两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

蒜头果种子中水溶性蛋白的提取及其抗氧化性

采用饱和(NH4)2SO4法对蒜头果种子中水溶性蛋白进行逐级分离,并测定其体外抗氧化活性。结果表明:60%⁸0%饱和度的(NH4)2SO4对蒜头果种子中水溶性蛋白的分离效果最好,同时各级盐析蛋白组分均对超氧阴离子(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)有不同程度的清除能力,其中以40%80%饱和度的(NH4)2SO4对蒜头果种子中水溶性蛋白的分离效果最好,同时各级盐析蛋白组分均对超氧阴离子(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)有不同程度的清除能力,其中以40%⁶0%、60%60%、60%⁸0%和80%80%和80%¹00%3个(NH4)2SO4饱和度段的效果最为明显。结合十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱分析,分子质量为30.0 kDa和60.0 kDa左右的2种蛋白可能在蒜头果种子水溶性蛋白的抗氧化反应中发挥着重要作用。     

苹果中正己醇降解酶的提取

采用不同方法从苹果中提取正己醇降解酶,优选最适的提酶方式,并在该提取方式下研究酶的初步分离纯化。结果显示:采用丙酮粉法提酶较适合,且SDS-PAGE电泳结果表明不同方法提取粗酶液和经硫酸盐处理后的蛋白在条带数量和分布上都有所变化。30%~70%为适宜的(NH4)2SO4盐析浓度,然后对酶液进行梯度盐析,初步纯化后正己醇降解率为88.56%±0.9847%。     

利用(NH_4)_2SO_4分步盐析法从麦芽中初步分离极限糊精酶

文中对极限糊精酶的(NH4)2SO4盐析法进了研究。从大麦芽中萃取得到的粗酶液,采用(NH4)2SO4盐析法进行粗分级提取,绘制盐析曲线,确定盐析法纯化极限糊精酶的方案,并研究了各方案对极限糊精酶纯化纯度和得率的影响。研究结果表明:盐析曲线中饱和度分别为35%和80%时出现两个酶活峰,但80%饱和度时可以将绝大部分酶蛋白沉淀;分别采用一步法盐析(80%),二步法盐析(25%,80%),三步法盐析(25%,35%,80%)沉淀酶蛋白,其中三步法盐析可使极限糊精酶的纯度(A510/A280)达到1.635,纯化倍数和得率分别为8.8倍和49.5%,均优于其他两种方法。极限糊精酶盐析方案的优化可为其进一步分离纯化奠定基础。     

利用(NH_4)_2SO_4分步盐析法从麦芽中初步分离极限糊精酶

文中对极限糊精酶的(NH4)2SO4盐析法进了研究。从大麦芽中萃取得到的粗酶液,采用(NH4)2SO4盐析法进行粗分级提取,绘制盐析曲线,确定盐析法纯化极限糊精酶的方案,并研究了各方案对极限糊精酶纯化纯度和得率的影响。研究结果表明:盐析曲线中饱和度分别为35%和80%时出现两个酶活峰,但80%饱和度时可以将绝大部分酶蛋白沉淀;分别采用一步法盐析(80%),二步法盐析(25%,80%),三步法盐析(25%,35%,80%)沉淀酶蛋白,其中三步法盐析可使极限糊精酶的纯度(A510/A280)达到1.635,纯化倍数和得率分别为8.8倍和49.5%,均优于其他两种方法。极限糊精酶盐析方案的优化可为其进一步分离纯化奠定基础。     

梅花鹿胎衣中蛋白质的提取分离

以梅花鹿新鲜胎衣为原料,经过初处理,采用(NH4)2SO4盐析沉淀法提取水溶性蛋白,通过正交实验优化蛋白提取的盐析条件,探索蛋白质的最佳提取工艺:盐析时间为12h、盐析pH值为7、(NH4)2SO4饱和度为60%,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对其进行纯度鉴定.     

库拉索芦荟凝集素的分离与纯化

目的:对库拉索芦荟凝集素进行分离、纯化与初步鉴定。方法:库拉索芦荟经捣碎匀浆、盐析、透析后得到库拉索芦荟凝集素的粗提液;兔血凝集反应测试初步检测粗提液成分;将粗提液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和葡聚糖G-75凝胶柱层析,对分离组分进行分析;将洗脱液浓缩,再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和葡聚糖G-200凝胶柱层析对组分进行分析。结果:发现库拉索芦荟粗提液可以凝集兔血,证明在粗提液中具有芦荟凝集素成分。对粗提液检测、分离,获得三种蛋白质组分;经凝血活性检测,只有第一个蛋白峰具有凝集活性且凝集效果较粗提液进一步提高。再次分离纯化洗脱液,可知其由两个组分组成。结论:库拉索芦荟凝集素由两种组分组成。     

源于木霉TP-24的β-1,3-葡聚糖酶提取纯化研究

为实现不溶性酵母β-1,3-葡聚糖的酶法改性增溶,对源于木霉TP-24的β-1,3-葡聚糖酶分离纯化进行研究.结果表明,用含有2?Cl2的pH5.0醋酸缓冲液浸提固态发酵曲180 min,所得粗酶液经2%活性炭脱色、(NH4)2SO4分段盐析、透析浓缩、Sephadex G-100层析分离,获得了高酶活的蛋白峰Ⅰ和杂蛋白峰Ⅱ.浓缩含酶组分进行SDS-PAGE电泳分析,酶蛋白呈单一谱带,分子量近似为54.56 ku,酶比活力为342.95 U/mg,相对于粗酶液纯化了28.67倍,酶的回收率为45.15%.     

黑曲霉YY-22产酸性果胶酶的分离纯化

本文研究了从黑曲霉YY-22发酵产酸性果胶酶粗酶液中分离出较高纯度果胶裂解酶(PL)、聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶酯酶(PE)的方法,同时考察了主要组分PL在各分离阶段的纯化效果。依次采用硫酸铵盐析、疏水相互作用层析及离子交换层析对果胶酶PG、PE、PL进行分离。结果表明:果胶酶粗酶液中硫酸铵饱和浓度为65%时,沉淀中PL回收率最大,部分杂蛋白在盐析过程中被分离出来;沉淀复溶后经Phenyl-Sepharose FF疏水相互作用层析首先分离出PE活性组分,又经Q-Sepharose HP强阴离子交换层析分别得到PG和PL活性组分。果胶酶粗酶液中主要组分PL经三步纯化后的比活力达到79.37 U/mg蛋白,纯化倍数为13.30,活力回收为33.05%。较高纯度PL、PG、PE的获得,为进一步研究酶的基本性质及其在果蔬加工和葡萄酒中的应用奠定基础。     

大孔树脂筛分马兰中活性组分及体外抗脂质过氧化测定

通过大孔树脂富集马兰粗提液中黄酮及三萜类化合物并对其进行体外抗脂质过氧化测定。比较了15种树脂的静态吸附和解吸附,以及吸附动力学、吸附等温线等性能,从中筛选出兼具富集黄酮类和三萜类化合物的最佳树脂AB-8。进而选择AB-8柱动态富集马兰中活性组分并对其进行活性组分的抗脂质过氧化测定。通过不同体积分数乙醇溶液洗脱显示：20%洗脱组分中黄酮类化合物含量最高,达到62.7%,同时含有19%的三萜类化合物,其总得率达到51.5%,60%洗脱组分中三萜类化合物含量最高,达到58.5%,总得率达到22.3%。同时,对所得主要组分进行抑制过氧化脂质活性实验,结果表明：两主要组分对体外组织(心、肝、肾、脑)的脂质过氧化均有一定的抑制效果,其中对肝脏的抑制效果最为明显。