转基因大豆DNA检测芯片的研究

为提高对转基因大豆的监督检测能力，研制了转基因大豆DNA检测芯片。根据转基因大豆(Roundup Ready)中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、NOSIEPSPE基因和内源Lectin基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIGdUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术，一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率。     

转基因玉米DNA检测芯片的研究

根据转基因玉米中所转入的外源基因,选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PAT基因和目的基因IVS2/PAT、CDPK/CryIA(b)、Maize genome/CaMV35S、PAT/CaMV35S1、Cry9C/CaMV35S!以及内源IVR基因设计特异性引物,采用多重PCR法对待测样品进行扩增,通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针,并制备基因芯片.在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时,比较了芯片检测的特异性和重复性,并对检测的灵敏度进行测试.结果表明,该方法具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达0.1%.     

可视芯片检测大豆、水稻和玉米中的转基因成分

本研究选取9种常见转基因食品外源基因,设计了引物对与探针,并制备可视芯片。通过PCR对样品核酸进行扩增,将扩增产物与固定于可视芯片的特异性探针进行杂交分析,验证了芯片的特异性和重复性,并对检测芯片灵敏度进行测试。该方法可以一次检测出5种的常见转基因植物,且实验结果表明该方法高效、准确、简便、高通量、实用性强,灵敏度可达0.1%,并摆脱了基因芯片在杂交结果分析阶段对荧光扫描仪的依赖,杂交结果明显直观。     

多重串联式PCR基因碟片技术检测转基因大豆GTS 40-3-2

建立多重串联式PCR(MT-PCR)的基因碟片技术用于转基因大豆GTS40-3-2的检测。针对GTS 40-3-2的常见外源基因NOS终止子、CP4-EPSPS、Ca MV35S启动子和大豆内源基因Lectin设计引物,同时针对外源基因插入位点的旁临序列设计品系特异性引物。首先进行一次循环数较少(15 cycles),引物浓度较低(0.1μmol/L)的高通量多重PCR,以均匀地扩增各基因模板,同时避免引物之间的竞争,然后利用巢式荧光定量PCR检测各个基因。根据熔融曲线分析结果,灵敏度高于普通荧光定量PCR法1个数量级。该方法能够快速、高通量、准确地检测转基因大豆GTS40-3-2中的多种转基因成分,并能对该品系进行分析,重复性好,适合转基因的高通量、定量检测,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2,具有较好的应用价值。     

烟草转基因检测方法的研究

通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260－280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动于,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类。并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量。     

散装即食食品中3种食源性致病菌多重荧光定量PCR检测方法的建立

该研究旨在建立散装即食食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR检测方法，根据沙门氏菌侵染上皮细胞表面蛋白的invA基因、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)基因、蜡样芽孢杆菌的cer A基因分别设计3对特异性引物与探针，并对体系中引物探针的浓度以及退火温度等反应条件进行优化筛选，建立多重荧光定量PCR检测方法，同时评估其特异性、灵敏性及重复性，并应用该方法检测散装即食食品样本中致病菌，同时与国标法比对。结果表明，建立的多重荧光定量PCR检测方法能特异性地扩增沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种目标菌，其他菌株均不扩增，灵敏度分别为4×10²、3×10²、2×10² cfu/mL，且批内和批间变异系数均小于2%，重复性和稳定性良好。同时用国标法和多重荧光定量PCR法对100份散装即食食品样本进行检测比对，多重荧光定量PCR法的阳性检出率略高于传统国标法，且检测时间大幅缩短。综上所述，建立的多重荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、快速准确，在食源性致病菌快速筛查方面具有良好...     

嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法的建立

建立一种多重PCR技术结合基因芯片检测方法,实现嗜肺军团菌15种血清型的快速、准确检测。根据嗜肺军团菌15种血清型的O抗原特异性基因设计并筛选合适的引物和探针,进行多重PCR扩增,制备寡核苷酸芯片。将多重PCR扩增产物与带有特异探针的芯片杂交。用扫描仪扫描,判定嗜肺军团菌的血清型。该基因芯片可特异性的检测嗜肺军团菌的15种血清型,具有良好的特异性,芯片纯菌DNA检测灵敏度为10ng。所建立的嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法特异性好,灵敏度高,具有较好的实用性。     

转基因大豆低密度基因芯片的检测方法研究

目的建立Roundup Ready转基因大豆（简称RRS）的基因芯片检测方法,探讨其在转基因大豆检测中的应用。方法根据大豆中所转入的外源基因,选择camv35s启动子、nos终止子和cp4epsps基因,以大豆内源基因lectin基因为内参照基因设计了引物和探针,并制备了核苷酸芯片;通过多重PCR对样品核酸进行扩增和荧光标记后,将PCR产物与芯片杂交,检测大豆样品中所含的外源基因,并评价方法的灵敏度。结果检测转基因含量不同的RRS标准参考物,结果显示：camv35s启动子、nos终止子、外源基因cp4epsps检测灵敏度均可达0．45％。结论本研究所建立的基因芯片检测方法有良好的灵敏度及可重复性,有助于实现转基因大豆的高通量、高灵敏的检测。     

应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌

建立一种运用多重聚合酶链式反应(PCR)结合基因芯片技术检测大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌5种食源性致病菌的快速、准确、灵敏的方法。分别选取编码大肠埃希氏菌的slt基因、沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、志贺氏菌ipaH基因和单核细胞增生李斯特菌inlA基因,并以细菌16S rDNA基因作为阳性对照,设计引物和探针,进行多重PCR扩增,产物与含特异性探针的芯片杂交。结果表明：该基因芯片可同时特异性地检测5种致病菌,多重PCR检测灵敏度为20pg,而DNA芯片检测灵敏度可达2pg;用所制备的基因芯片检测实际肉及肉制品样品,准确率高于传统培养法。所建立的基因芯片检测方法特异性好、灵敏度高,可为食源性致病菌的检测提供理想手段。     

四重PCR结合全自动电泳系统检测食品转基因成分

根据转基因食品中最常见的四种外源元件(CaMV35S启动子、NOS终止子、cry1Ab/cry1Ac基因、bar基因)的核苷酸序列,设计特异性检测引物,扩增产物大小分别为101、180、301、430bp,通过引物浓度、退火温度的优化,特异性、灵敏度测试,并结合微流体芯片全自动电泳技术,建立了同时检测这4个参数的四重PCR方法。结果表明,该方法可特异性地从复杂样品中检测出预期转基因成分,检测灵敏度达到0.1%。本方法特异性好,灵敏度高,适用于食品中转基因成分的快速筛查。     

实时荧光PCR方法检测转基因豆粕的研究

以美国、阿根廷和转基因大豆标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量PCR技术检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS终止子,确定了实时荧光PCR方法检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0.1%。     

抗草甘膦转基因大豆加工品的PCR检测研究

以进口抗草甘膦转基因豆粕、豆粉和中国脱脂大豆为材料,利用设计的特殊引物,建立了PCR技术定性检测抗草甘膦转基因大豆加工品的方法,成功检测出进口抗草甘膦转基因豆粕和豆粉的内源参照基因Lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS终止子,国产脱脂大豆仅检出内源参照基因Lectin,确定了此PCR技术检测抗草甘膦转基因大豆的灵敏度为0.1%,稳定性良好.     

抗草甘膦转基因豆粕PCR检测研究

以美国、阿根廷、印度和中国豆粕为材料,利用设计的特异性引物,建立了PCR技术定性检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因Lectin、Ca MV35S/CTP ofEPSPS边界序列和NOS终止子;从印度豆粕、中国豆粕中仅检出内源参照基因Lectin,确定了PCR技术检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0·5%,稳定性良好。     

转基因"华番一号"番茄的筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法

为给转基因植物监测提供技术支持，建立了转基因“华番一号”番茄筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。转基因“华番一号”的筛选PCR检测主要以转基因通用元件CaMV35S启动子和NOS终止子为目的基因片段，特异性PCR检测以转基因外源重组子的CaMV35S启动子和反义EFE基因的相邻序列为目的片段；实验同时设立番茄的LAT52基因为转基因番茄定性、定量PCR检测的内对照基因。在所建立的PCR检测体系中，定性PCR筛选和特异性检测的检测极限为68个拷贝，实时定量PCR方法的检测极限为3个拷贝；筛选定量．PCR检测的定量极限为3个拷贝，特异性定量PCR检测的定量极限为25个拷贝。最后通过对2个已知含量的转基因番茄“华番一号”混合试样的检测，证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性、定量PCR检测。     

PCR Detection of Genetically Modified Organisms: A Review

There are two common approaches for the detection of Genetically Modified Organisms (GMOs): DNA based methods, mainly founded on the Polymerase Chain Reaction (PCR), which detect genetically modified DNA sequences, and protein based methods, relying on immune assays (e. g. Enzyme‐Linked Immunosorbent Assay, ELISA). The latter detect and measure levels of proteins expressed by transgenic genes. Official standard tests, yet to come, will be based on these two methodologies. DNA based tests are now preferred for their sensitivity and their capability to detect a wider range of constructs. Protein‐based immune assay tests, although less sensitive, are quicker and require less lab skills. Collaborative study results put in evidence that PCR tests are generally well suited for detecting the presence of GMOs on a qualitative basis (yes/no). Difficulties arise when GMOs have to be quantitatively identified in food ingredients. Real‐Time, or kinetic PCR, points out quantification and interpretation limits when quantification has to be done on a very small total DNA amount. An essential requirement for PCR‐based techniques is the knowledge of the GMO‐specific DNA sequence target. Many labs find it difficult to keep up with the rate at which life science companies are creating new GMOs and the finding of adequate reference standards to be used as positive analytical controls.     

常见食用菌中转基因成分定性PCR检测方法的建立

将食用菌转基因研究用的质粒载体(p301-bG1)DNA,添加到19种常见食用菌样品中,作为模拟阳性样品,从中提取出DNA用于PCR分析,建立了常见食用菌中3个大小分别为165、398、599bp的外源基因(NOS、BAR、GUS)的特异性DNA片段的定性PCR检测方法,还进行了二重与三重PCR分析,并通过不同的模板DNA浓度对PCR扩增结果的影响,分析了PCR检测的灵敏度。     

应用依赖解旋酶DNA扩增技术检测转基因大豆

目的：基于依赖解旋酶DNA恒温扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）技术,建立快速检测转基因大豆的方法。方法：采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3 种外源基因和内源基因Lectin（大豆凝集素基因）为目的片段设计4 对特异引物,建立反应体系,通过HDA方法对内源基因和3 种外源基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对结果进行同源性分析。结果：建立了转基因大豆HDA检测法,检测特异性良好,3 种外源基因的检出限为0.2%。结论：转基因大豆的HDA检测方法具有普通聚合酶链式反应的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。     

食品中转基因成分的PCR筛选检测方法

对 3种常用食品中转基因成分筛选检测方法的灵敏度及特异性进行了研究。试验结果表明 ,35S筛选方法的理论检测低限达 1 5copies,NPTⅡ筛选方法的理论检测低限达 5 0copies,NOS筛选方法的理论检测低限达 1 5 0copies。在不含转基因成分的材料中均未检测到以上 3个片断。     

PCR技术检测GMO酿造原料和啤酒的试验

利用PCR技术检测经遗传修饰的GMO啤酒原料、辅料和生产的啤酒，作为控制采购大麦、玉米、糖浆质量的手段，以监控啤酒生产的生物安全性。