宇佐美曲霉L-336酸性蛋白酶2m~3罐中试发酵研究报告

宇佐美曲霉栗色变种Ｌ－３３６是分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌，在摇瓶小试工艺基础上进行２ｍ３罐发酵中试，结果表明：较优发酵培养基（％）为黄豆粉４．３，玉米粉１．０，鱼粉０．７，蚕蛹水解液１０，Ｎａ２ＨＰＯ４０．２，ＣａＣｌ２０．５，ＮＨ４Ｃｌ１．０，豆油１．６；风量为０～２５ｈ时１∶０．４ｖ／ｖ／ｍ，２５～５０ｈ时１∶１．０ｖ／ｖ／ｍ，５０ｈ后１∶１．３ｖ／ｖ／ｍ；接种量１０％，温度３１℃，搅拌转速２００ｒ／ｍｉｎ，发酵周期７５ｈ。在上述条件下，发酵酶活力稳定在５５００ｕ／ｍｌ左右。     

酶水解生蚝的探讨

以生蚝为原料，用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、复合风味蛋白酶等对生蚝进行水解，确定用复合蛋白酶和复合风味蛋白酶相互作用，进行水解为佳。其水解条件为：第一步用复合蛋白酶，温度５５℃，ｐＨ７．５，底物浓度３５％，酶与底物浓度比１．２５ｇ／ｋｇ，时间２小时；第二步用复合风味蛋白酶，温度５０℃，ｐＨ６．０，酶与底物浓度比１．２５ｇ／ｋｇ，时间８小时，其氨基氮生成率为４０．５％。用此水解液生产蚝油，营     

真菌酸性蛋白酶软化绵羊皮的研究

宇佐美曲霉粟色变种Ｌ３３６酸性蛋白酶是一种理想的毛皮软化剂，采用正交试验，对酸性蛋白酶软化条件进行了研究，结果表明较优的软化条件为：酶浓度４５μ／ｍｌ、温度３８℃、ｐＨ值２．５～３．０、软化时间８小时左右；同时也表明酸性蛋白酶用于毛皮软化效果远胜于中性蛋白酶     

高蛋白小麦胚水解的初步研究

本文初步研究了Ａｓ１３９８蛋白酶对高蛋白小麦胚的水解条件，正交试验优化水解条件的结果表明：ｐＨ７．０，温度５０℃，底物浓度９％，酶用量２０００－２５００ｕ／ｇ，时间４－６ｈ，水解高蛋白小麦胚效果较好。对水解液中的氨基酸含量也进行了测定。     

酶法水解文蛤肉的研究

以海产文蛤肉为原料，用酶水解获得复合氨基酸水解液。水解液中含有１８种氨基酸，牛磺酸，多种维生素及微量元素，酶水解的最适条件为：水解时间４－６ｈ、温度５０－５５℃，初始ｐＨ７．０，酶添加量１．５－２．０％。酶解后，游离氨基酸含量可达５４．６２ｍｇ／ｇ鲜文蛤肉，其中必需氨基酸占５０％以上，牛磺酸为２６６ｍｇ／ｇ鲜文蛤肉，蛋白质的水解率为５６．７８％。     

酶法水解猪血蛋白的研究

采用酶法开发了营养价值高而价格低廉的蛋白质资源－猪血。ＡＳ１．３９８中性蛋白酶对动物血的水解能力最强,胰蛋白酶次之,而木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶的水角能力最差。ＡＳ１．３９８中性蛋白酶水解猪血的最佳条件为,ｐＨ为７．５,温度为４０℃,酶与底物之比为８０００Ｕ／ｇ底物浓度的质量分数为８％,酶水解７ｈ,水解率可达４８．９％。     

生活物性肽——酷蛋白磷酸肽（CPP）的研制

摸索了２７０９碱性蛋白酶水解酷蛋白制备ＣＰＰ的最佳工艺条件：底物浓度１０％、用酶量１５００Ｕ／ｇ底物、反应温度４５℃、ｐＨ１０．５、反应时间１５０ｍｉｎ。采用选择淀淀法分离ＣＰＰ,在ｐＨ４．５添加１．１％ＣａＣｌ２（ｗ／ｖ）和５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品的Ｎ／Ｐ、得率分别为６．３９和１３．９４％。     

酶水解法制备大豆肽的研究

采用酶水解法，由大豆分离蛋白制备大豆肽。对五种蛋白酶水解大豆分离蛋白的特性进行了比较。筛选出水解能力最强的碱性蛋白酶，其最佳水解条件为：温度５５℃、ｐＨ１０．５、酶用量５％（Ｖ／Ｗ，相对于底物蛋白）、底物浓度５％（Ｗ／Ｖ）、反应时间６ｈ。水解度可达到３０％～４０％，产物平均肽链长度２．５～４．０。水解产物经超滤膜分离后的混合物溶解性良好，ＮＳＩ值达９８％以上。水解产物有很强烈地的苦味，用２０％的活性炭粉可以有效地吸附脱苦。脱苦的最佳条件是：温度５０℃～５５℃、ｐＨ４．０～４．５、活性炭／蛋白质＝０．１～０．２／１（Ｗ／Ｖ），慢速搅拌２ｈ。     

大豆蛋白抗氧性肽的研究

综述近期国内外大豆蛋白抗氧性肽研究的进展。论述大豆蛋白经酸性蛋白酶ＡＰ水解，在水解反应ｐＨ值为３．０、反应温度５２℃、酶浓度Ｅ／Ｓ２５０μｇ／ｇ、底物浓度（固：液比Ｗ／Ｖ）１：８，水解时间６－８ｈ，最佳水解条件下进行，能制得抗氧化能力的多肽。大豆蛋白抗氧性肽的水解范围，控制水解度ＤＨ为１７％～１９％，分子量７００～１０００。在含油脂食品实物系中诱导期达２８天左右，对照试验诱导期为６天，表现了明显的抗氧化能力。     

低聚果糖合成酶──果糖转移酶的部分酶学性质研究

研究从土壤中筛选得到的黑曲霉ＡＳ００２３菌株所产的β－果糖转移酶的一些酶学性质。该酶的最适ｐＨ为５．０，最适温度为５０℃，有较好的热稳定性和较宽的ｐＨ（３．５～１０）适宜范围；并研究了１２种化学物质对酶活的影响和底物的特异性。结果显示，钴离子对该酶有一定的激活作用；底物分子越大其反应速度越慢。该酶的米氏常数Ｋ＿ｍ＝４７ｍｍｏｌ，葡萄糖是酶反应的竞争性抑制剂，其Ｋ＿ｉ＝３３０ｍｍｏｌ．当５０％（Ｗ／ｖ）蔗糖与酶在ｐＨ５．０和５０℃作用１６ｈ时，得到５２％（产物／总糖）低聚果糖。     

酶法水解甲鱼蛋白的研究

以鲜活无病甲鱼为原料，经蛋白酶水解后，再离心分离得蛋白水解液，进而制成鳖精口服液，通过正交设计试验，确定了蛋白酶适宜水解条件为：Ｔ＝５５℃，ｐＨ＝７．５，Ｅ∶Ｓ＝０．７％，水解时间为８ｈ，水解蛋白质收率达８１．４７％，水解液中含１９种氨基酸，其中游离氨基酸占总氨基酸的３３．３％，必需氨基酸占总氨基酸的３１．８％。     

酶法水解珍珠贝肉蛋白质的工艺探讨

研究了用双酶水解技术对马氏珠母贝肉进行水解的条件。结果表明：枯草杆菌中性蛋白酶：在ｐＨ６．５、温度４０℃、酶浓度３×１０３Ｕ／ｍｌ、Ｋ＋浓度０．１２％、水解时间３．０ｈ后；再用胃蛋白酶水解：ｐＨ３．０，温度６０℃，酶浓度４．５Ｕ／ｍｌ、水解时间３．０，最适底物浓度为原料与水比例１：３进行水解，蛋白质水解率为６６．２％。水解液可用于生产海鲜调味料及功能性蛋白饮料。     

酶技术开发动物血制取复合氨基酸营养液的研究

研究酶法开发营养价值高而价格低廉的动物血制取复合氨基酸营养液。ＡＳ１．３９８中性蛋白酶对猪血的水解能力最强,其水解作用最佳条件为：ｐＨ＝７．５,温度４０℃,酶与底物之比８０００ｕ／ｇ,底物浓度８％,水解时间７ｈ,水解率可达４９．７％。水解液中含１８种氨基酸．游离氨基酸占总氨基酸的２５．２％,其中必需氨基酸占总氨基酸的４０．９％。肽的分子量分布在１７,５００道尔顿以下,按照ＦＡＯ／ＷＨＯ建议的必需氨基酸模式进行调配后可得配方合理的氨基酸营养液。     

固太发酵柠檬酸渣转化为多酶蛋白饲料的研究

研究了用黑曲霉Ａ１，Ａ１５和酵母Ｙ７固态发酵柠檬酸渣生产多酶蛋白饲料。在３０℃的最适温度下，３株菌种混合进行固体发酵，粗蛋白增加量（绝干）约为１６％－１８％，酸性蛋白酶活性５１３９ｕ／ｇ，纤维素酶活性达６１ｕ／ｇ，试验结果表明；该酸性蛋白酶在１００℃加热１ｈ有８０％的酶存活，系耐高温酸性蛋白酶。     

干制和保藏过程中枸杞β-胡萝卜素保存率的研究

研究了枸杞脱水干制过程中热烫时间和热烫温度、预处理、以及干制工艺条件对β－胡萝卜素保存率的影响，并对干制工艺条件进行了优化组合，优化组合条件如下：枸杞鲜果蒸汽热烫２分钟，用０．３％Ｎａ２ＳＯ３＋０．０３％Ｖｃ＋０．０４％ＥＤＴＡ－Ｎａ２溶液预处理１ｈ，在５０℃２０ｈ、６０℃１２ｈ、６５℃１１ｈ的干制工艺条件下进行脱水干制，β－胡萝卜素保存率可达８９．１％。此外，还探讨了包装材料颜色及保藏温度对枸杞干果β－胡萝卜素保存率的影响，结果表明：保藏温度对β－胡萝卜素保存率无显著影响，而包装材料的颜色对β－胡萝卜素保存率有显著的影响。     

茶多酚对菠萝蛋白酶的分离及特性的影响研究

本研究用从茶叶中提取的多酚类物质分离菠萝蛋白酶、井研究了菠萝蛋白酶与茶多酚结合后的性质、结果表明,用０．５％的茶多酚提取物对菠萝蛋白酶的沉淀回收率达７８％,茶多酚与菠萝蛋白酶的结合比为１∶６４３（ｍｇ∶ｕ）。等电聚焦电泳图谱表明菠萝皮汁中有６种同工酶组份．这６种酶组份均可与茶多酚结合形成沉淀而得以分离,结合后酶的等电点（ｐＨ３．６０,ｐＨ４．９０,ｐＨ５．３５,ｐＨ６．５０,ｐＨ７．８０,ｐＨ９．２５）、最适ｐＨ值（ｐＨ６．５～８．５）以及最适温度（６０℃）不改变,但酶对底物酪蛋白的亲和力下降（游离酶Ｋｍ＝８．１×１０￣６ｍｏｌ／Ｌ,结合酶Ｋｍ＝１．３９×１０￣５ｍｏｌ／Ｌ）。酶的稳定性有明显的提高,常温下的半衰期由游离酶的５天延长至２７天。酶稳定性的提高与茶多酚的抗氧化特性有关。     

短小杆菌酶促合成二肽甜味剂Aspartame

研究多种因素对短小杆菌酶催化Ｌ－天冬氨酸（Ｌ－Ａｓｐ）和Ｌ－苯丙氨酸甲酯（Ｌ－ＰｈｅＯＭｅ）合成二肽甜味剂Ａｓｐａｒｔａｍｅ能力的影响。结果表明，反应最适ｐＨ为６．０，最适温度为４０℃，反应１０ｈ，催化能力为０．４７５ｇＡＰＭ／ｇ菌体，产率８０．５％，收率８１．０５％。     

深层发酵灵芝生物工程技术与产品研究

研究了深层发酵灵芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　Ｌｕｃｉｄｕｍ）工艺条件;基质中强化锌（Ｚｎ）、硒（Ｓｅ）和测试中试菌种质量指标、最佳发酵条件：温度２８℃±１℃、时间７２ｈ、基质ＷＧ、ｐＨ值（最终）３．８左右、锌（Ｚｎ）、硒（Ｓｅ）。加入量分别为８ｍｇ／Ｌ、４ｍｇ／Ｌ     

黑曲霉固态培养生产纤维素酶的研究

黑曲霉突变株ＤＭ－１是一株产纤维素酶菌株，其中β葡萄糖苷酶活性特别高。采用粗纤维原料固体培养，发酵９６小时（培养温度３１℃），其滤纸酶活和β葡萄糖苷酶活分别为９５和１２００ｍｇ葡萄糖／ｇＤＭｈ。本试验系统研究了各种营养成份和培养条件对ＤＭ－１菌株产纤维素酶的影响。最适发酵培养基为：稻草杆（或麦杆）∶麦麸为６０∶４０、硫酸铵３．０、硫酸镁０．３、玉米浆３．０，加水２００％，自然ｐＨ；环境湿度８５％－９０％。酶反应最适温度和ｐＨ分别为５５℃－６０℃和ｐＨ５．０。酶ｐＨ稳定性较好，在ｐＨ３．０－８．０范围内处理１小时，残余酶活力在８５％以上，该酶经５５℃处理３０ｍｉｎ，剩余酶活力为８６．０％。     

绍兴腐乳毛坯中蛋白酶的检测

１．７５％ＮａＣｌ溶液可有效抽提林木毛霉菌丝体表面的蛋白酶，依此确立了腐乳毛坯中蛋白酶的检测法。该酶系在４０％以下２ｈ酶活稳定不变，６０℃ｌｈ能保持５８％活力；其最适作用温度和ｐＨ分别为５５～６０℃和６～７ｐＨ；ｐＨ稳定范围为４～７；ＮａＣｌ和ＣＨ＿３ＣＨ＿２ＯＨ对酶系有明显的保护作用。讨论了蛋白酶检测及其性质对腐乳工艺改进的指导意义。