两相体系中胰酶拆分DL-苯丙氨酸

将ＤＬ－苯丙氨酸与甲醇酯化得ＤＬ－苯丙氨酸甲酯盐酸盐,在甲苯／水两相体系中用碳酸氢钠中和ＤＬ－苯丙氨酸甲酯盐酸盐得游离ＤＬ－苯丙氨酸甲酯,在甲苯／水两相体系中用胰酶拆分ＤＬ－苯丙氨酸甲酯得到Ｌ－苯丙氨酸和Ｄ－苯丙氨酸甲酯,取得了各步反应的最优条件,并将Ｄ－苯丙氨酸甲酯外消旋得到ＤＬ－苯丙氨酸甲酯继续用于拆分。拆分摩尔收率为６１．４％,所得Ｌ－苯丙氨酸粗品纯度为９２．２％,重结晶后为９８．６％,［α］２５Ｄ＝－３０．５°     

酶法拆分N-乙酰-D,L-丙氨酸反应控制步骤

研究了固定化米曲霉菌光学拆分N-乙酰-D,L-丙氨酸反应过程的速率控制步骤。在近似无限浴的条件下,通过测量间歇拆分反应产生的L-丙氨酸的浓度变化规律,判断反应过程中的速率控制步骤。结果表明,底物浓度和反应温度是影响速率控制步骤的重要因素,用得到的有效扩散系数进行模型计算,结果与实验值基本一致。     

氨基酰化酶拆分制备手性蛋氨酸工艺条件研究

以N-乙酰DL-蛋氨酸(N-Ac-DL-Met)为拆分底物,对氨基酰化酶法拆分工艺参数如反应温度、pH、激活剂Co2 浓度以及底物浓度等因素进行了初步考察。结果表明,在反应温度37℃,缓冲体系pH7.5,Co2 浓度为0.5 mmol/L,初始底物N-Ac-DL-Met的浓度为0.06 mol/L,氨基酰化酶加入量为5μg/mL的较佳条件下,L-蛋氨酸(L-Met)的产率可达45%;产物L-Met结晶的光学纯度(用对映体过量值%e.e表示)为95.4%。实验中首次采用多组分标准曲线法,提高了茚三酮显色法在氨基酰化酶法拆分制备手性氨基酸的检测精确度     

酶法拆分氮-15标记S-苄基-半胱氨酸的研究

S-苄基-半胱氨酸是化学法制备氮-15（^15N）标记胱氨酸及其衍生物的重要前体,以S-苄基-D,L-半胱氨酸为拆分底物,对氨基酰化酶酶促拆分工艺如反应温度、初始pH值、酶和底物的用量、反应时间等工艺参数进行了考察。在较佳的工艺条件下,苄基-L-半胱氨酸拆分的单程收率达到45%,未出现同位素丰S-度稀释现象。     

固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸

以DL-精氨酸为原料,用固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸,并对拆分条件进行了研究。结果表明:最适反应温度55℃,最适pH=6.0,c(DL-精氨酸)=0.3 mol/L,ρ(菌体)=30 g/L,拆分反应10 h,拆分率达98%以上。连续反应10批次,固定化细胞仍保留最高酶活力的75%。产物经分离纯化,D-精氨酸收率达84.0%,[α]2D5=-27.4°〔ρ(D-精氨酸)=20 g/L,5 mol/L盐酸〕。     

氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸

用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。     

丝氨酸脱氨酶酶法拆分DL-丝氨酸

利用pET28a为载体在宿主细胞BL21(DE3)中重组表达了大肠杆菌丝氨酸脱氨酶,以L-丝氨酸为底物,研究了其酶学性质,考察了温度、起始pH、底物质量浓度等因素对酶促反应的影响,并利用丝氨酸脱氨酶酶法拆分了DL-丝氨酸。结果表明,丝氨酸脱氨酶重组表达成功;丝氨酸脱氨酶最佳反应条件为37℃,pH=9.0,底物质量浓度40 g/L;0.3 g菌体细胞酶法拆分100 mLρ(DL-丝氨酸)=80 g/L反应液需8 h,其中,L-丝氨酸摩尔转化率达98%。     

膜反应萃取过程酶法拆分N-乙酰-D,L-苯丙氨酸乙酯

<正>手性是自然界的本质属性之一,作为生命活动重要物质基础的生物大分子和许多作用于受体的活性物质均具有手性特征,因此分子的不对称性在生命过程中起着重要作用.近年来,随着不对称合成和手性开关技术的迅速发展,单一对映体的工业化生产成为可能.L-苯丙氨酸是人和动物必需的氨基酸,不能在体内合成,必须从外界摄取,近年来由于它在医药制剂和高甜度天冬甜精等方面的需求量剧增,对其研究和开发日益增多.酶膜反应萃取器集固定化酶膜反应与液液萃取于一体,能大大提高反应和分离效率,Matson、Scheper、Ha、Chang等利用酶膜反应萃取和乳化液膜酶反应过程,已成功地实现了一些消旋物的拆分.本文选择苯丙氨酸的拆分为研究对象,利用酶膜反应萃取过程进行L-苯丙氨酸的合成,探讨过程的可行性和影响因素.     

刺孢小克银汉霉9980生物酶法制备D-苯丙氨酸

筛选到一株产氨基酰化酶的真菌刺孢小克银汉霉9980,直接利用其菌体细胞拆分N-乙酰-DL-苯丙氨酸,最终制得D-苯丙氨酸.最适反应条件为0.2 mol/L N-乙酰-DL-苯丙氨酸(含Co2+5×10-4 mol/L),0.04 g/mL菌体,在pH值为7.0、50 ℃条件下反应24 h,拆分率达90%以上.产物经JK008阳离子交换树脂分离.N-乙酰-D-苯丙氨酸经6 mol/L HCl加热回流4 h脱乙酰得D-苯丙氨酸.D-Phe[α]20D=+34.4°(水溶).     

D-丙氨酸的用途及制备方法

介绍了D－丙氨酸在生理医学，食品工业等方面的应用，及目前它的各种生产方法。并对建立D－丙氨酸的工业生产方法提出了建议。     

米曲霉氨基酰化酶拆分DL茶氨酸

DL-茶氨酸经乙酰化可生成N-乙酰-DL-茶氨酸，然后利用米曲霉氨基酰化酶拆分N-乙酰-DL-茶氨酸可以获得L-茶氨酸。本文对氨基酰化酶酶促反应也进行了初步研究，考察了反应温度、反应时间、pH值和底物浓度等因素对酶促反应的影响。实验表明，转化温度40℃、转化时间30h、pH为7．0和底物浓度0．2mol／L时，目的产物L-茶氨酸的产率最高。     

固定化氨基酰化酶载体结构及在拆分中的应用

对采用大孔弱碱性阴离子树脂DEAE-D/H为载体制备得到的高活性固定化氨基酰化酶的载体的结构进行了扫描电镜分析,具有这种结构的DEAE-D/H固定化酶活力接近1 400 U/g。采用自制的固定床反应器连续拆分乙酰DL-蛋氨酸,根据对停留时间的测量,在反应器的液体流动为全混流、液体流速低于25 mL/h时,转化率接近100%。固定化酶具有良好的连续操作稳定性和贮藏稳定性。     

重组氨基酰化酶1与N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶酶学性质比较

利用基因工程手段重组表达了牛肾来源的氨基酰化酶1(ACY1),并与实验室之前构建的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶(NAO)进行比较,以N-乙酰-DL-蛋氨酸为底物,研究了其酶学性质,考察了pH、温度、反应时间、表面活性剂、金属离子等因素对拆分DL-蛋氨酸的影响。结果表明,重组NAO和ACY1拆分300 mmol/L的N-乙酰-DL-蛋氨酸所需时间分别是2 h和6 h;重组NAO的酶活及N-乙酰-L-蛋氨酸的转化率分别为1 139.41 U/g和98%,高于重组ACY1的671.24 U/g和58.78%,约是重组ACY1的1.7倍。     

双交联剂体系氨基酰化酶交联聚体的制备

采用酶交联聚集体技术（CLEAs）制备氨基酰化酶(EC 3.51.14)交联聚集体,优化了制备条件。90%（体积比）乙醇为沉淀剂,戊二醛和乙二醇二缩水甘油醚（EGDE）作为混合交联剂,以酶、戊二醛和EGDE的质量比为1.00∶0.75∶2.00,在30 ℃下交联12 h。制备所得氨基酰化酶CLEA酶活保留率为63.42%。氨基酰化酶经固定化后热稳定性得到增强,热失活过程由自由酶的一阶指数失活模型变为二阶指数失活模型,分子间亚基的结合力得到显著加强。自由酶在37 ℃下保存24 h后几乎损失了所有活力,而氨基酰化酶CLEA则保留了43%的酶活力,在57 ℃下保存24 h后仍有32%的酶活力保留。此外,氨基酰化酶CLEA重复使用性能得到明显提升,在重复水解底物10次后仍保留了72%的酶活力。     

苯丙酮酸在Pd/C催化剂上还原胺化合成DL-苯丙氨酸

以苯丙酮酸 (PPA)在Pd/C催化剂上还原胺化合成DL 苯丙氨酸 (Phe)。实验表明 :在 5 5℃、1 0MPa,苯丙酮酸初始质量浓度 ρ(PPA) =6 0g/L ,n(NH3)∶n(PPA) =3 0∶1 0 ,还原胺化 3h ,苯丙氨酸收率在 95 %以上 ,产品纯度w(DL Phe) >96 % ,并通过红外光谱、核磁共振对产物结构进行了确证     

四氢罂粟碱的拆分研究

以四氢罂粟碱外消旋体为原料,N-乙酰-L-亮氨酸、D-2-（2,4-二氯苯氧基）丙酸、N-乙酰-D-苯丙氨酸,N-乙酰-D-亮氨酸为拆分剂,通过结晶方法,拆分制备R-四氢罂粟碱,R型含量大于98％。通过比较,确定最优的拆分剂为N-乙酰-L-亮氨酸。