酶解改性对大豆蛋白抗原性的影响研究

大豆蛋白营养价值很高,但其是八大类食物过敏原之一,会对过敏人群造成危害,而酶解是一种较好的蛋白改性方法。选用风味蛋白酶处理大豆分离蛋白,采用间接竞争ELISA法测定酶解产物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,并利用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,风味蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,且其抗原性与水解度具有负相关关系。风味蛋白酶在酶解时间30 min、加酶量1 500 U/g、温度60℃、p H 6.5条件下,酶解产物中β-伴大豆球蛋白抗原抑制率达到最低,为21.79%,比大豆分离蛋白降低了76.60%。SDS-PAGE结果表明,风味蛋白酶能够将β-伴大豆球蛋白酶解成低相对分子质量的肽段,从而降低其抗原性。     

超高压处理对β-伴大豆球蛋白抗原性及结构的影响

探究超高压处理对β-伴大豆球蛋白抗原性及结构的影响,为大豆蛋白的脱敏提供方法。通过等电点冷沉法提取β-伴大豆球蛋白,设置不同的超高压条件对β-伴大豆球蛋白进行处理,利用免疫印迹法(Western-Blot)与ELISA法分析β-伴大豆球蛋白的免疫活性,通过SDS-PAGE、傅里叶变换红外光谱(FTIR)与荧光光谱表征β-伴大豆球蛋白的结构变化。结果表明:超高压处理能够显著改变β-伴大豆球蛋白的抗原性和结构。400 MPa超高压处理能最大程度地降低β-伴大豆球蛋白的免疫活性,且蛋白质二、三级结构发生显著变化,α-螺旋与β-转角含量下降,无规则卷曲和β-折叠含量上升,大量疏水性区域暴露。超高压处理改变了β-伴大豆球蛋白的空间结构,可能破坏或掩盖原有的抗原表位,进而降低抗原性。     

响应面法优化β-伴大豆球蛋白超高静压处理条件的研究

β-伴大豆球蛋白是7S球蛋白的主要成分,是重要的大豆抗原蛋白。在单因素试验的基础上对超高静压处理压强、处理时间、β-伴大豆球蛋白质量浓度3个因素进行研究,以β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为响应值,采用响应面法优化β-伴大豆球蛋白超高静压处理条件。结果表明:β-伴大豆球蛋白超高静压处理最佳条件为压强455 MPa、时间18 min、蛋白质量浓度15 mg/m L,在此条件下β-伴大豆球蛋白抗原性抑制率为49.59%。验证试验测得此条件下β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为51.19%,标准偏差为1.07%,说明利用响应面法分析结果可靠。     

热处理对β-伴大豆球蛋白结构及免疫活性的影响

以脱脂豆粉为原料,利用碱溶酸沉法分离提取β-伴大豆球蛋白,采用间接竞争ELISA法测定不同温度、加热时间、反应浓度下β-伴大豆球蛋白的抗原性变化,并对热处理后产物的溶解度、免疫原性及结构特性进行分析。结果表明:热处理能显著影响β-伴大豆球蛋白的抗原性。热处理后,样品蛋白的溶解度随温度升高呈先上升后下降的趋势。免疫印迹结果显示:热处理后β-伴大豆球蛋白的免疫原性有一定程度的降低,但不能完全消除。傅里叶红外光谱结果表明:热处理之后样品蛋白中的α-螺旋和β-折叠的含量减少,β-转角含量和无规则卷曲含量增加。     

11S球蛋白改性前后的结构表征

11S大豆球蛋白的结构及其功能特性存在天然的局限性,经过前期蛋白酶酶解-复聚后,得到改性11S球蛋白。利用扫描电镜分析仪、X射线衍射仪、DSC和氨基酸分析仪,从不同角度探讨改性后的11S球蛋白内部结构的变化,更加清晰和全面地认识复合酶改性对大豆11S球蛋白解离和聚集行为的影响,并阐明其改性机理。     

双酶酶解11S球蛋白的工艺优化研究

以大豆分离蛋白为原料,采用等电点冷沉法提取11S大豆球蛋白,选用碱性蛋白酶、胃蛋白酶对11S大豆球蛋白进行双酶酶解。以水解度为指标,考察酶添加量、温度、p H和时间对酶解液水解度的影响,通过单因素试验和正交试验得到最佳水解工艺条件。在单酶水解的基础上,组合碱性蛋白酶和胃蛋白酶,按照分步水解的方式对11S大豆球蛋白进行复合酶解,得到的最优参数为:胃蛋白酶在温度35℃、p H 3.0、酶添加量1 500 U/g的条件下水解1 h,碱性蛋白酶在温度50℃、p H 10、酶添加量12 000 U/g的条件下水解5 h,得到的11S球蛋白酶解物水解度为19.65%,比碱性蛋白酶单酶水解时高14%。     

酶法改性处理对大豆蛋白性质的影响

采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对大豆浆料进行酶解,探究不同水解度对大豆蛋白凝胶性能和溶解性能的影响．实验结果表明：蛋白酶的水解作用不利于大豆蛋白的凝胶性能,但能显著提高大豆蛋白的溶解性能;相对于中性蛋白酶,木瓜蛋白酶的水解作用对大豆蛋白性质的影响更显著．     

用2709碱性蛋白酶水解醇洗花生蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽

采用2709碱性蛋白酶水解醇洗花生蛋白制备ACE抑制肽。以短肽得率、水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和响应面优化设计获得最佳酶解工艺条件:p H 9.3、酶解温度50℃、时间150 min、加酶量3 000 U/g和底物浓度4%,在最佳酶解条件下,短肽得率为77.89%,水解度为17.87%,ACE抑制率为76.26%。结果表明:适当的酶解时间和温度能提高短肽得率和ACE抑制率,但酶解时间过长,过度水解会使短肽失去ACE抑制结构,降低ACE抑制率。     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

大豆球蛋白兔源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

为建立大豆球蛋白致敏原检测方法和蛋白致敏性亚基的表位定位,从脱脂豆粉中分离纯化大豆球蛋白,制备多克隆抗血清,并进行免疫学特性分析。大豆球蛋白等电点pH值为6.4,采用碱溶酸沉法对大豆球蛋白进行粗提,用Sepharose CL-6B层析纯化大豆球蛋白粗提物,用SDS-PAGE检测蛋白纯度,免疫新西兰兔制备多抗血清,并对血清进行免疫学特性鉴定。结果表明:1号兔效价达到1∶6×10^4,由间接竞争ELISA抑制曲线可知,半数抑制率IC50为527 ng/mL,1号兔的多抗血清敏感性最高。特异性测定结果表明,该多抗血清除了与β-伴大豆球蛋白和花生蛋白的交叉反应率为8.6%和4.6%,与其他蛋白交叉反应率均小于0.2%。制备的兔源多抗血清效价高、敏感性强、特异性好,为大豆球蛋白单克隆抗体的制备及大豆蛋白致敏性亚分子结构的定位奠定了基础。     

β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

用抗原免疫动物获取血清是常规的抗体制备方法。β-伴大豆球蛋白作为大豆蛋白中最主要的致敏蛋白之一,制备相关抗体是建立其免疫学快速检测方法的基础。将提取的天然β-伴大豆球蛋白与弗氏佐剂混合,乳化后皮下多点注射Balb/c小鼠,每3周加强免疫1次,免疫后第10天对所制备多抗血清的免疫学特性进行鉴定。结果表明,5次免疫后6只小鼠多抗血清效价均达1∶6 400以上,其中6号小鼠的多抗血清敏感性最强,其半数抑制浓度IC50为718 ng·mL-1。此多抗血清与芝麻蛋白、麦胚球蛋白无交叉反应,与花生蛋白、大豆球蛋白交叉反应率低于10%。本试验成功制得了效价高、敏感性强、特异性好的鼠源多抗血清。     

大豆蛋白酶水解产物的添加量对面粉及面条品质的影响

探讨了酶水解产物的添加量对面粉的糊化特性、粉质特性、面筋特性及面条质构和烹煮品质的影响。结果表明:随着大豆蛋白酶水解产物添加量的增加,面粉糊化特性的峰值黏度、最终黏度、最低黏度、衰减值和回生值均显著降低;添加2%的大豆蛋白酶水解产物时,面粉的粉质特性与原面粉无明显差异;面粉的湿面筋含量和干面筋含量均随着大豆蛋白酶水解产物添加量的增加而降低。添加酶水解产物后,面条的硬度和黏附性均显著降低;酶水解产物添加量小于4%时,面条的拉断力增加;和原面粉面条相比,添加大豆蛋白酶水解产物后,面条吸水率、干物质损失率和蛋白质损失率均显著增加。综合评价面粉品质和面条的品质指标,酶水解产物的添加量以3%为宜。     

大豆蛋白选择性酶解液的超滤研究

对大豆蛋白进行选择性酶解改性和超滤,得到改性大豆蛋白.脱脂豆粕经过碱提得到可溶性蛋白溶液,粗蛋白液经过选择性水解、超滤,截留液冷冻干燥得到改性大豆蛋白.研究了大豆蛋白的选择性水解和超滤时膜的操作性能.产物经SDS-PAGE分析,表明其成分主要是glycinin的酸性和碱性亚基.蛋白质回收率在80%以上,产品的蛋白质含量大于70%.     

蛋白酶及其大豆蛋白水解物苦味的研究

为了研究酶解大豆蛋白之苦味,在相同条件下将５种不同的蛋白酶分别作用于大豆分离蛋白。结果发现ＨＡＰ低温高碱碱性蛋白酶、１３９８中性蛋白酶、Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ复合风味蛋白酶不易产生苦味,而胃蛋白酶和Ａｌｃａｌａｓｅ碱性内麦较易产生苦味。     

大豆蛋白酶解产物降胆固醇活性的初步研究

研究了用AS1.398和Alcalase两种蛋白酶制备的水解度为10%～24%的大豆蛋白酶解产物的降胆固醇活性.结果表明:用Alcalase酶水解大豆蛋白,水解度为18%的产物降胆固醇活性最高,添加量为5 mg/mL时,对胆固醇胶束溶解度的抑制率为48.39%,动物实验表明该产品在灌喂剂量大于1 g/(kg·d)时,对喂饲高脂饲料小鼠的血清总胆固醇降低作用比较显著(P＜0.025),30 d后降低幅度可达30%以上.     

大麦发芽后蛋白质含量及其酶活力变化与麦芽品质的关系

研究了大麦发芽前后蛋白质的总量、亚组分含量和酶活力以及它们与麦芽品质的关系.选取国内外6种麦芽,分别研究了发芽前后,蛋白质总量及其亚组分含量和酶活力的变化,并探讨了它们的变化与麦芽品质的关系.结果表明3种大麦总蛋白质含量为12%左右,且发芽前后总蛋白质含量基本上保持不变,其中清蛋白亚组分含量有所增加,球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白亚组分含量减少,不同品种的大麦其蛋白亚组分含量变化程度不同;麦芽的库值为40%～45%,且麦芽蛋白酶活力与其库值成强正相关性,相关系数R=0.988 1(P<0.01).麦芽总蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白含量与库值不存在相关性.     

高强度超声波浴对小麦醇溶蛋白结构及抗原性的影响

小麦是世界上生产和消费最广泛的粮食作物,同时也是公认的八大过敏性食品之一,而麦醇溶蛋白(Glia)是诱发小麦过敏的主要过敏原之一,为探究小麦蛋白脱敏的新方法,采用高强度水浴超声波(HIWU),设定不同的超声功率(0、240、360、480、600 W)对Glia进行处理。测定了Glia中游离氨基和游离巯基的含量,利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、荧光光谱和拉曼光谱表征Glia的结构,通过免疫印记吸附试验(Western blotting)和间接非竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)测定了Glia与抗体的反应能力。结果表明：高强度超声波浴对Glia的结构和抗原性影响显著;480 W超声处理对Glia的抗原抑制效果最好;超声波浴使Glia的二级和三级结构发生显著变化,其有序结构(α-螺旋、β-折叠)含量减少,无序结构(β-转角、无规则卷曲)含量增加,酪氨酸和色氨酸残基暴露,维持结构稳定的g-g-g型二硫键含量减少。高强度超声波浴改变了Glia的次级结构,其抗原表位被掩藏或破坏,有效地降低了Glia的抗原性。     

响应面法优化核桃ACE抑制肽的制备工艺研究

以核桃分离蛋白为原料,用Neutrase 0.8L酶解制备高活性的ACE抑制肽.采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定酶解多肽的ACE抑制率,同时以水解度和ACE抑制率为考查指标,通过单因素试验及响应面试验设计,优化了中性蛋白酶（Neutrase 0.8L）酶解核桃分离蛋白的酶解工艺.结果表明：各因素对水解度的影响顺序为pH〉温度〉E/S,对ACE抑制率的影响顺序为pH〉E/S〉温度;最佳酶解工艺条件为：pH 6.81、温度55℃、时间2h、底物质量浓度2%、酶与底物比3.43%,酶解产物的水解度达到8.52%,ACE抑制率达到67.94%.     

双酶酶解制备花生多肽的工艺研究

以水解度和蛋白提取率为指标,采用胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶复合酶解花生粕制备花生多肽.结果表明,双酶复合酶解花生粕的最佳工艺条件为:风味蛋白酶与胰蛋白酶的添加比例为5∶4、pH为8.0、处理温度为50℃、底物浓度为5%.在此条件下酶解3 h水解度达到11.71%,蛋白提取率达到63.86%,多肽得率高达52.15%;酶解24 h,水解度达到26.21%,蛋白提取率及多肽得率分别降低至53.56%和26.88%.     

中性蛋白酶与酸性蛋白酸双酶法水解大豆蛋白的研究

对大豆饼粕采用中性蛋白酶与酸性蛋白酶双酶联合水解处理，探索出最适工艺条件为先加A.S1398中性蛋白酶，温度40℃，pH8.0，固液比1：9，酶用量7.0%，水解时间6h；后加酸性蛋白酶：温度45℃,pH3.0，酶用量5.0%，水解时间8h。双酶联合水解后大豆蛋白水解率可达44.20%。