即氮源添加量为30 mg硫酸铵/g干药渣、初始pH 4.0、固液比1∶2、发酵时间4 d,中药渣中真蛋白含量由11.12%提高至17.80%,粗纤维含量由29.14%降低至17.50%.     

哈茨木霉cDNA文库构建及表达序列标签分析

为了从分子水平上研究哈茨木霉的生物防治作用机制,构建了哈茨木霉菌丝体时期的cDNA文库并随机挑选部分克隆进行了测序分析.所构建的文库滴度为1.2×106pfu/m l,重组率为93%,插入片断平均长度>1.2 kb.对随机挑选的305条ESTs测序分析,其中67条EST为已知基因,58条为已知EST,其余的180条为新EST.在已知基因中,有9条ESTs与生物防治相关.从对文库的初步检验结果看,文库具有良好的质量,符合大规模测序的标准.通过ESTs研究是获得功能基因的有效手段.     

康宁木霉产纤维素酶固态发酵条件研究

对康宁木霉产纤维素酶的最佳固体发酵条件进行了优化,研究表明：最佳氮源为硫酸铵或磷酸氢二铵,最佳碳源为小麦秸秆：麦麸=3：2,添加0.1％的Tween80、含水量为300％,28℃条件下培养4d产酶活力最高．初始pH值对CMC酶活影响较大,当pH=3.0时CMC酶活最高,初始pH值对滤纸酶活影响较小,pH=5时酶活最高．     

蜂毒溶血肽(Melittin) cDNA的克隆及序列分析

为了克隆得到正确序列的蜂毒溶血肽cDNA，对蜂毒中的蜂毒溶血肽进行了研究。实验从蜜蜂毒腺中提取总RNA，通过RT－PCR方法扩增到了蜂毒溶血肽的cDNA，扩增产物克隆到pT7Blu-T载体，转化大肠杆菌JM109，DNA序列分析结果表明克隆得到的蜂毒溶血肽cDNA脱氧核糖核苷酸序列正确。     

绿色木霉内切葡聚糖酶基因Ⅰ的克隆表达

为深入研究绿色木霉(Trichoderma viride)内切葡聚糖酶(EGⅠ)的特性与功能,利用Northern blot方法分析不同碳源条件下绿色木霉的egⅠ表达,采用RT-PCR方法从绿色木霉T4中克隆egⅠ基因的cD-NA序列,测序与生物信息学分析,并构建诱导型表达载体pYES2-egⅠ,转化酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)INVSc1和H158中表达.结果表明:绿色木霉在含有纤维素的液体培养基中生长,egⅠ高效表达,在秸秆中表达量最高.纤维二糖中表达量相对较低,在葡萄糖、果糖中没有表达.egⅠ基因编码框长度1 377bp,编码459个氨基酸.含有信号肽,为分泌蛋白,属于糖苷水解酶家族7,具有纤维素酶结合域(CBD)和催化域(CD).INVSc1转化子发酵培养48 h达到转录高峰期,60 h达到酶活高峰期,酶活为0.081 6 U/mL,酶活比H158转化子提高32.5%.     

哈茨木霉几丁质酶基因的cDNA克隆及表达

为了研究全新几丁质酶基因Chit37(DQ647957)的特性与功能,将该基因在大肠杆菌中进行了外源表达.通过构建哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了基因Chit37的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为1032bp,编码343个氨基酸,理论分子量为36.6kDa.采用PCR扩增的方法克隆该基因并将其构建到原核表达载体pET28(a+)上,构建了原核表达载体pET-Chit37并转化宿主菌BL21(DE3),菌落PCR及酶切鉴定均证实转化子的正确性,重组蛋白经IPTG诱导后获得表达.优化的表达条件为终浓度0.1mM IPTG诱导培养4h.     

黄花苜蓿铁蛋白cDNA的克隆与序列分析

为克隆黄花苜蓿铁蛋白基因,根据已报道的植物铁蛋白基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增得到大小约为750 bp的特异性片段,并将其克隆到pBlueskript II SK+上.序列分析结果表明,黄花苜蓿铁蛋白基因cDNA全长为756 bp,编码252个氨基酸,与紫花苜蓿铁蛋白基因的核苷酸、氨基酸的同源性均为97%.该基因编码的蛋白质是一个定位在叶绿体上的球形蛋白,理论相对分子质量为28 ku,等电点为5.47,二级结构为α/β混合型蛋白,某些氨基酸在密码子的选择上存在一定的偏向性.该蛋白具有1个FER-RITIN-LIKE功能区、2个铁蛋白基因家族铁结合区域的信号序列、3个潜在的N-糖基化位点、1个蛋白激酶C磷酸化位点、1个依赖于cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点以及3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点等重要的功能基序.黄花苜蓿铁蛋白基因的克隆,为今后利用该基因进行改良植物铁营养成分及提高植物抗氧化胁迫能力的基因工程奠定了基础.     

湖北省粮油工业利润的时序分析

本文将采用随机时间序列模型——自回归模型AR(P)去研究湖北省粮油工业生产利润值序列{y_t},t=1(1970),…,21(1990)。分四个步骤进行:(1)识别模型,检验序列{y_t)的平稳性,并用偏自相关系数(?)确定模型阶数P;(2)估计,求模型参数的OLS估计值;(3)检验,用模型的残值ε_k的自相关系数r_k检验模型;(4)预测,根据所得到的AR(1)模型预测未来期粮油工业利用值。     

嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因的克隆与序列分析

将GenBank中已报道的罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶基因对已公布的嗜酸乳杆菌NCFM基因组全序列做tblast,找到一个同源编码框.参照此编码框的核苷酸序列及pQE30质粒图谱特性设计上、下游引物,利用PCR法扩增嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因,并克隆到pQE30质粒载体上进行测序.分析测序结果表明,扩增得到的目的DNA全长1 776 bp,G C含量为37.5%,共编码591个氨基酸,理论相对分子质量67.5kDa.用Signal P3.0对其N端前70个氨基酸序列进行分析,结果表明,第20~40位氨基酸有较强的疏水性.不过,N端前70个氨基酸的C值、S值和Y值并不高,最有可能的酶切位点位于第45位与第46位氨基酸之间,但预测其被切割的可能性概率低于1%.可以推断,在嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶的N端氨基酸序列中不存在信号肽序列.     

前向人工神经网络模型用于时间序列分析

介绍前向人工神经网络模型，并与传统的统计学线性模型进行比较。为了适应时间序列变量的特点，对逆传播模型进行了改进，并对太阳黑子活动的观察值这一典型的时间序列进行了分析，并检验了模型的预测能力，取得了较好的结果     

蜡样芽胞杆菌深圳株754-1 PLC基因的克隆及表达

以本实验室分离筛选的高产PLC的蜡样芽胞杆菌深圳株754—1为供体菌，以大肠杆菌DH5仅和BL21（DE3）为受体菌，构建高效表达胞内PLC的工程菌。以754-1菌基因组为模板。经PCR扩增，将得到的PLC基因连接到T载体上，转入大肠杆菌DH5仅。经Amp抗性筛选的阳性克隆子提取重组质粒，双酶切，回收含PLC基因的片段并将其克隆到pGEX-KG载体，获得重组质粒pGEX-KG-PLM，该重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）。用IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析，在分子量为38kd处有一条明显的表达带。     

黔西南三叠系层序充填格架及对印支运动响应

选取黔西南地区上扬子碳酸盐岩台地-右江盆地的三叠系剖面进行层序划分对比,并重点对台地边缘剖面进行研究,将三叠系划分为8个三级沉积层序.在此基础上,通过与Haq等列出的三叠纪生物地层时代进行对比,建立了黔西南地区三叠系层序充填格架.根据三级沉积层序自下而上的发育组合将三叠系划分出3个二级层序:SS1、SS2、SS3.本区层序充填特征亦反映了印支运动的3个幕次.印支Ⅰ幕,右江盆地为欠补偿型被动大陆边缘阶段,以构造沉降作用为主;印支Ⅱ幕,右江盆地进入过补偿型前陆发展阶段,由于南部板块碰撞的加强,沉积中心向西北迁移;印支Ⅲ幕,随着扬子陆块的全面隆升,西部盆地和东部台地区抬升消亡.     

里氏木霉R3液体深层发酵产纤维素酶工艺优化研究

研究了温度、pH值、溶氧对里氏木霉R3液体深层发酵产纤维素酶的影响,并进行了工艺优化.用50 L全自动通气机械搅拌发酵罐,接种量10%,发酵过程采取分段控制pH值、温度和溶氧的工艺,发酵120 h酶活力最高,FPA和CMC酶活力分别达到48.9 FPIU/mL和321.68IU/mL,FPA酶活比工艺优化前提高了221%.     

地层基准面原理在TC2井层序分析中的应用

为了提高层序地层分析的分辨率和储层预测的准确性,运用ＣｒｏｓｓＴＡ等人倡导的地层基准面原理,对ＴＣ２井进行了基准面旋回识别和高频层序划分,中期旋回与层序相对应,一般表现为完整的基准面上升和下降旋回,只有冲积层序（Ｓ１１、Ｓ１２、Ｓ１３）缺失下降旋回沉积;上升包括低水位和水进体系域;下降旋回属高水位体系域 ,其转折点肉麻 段;短期旋回相当于层序。所识别出的３种准离类型茏典层序地层学的概念有所不同。研     

JS—2算法语言的结构分析及应用

本文着重分析JS—2算法语言的解释程序的结构、介绍该语言的特点和应用,并提出了将该语言移植到TP—801单板微型计算机的方法。     

非编码核酸序列的最大信息量原理研究

由约束条件（Ｍａｒｋｏｖｉａｎ熵，Ｇ＋Ｃ含量等）下的熵极大化的最大信息量原理导出核酸序列非编码区碱基概率分布，发现约７３％的序列理论与实验值偏差小于１５％，并对拉格朗日乘子与进化关系作了讨论。