一株嗜酸乳杆菌突变株亚油酸异构酶的纯化及性质

亚油酸异构酶可以把亚油酸转化为共轭亚油酸。用硫酸铵沉淀、透析、凝胶过滤等步骤 ,从 1株嗜酸乳杆菌突变株中分离纯化了该酶。纯化倍数为 5 2 .0倍、比活力达 5 1 3 .0U/mg、活力回收 7.0 %。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 40 .7ku ;该酶的最适反应pH值为 4.0左右 ,最适反应温度为 3 0～ 40℃ ,在 pH 2 .0～ 7.0和 60℃以下较稳定。Fe2 + 、Mg2 + 、Zn2 + 、Na+ 能提高酶活性 ,Hg2 + 、Cu2 + 、Mn2 + 、Fe3+ 能抑制酶活性。以亚油酸为底物时该酶的动力学常数为 2 1 .6mmol/L。     

嗜酸乳杆菌发酵法制备亚油酸异构酶的研究

以正交试验确定了嗜酸乳杆菌的最佳发酵条件，对其产生的亚油酸异构酶以硫酸铵分级沉淀和Sephadex G100层析进行了分离，并测定了酶活力。结果表明，嗜酸乳杆菌适宜发酵条件为：温度40℃，初始pH6．5，接种量1％，发酵时间24h；以上条件下产生的亚油酸异构酶经纯化后测得酶活为4358．6U。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究

亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考。通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-802.00ml,反应温度37℃,反应时间3h。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析

对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的启动子区进行了定位,证明该基因为单顺反子结构。分析该酶的代谢途径证明亚油酸异构酶单独处于一条分支途径,无其他的酶与之协同作用。分析四种乳酸菌亚油酸异构酶基因的上游调控区,发现了12个保守位点,可能在亚油酸诱导基因表达调控中起重要作用。确定该蛋白N端无信号肽存在,但在N端25(27)～42位存在跨膜区,取向略微倾向于由外向内。证明嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的密码子偏好性与大肠杆菌的存在一定差异,可能影响亚油酸异构酶基因的表达,并提出了改造方案。     

嗜酸乳杆菌亚酸异构酶提取方式的研究

共轭亚油酸是一种具有多种生理活性的天然脂肪酸,亚油酸异构酶能特异性地转化合成CLA,克服了化学合成法的诸多缺点,但系统全面地研究胞内亚油酸异构酶破壁提取方式的很少.通过正交试验、方差分析等方法研究了嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的提取方式,确定了超声波法、化学法和溶茵酶法等的最佳提取条件和各影响因素的显著性,并对3种方法及复合法进行了比较.结果表明,溶茵酶法 超声波法破壁提取亚油酸异构酶效果最佳,酶活力最高可达82.6U.     

产酶培养条件对一株嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的影响

本实验用MRS培养基嗜酸乳杆菌,并通过添加亚油酸(LA)诱导其产亚油酸异构酶。单因素试验结果表明,在MRS培养基中添加糖类物质总体上不利于产酶,添加尿素、牛肉膏、酵母膏、酪蛋白等有机氮源后,酶活力比对照组有较大幅度提高,而添加无机氮源酶活力增加幅度不如有机氮源。在培养基中添加一定量的NaCl和卵磷脂也有助于酶活力的提高。由正交试验结果确定的最佳产酶条件为:培养温度37℃,培养时间24h,每100ml培养基中添加10mgLA,接种量3%(V/V)。     

透性化处理对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶表观活力的影响

来源嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶是胞内酶,完整的细胞呈现较低的酶活。研究了乙醇、乙醚、甲苯、溴化十六烷三甲基铵(CTAB)等透性剂对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶活力的影响。结果表明,经过透性化处理的细胞亚油酸异构酶活力显著提高,其中最好的透性剂为CTAB。当CTAB的浓度为1%,30℃保温20～30min,酶活高达405.6U/g,是超声波破碎的细胞表观酶活的5.4倍。透性化细胞中亚油酸异构酶热稳定性提高,60℃保温2h,残余酶活为80%。透性化细胞生物转化共轭亚油酸转化率达84.5%,用透性化细胞可有效转化亚油酸为共轭亚油酸。      

透性化处理对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶表观活力的影响

来源嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶是胞内酶,完整的细胞呈现较低的酶活。研究了乙醇、乙醚、甲苯、溴化十六烷三甲基铵(CTAB)等透性剂对嗜酸乳杆菌细胞亚油酸异构酶活力的影响。结果表明,经过透性化处理的细胞亚油酸异构酶活力显著提高,其中最好的透性剂为CTAB。当CTAB的浓度为1%,30℃保温20～30min,酶活高达405.6U/g,是超声波破碎的细胞表观酶活的5.4倍。透性化细胞中亚油酸异构酶热稳定性提高,60℃保温2h,残余酶活为80%。透性化细胞生物转化共轭亚油酸转化率达84.5%,用透性化细胞可有效转化亚油酸为共轭亚油酸。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的酶学性质研究

本实验对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的酶学性质进行了研究.结果表明:以亚油酸为底物,亚油酸异构酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为4.0,pH值在3.0～6.0范围内有较高的稳定性;不同的金属离子和有机试剂对亚油酸异构酶的影响程度不同,同一种金属离子和有机试剂在不同浓度下也不相同;以亚油酸为底物的酶促反应米氏常数Km=33.33mol/L,Vmax=15.6mol/L·h.     

嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2分离纯化研究

采用氯仿萃取和硫酸铵梯度盐析两种方法对嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2进行粗提,氯仿萃取获得的粗提物抑菌直径为17.40mm;硫酸铵饱和梯度盐析,其中60%~80%饱和梯度粗提物抑菌效果较好,抑菌直径为15.50mm。两种粗提物经离子交换cellufine A-500柱层析纯化后,抑菌效价和比活力显著增强,分别是380.60Au/mL和355.60Au/mL、5.55Au/μg和9.96Au/μg,提纯倍数分别为15.86、28.46。Tricine-SDS-PAGE电泳测得Lactobacillin XH2分子量在14.4~20.1ku之间。     

嗜酸乳杆菌胆盐水解酶的分离纯化及酶学性质

对嗜酸乳杆菌La-XH1产生的胆盐水解酶进行分离纯化,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明：嗜酸乳杆菌La-XH1胆盐水解酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B柱层析后的酶比活力分别为47.82 U/mg和115.85 U/mg,纯化倍数分别为4.46 倍和10.82 倍,酶的回收率分别为59.89%和25.11%;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）电泳分析,该酶的分子质量约为43 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6.0,Fe3+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+对该酶有激活作用,其中Fe3+的激活作用最强,Na+、K+对该酶几乎无作用,而Cu2+、Ba2+对该酶有很强的抑制作用。     

嗜酸乳杆菌冻干菌粉保护剂选择的研究

为了开发以嗜酸乳杆菌为基础的各类制品,本文以嗜酸乳杆菌存活率为指标,对保护剂进行了单一和复合的筛选及配方的研究,并进行了验证实验。结果表明,单一及复合保护剂均对菌体存活率具有一定的保护作用,但复合保护剂的效果明显高于单一保护剂。最终确定出配方:脱脂乳(16.0%)、麦芽糊精(10.0%)、海藻糖(10.0%)、L-谷氨酸(1.0%)、维生素C(2.0%)、甘油(2.0%)、MnSO4(0.8%)对嗜酸乳杆菌的保护效果最佳;保护剂与细胞悬浮液最佳比例是2∶1,利用此保护剂,经真空冷冻技术可制得活菌水平在1010cfu/g的嗜酸乳杆菌冻干菌粉。     

瑞士乳杆菌和嗜酸乳杆菌的益生免疫特性的研究

以瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1、KLDS AD2为研究对象,详细研究了它们对体外模拟人工胃肠道的耐受性,并评估了三株乳杆菌对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,初步探讨了三株乳杆菌的免疫活性。结果表明,三株乳杆菌对人工胃液、人工肠液、胆汁盐环境具有很好的耐受性,瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1较强于嗜酸乳杆菌KLDS AD2。乳杆菌对脾淋巴细胞增殖活性的作用表现出明显的量效关系,活菌数为107CFU/mL时,对脾淋巴细胞活性影响大小为KLDS AD1>KLDS 1.8701>KLDS AD2;KLDS 1.8701对脾淋巴细胞的增殖具有很好的促进作用,只有当KLDS AD1的活菌数达到107CFU/mL时才具有促进作用,而KLDS AD2没有促进作用。      

改善嗜酸乳杆菌酸乳风味的研究

本论文采用正交实验设计优选乳清粉、低聚果糖、蔗糖对嗜酸乳杆菌酸乳风味改善的最佳配比,并研究酸乳凝固时、成熟时和贮存期酸乳中酸度、感官特征和乳酸菌数变化情况.试验结果表明,当乳清粉、低聚果糖和蔗糖的比例分别为3%、5%和4%,培养温度为38℃,凝固后冷藏24h后,酸乳在贮藏期间中酸度(70～90°T)、乳酸菌计数(108)达到最佳水平,酸乳的组织状态细腻,香气浓郁,风味纯正,酸度适口,品质最佳.     

嗜酸乳杆菌发酵乳保藏性的研究

对嗜酸乳杆菌发酵乳在冷藏条件下保藏性进行了研究. 结果表明, 7 ℃条件下 14 d两株嗜酸乳杆菌发酵乳中细菌的存活率分别为 3.43% 和 2.20%, 且活菌数仍在 108 mL 1以上, 酸度为 90 ° T和 107 ° T, 双乙酰分别增加了 11.80% 和 56.41%, 乙醛含量分别为 2.993 mmol/ mL和 2.561 mmol/ mL, 使发酵乳具有良好风味.     

两株嗜酸乳杆菌体外降低胆固醇的研究

考察两株嗜酸乳杆菌体外降低胆固醇的降低曲线和降低方式,以及不同条件下嗜酸乳杆菌对培养基中胆固醇的降低情况.结果表明,这两株茵对胆固醇有明显的去除作用,其对胆固醇的降低作用是同化吸收和共沉淀的结果,以同化方式为主;随着接种量的增加,降低率也随之增加;不同胆盐对其降低胆固醇效果不同,当胆盐添加量为0.2％(m/V)时,胆固醇降低量最大;当吐温80添加量为0.1％时,胆固醇降低效果最佳.     

嗜酸乳杆菌增菌培养研究

对培养嗜酸乳杆菌的基础培养基进行筛选,确定为11％NFM培养基。采用正交试验对增殖因子进行优化,得到最优增菌培养基:基础培养基+5％番茄汁+10％萝卜汁+0.1％肝浸汁+5％啤酒。以最优增菌培养基测定生长曲线、pH值和滴定酸度的变化,确定增菌培养终止时间为10hr,此时活菌数达7.49×10~9cfu/ml。