中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

尼罗罗非鱼肠道碱性蛋白酶性质的研究

系统研究了尼罗罗非鱼肠道中碱性蛋白酶的特性,发现其最适pH为9·0,最适温度为60℃;此蛋白酶在pH6·0～10·0及60℃以下具有较好的稳定性,Ca2+及低浓度的Na+对碱性蛋白酶有一定的激活作用,而Mg2+、Ba2+、Al3+、Zn2+、Pb2+、Cu2+、Fe2+等金属离子对该碱性蛋白酶有不同程度的抑制作用;甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛、丙酮等有机溶剂对碱性蛋白酶有不同程度的抑制作用,抑制作用大小依次为甲醛丙酮乙醇甲醇异丙醇;20mmol/L丝氨酸蛋白酶抑制剂甲苯磺酰氟(PMSF)、10mmo/L金属蛋白酶抑制剂EDTA、5mmol/L巯基还原剂DTT分别抑制了89·9%、88·8%、70·6%的酶活力;通过抑制剂对酶活性的影响初步判断出罗非鱼肠道中碱性蛋白酶主要为一类丝氨酸类蛋白酶、金属蛋白酶以及以二硫键为活性中心的蛋白酶混合物。     

雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。     

芽孢杆菌NCB-01胞外蛋白酶酶学特性的初步研究

该实验对来自于渤海海域沉积物的芽孢杆菌NCB-01分泌的胞外蛋白酶的酶学特性进行了初步研究。结果表明,该蛋白酶的最适作用温度为60 ℃,最适pH值为8.0,在50 ℃以下及pH值7.0～9.0的范围内酶稳定性良好。该酶具有较好的金属离子耐受能力,Fe2+、K+、Na+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对酶活均有不同程度的激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂（PMSF）能强烈抑制该酶的酶活性,表明该蛋白酶为丝氨酸碱性蛋白酶。非离子型表面活性剂Tween-20、Tween-80及Triton X-100和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对酶活均有较强的抑制作用。该酶具有良好的耐盐性。其米氏常数（Km）为1.11 mg/mL,最大反应速率（Vmax）为91.74 μg/（min·mL）,说明该碱性蛋白酶与酪蛋白的亲和力好,特异性强。     

嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.产胞外蛋白酶特性及其酶学性质

对嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长过程中的产酶特性做了初步研究,并研究了其胞外蛋白酶的理化特性。试验结果表明:嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长周期较长,从对数期开始分泌大量胞外蛋白酶;胞外蛋白酶的最适酶解反应温度是60℃;该蛋白酶具有较好的热稳定性,70℃条件下放置60 min,酶活力基本保持不变;最适反应p H为7.5,在p H 6.5~8.5范围内酶活力保持稳定;此蛋白酶对Na Cl耐受性不强,Na Cl浓度超过2 mol/L时,酶活力被显著抑制(P0.01);金属离子Ca2+对蛋白酶活力具有激活作用,可以增强蛋白酶热稳定性;Mn2+则对蛋白酶活力具有抑制作用,而K+与Mg2+对蛋白酶活力无影响;1.31 mol/L异丙醇以及1mmol/L DTNB对酶活力基本无影响,5 mmol/L的EDTA严重抑制其蛋白酶活力,1 mmol/L的PMSF则使其完全失活,说明此酶可能是一种金属依赖性的丝氨酸蛋白酶。     

芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶的酶学性质研究

为探索芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶在饲用酶制剂方面的应用,试验对其产酶情况及胞外酶的酶学性质进行了研究。结果显示,该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最高酶活性分别为(181.9±3.5)U/mL和(50.2±1.6)U/mL。蛋白酶和淀粉酶的最适作用温度范围分别为40℃～50℃和40℃～70℃,最适作用pH值为7和5～7。蛋白酶和淀粉酶经40℃～50℃热处理,以及在pH值为5～9的缓冲液中较稳定。蛋白酶被EDTA所抑制,属金属蛋白酶,金属离子(10mmol/L)Mg2+和K+对其有激活作用,Fe2+有抑制作用,而Fe2+对淀粉酶有一定的激活作用。     

单环刺螠内脏蛋白酶的分离纯化与酶学性质研究

以单环刺螠内脏为原料,对提取的蛋白酶的分离纯化条件及酶学性质进行研究。经硫酸铵纯化、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE-52阴离子交换层析得到单环刺螠内脏蛋白酶LPN2。SDS-PAGE电泳及高效液相色谱(HPLC)显示该酶纯度较高,分子质量约59 ku。其最适温度为50℃,最适p H范围6~8。丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF)、金属蛋白酶抑制剂(EDTA)、Ca2+、Zn2+和Ba2+抑制蛋白酶LNP2的酶活,Fe2+在低浓度下对该酶有激活作用。根据水解度、风味感官分析、酶解前后游离氨基酸、分子质量分布结果,蛋白酶LPN2与中性蛋白酶作用方式相似,推断蛋白酶LPN2具有内肽酶的特性。     

毛霉3039产蛋白酶特性研究

通过对毛霉蛋白酶活力的测定初步研究了毛霉蛋白酶的特性.研究表明,毛霉分泌蛋白酶的旺盛期在培养的第5至6天.毛霉蛋白酶的最适反应pH在4.0～6.0之间,且在pH4.0～6.0之间稳定性较好;毛霉蛋白酶的最适反应温度为45℃～55℃,50℃时酶活力最大,且在40℃以下热稳定性较好.1.0%NaCl、1.0%CaCl2、1.0%MnSO4和1.0%Mg2SO4对蛋白酶有激活作用,1.0%KCl、1.0%ZnSO4扣1.0%CuSO4则对蛋白有不同程度的抑制作用.     

毛霉AS3.2778脯氨酸氨肽酶的部分纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率并对蛋白水解物有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,实验中P采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析及凝胶层析等方法对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中部分纯化得到一氨肽酶组分,并对其性质进行了探讨。纯化的毛霉氨肽酶是一典型的脯氨酸氨肽酶,它对小肽N端的脯氨酸有非常强的水解能力;该氨肽酶在40～45℃、pH6.5有最大催化活性,在30℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所试验的几种蛋白酶抑制剂中,仅1 mmol/L的苯甲基磺酰氟(PMSF)对毛霉氨肽酶有抑制作用,由此说明纯化的毛霉氨肽酶可能是一种丝氨酸蛋白酶;常见金属离子对该氨肽酶活性的影响不明显;脱苦实验结果表明,纯化的毛霉氨肽酶对于大豆蛋白水解物的苦味有明显的去除效果。     

酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶的提取及部分性质进行了研究.结果表明硫酸铵分级沉淀的饱和浓度范围为40%～80%;该中性蛋白酶的最适作用温度为 60 ℃,最适pH 值为 7.0.40 ℃下酶稳定性较好,60℃下处理 20 min,粗酶中几乎检测不到酶活力;中性蛋白酶pH 稳定范围为 6.0～8.0.Km值为2.84 mg/mL;最大反应速度Vmax为0.32 mg/(min·mL).Mg2 对酶活有激活作用,Cu2 、Fe3 、Zn2 、Mn2 不同程度抑制酶活性,其中Cu2 、Fe3 强烈抑制酶活性.